竹子是多年生常绿植物,有着复杂的次生代谢,因此竹子含有许多生理活性成分,竹叶内含有黄酮类 化物、酚烯萜、甾类、生物碱等化合物1～4。淡竹和箬竹是重要的竹类资源,淡竹蔑性好,适于 加工,是重要的用材竹,其竹叶是加工的副产品;箬竹有特殊的香气,我国传统上用箬竹叶包粽子 。本研究用不同溶剂提取淡竹、箬竹叶活性成分,测定其抗菌作用,为竹子综合开发利用提供依据。1材料与方法1.1实验材料淡竹(Phyllostachysglauca)、箬竹(Indocalam ustessllatus)采集于浙江安吉竹博园;白色假丝酵母菌(Candida albicans)、酿酒酵母菌(Saccharom ycescerevisiae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)以上供试菌 购于浙江省微生物研究所;细菌固体培养基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、水1000mL;细菌液体培养基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g、水1000m L;酵母菌培养基,即萨布德培养基(Sabouraud's agar)葡萄糖40.0g、蛋白胨10.0g、琼脂15.0g、水1000m L;酵母菌液体培养基葡萄糖40.0g、蛋白胨10.0g、水1000m L。1.2竹子提取物制备乙醇-水提物采用周焱等人5方法,50g经干燥竹叶粉碎物加100m L萃取液(50m L乙醇+50m L水)冷浸萃取24h,过滤,提取液在旋转蒸发仪中减压蒸馏至50m L,使乙醇蒸发完,即为竹叶乙醇-水提取液,1m L提取液中含1g原料提取物,即1g/m L。丙酮提取物参照韩建华等人6方法,竹叶粉碎物20g于250m L三角烧瓶中,用丙酮于室温下浸提24h,过滤,减压浓缩后定容到20m L,使浓度相当于1g/m L;乙酸乙酯提取物依照檀东飞等人7方法,取50g竹叶粉碎物,加入500m L乙酸乙酯,常温下在摇床上摇动冷浸提取24h,过滤,减压浓缩为1g/1m L。将以上提取液置于0～4℃冰箱中备用。1.3菌悬液制备将5种供试菌在相应斜面培养基上活 化,把已活化的菌种接种到相应的培养基上,在恒温30℃培养24h,然后在试管里加入适量的 无菌水,再用手轻轻振动,即得菌悬液。1.4抑菌作用测定法采用滤纸片法测定抑菌作用。把滤纸用打孔器打成直径7mm滤纸片,然后灭菌,把灭菌好的滤纸浸泡在淡竹、箬竹的乙醇-水、丙酮、乙酸乙酯提取液中浸泡24h,将上述5种供试菌悬液各取0.2m L涂平板,制成含菌平板。淡竹、箬竹乙醇-水提取液滤纸片贴在含菌平板上,以无菌水浸泡的滤纸 作为空白对照,每皿2片,两种竹子丙酮、乙酸乙酯提取液浸出液分别以无菌水、相应溶剂作为对 照,每皿三片,各滤纸间距离均等,每种处理重复三次。细菌置于37℃下培养24h,真菌置于 30℃下培养48h,用十字交叉法测量抑菌圈直径,取平均值。2结果与分析2.1竹叶乙醇- 水提取物抑菌效果由于乙醇自身具有较明显的抑菌作用,供试菌无法在乙醇提取物中的试剂对照和 处理中正常生长,采用乙醇与水等比例混合提取,使酒精挥发干净,最后浓缩为乙醇-水提取物, 实际是水提取物。淡竹和箬竹水浸物对白色假丝酵母菌和酿酒酵母菌等5种供试菌有抑制作用,但 抑菌效果不明显;箬竹对白色假丝酵母菌和酿酒酵母菌抑菌效果不明显,对大肠杆菌、枯草芽孢菌 、金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用(表1)。2.2竹子丙酮提取物抑菌效果表2表明,淡竹的 丙酮浸出物对5种供试菌均表现出抑菌作用,对枯草芽孢菌和大肠杆菌有较强丝酵母菌>金黄色葡 萄球菌>酿酒酵母菌。2.3竹子乙酸乙酯提取物抑菌效果淡竹乙酸乙酯浸出液对5种供试菌均表现较强抑制作用,平均抑菌圈直径为23.7mm,但乙酸乙酯本身也对5种供试菌产生抑制作用;箬竹乙酸乙酯浸出物对5种供试菌均表现出较强的抑制作用,平均抑菌圈直径为22.8m m,乙酸乙酯本身对金黄色葡萄球菌明显抑制(表3)。3结论淡竹、箬竹乙醇-水提取物对5种微 生物有抑菌作用,抑菌效果不明显,淡竹和箬竹丙酮、乙酸乙酯提取液抑菌效果显著,乙酸乙酯的 抑菌效果最明显,表明脂溶性提取液比水溶性抑菌效果要强,说明丙酮、乙酸乙酯可以比较有效地 从竹叶中提取具有抑菌活性的化学成分,其中乙酸乙酯最好。三种溶剂竹叶提取液抑菌效果差异表 明,不同的溶剂提取竹叶对抑菌作用有影响,同一溶剂不同竹子提取液抑菌效果有差别,说明不同 竹种化学成分也存在差异。以上结果说明竹叶提取物具有较好的抑菌活性。我国有丰富的竹子资源 ,竹子加工产生大量的竹叶副产品,可以通过提取竹叶抑菌活性成分来提升竹子加工附加值,因此 开发利用前景广阔。菌种空白对照淡竹空白对照箬竹白色假丝酵母菌-11.0±0.5-8.2 ±0.1酿酒酵母菌-8.5±0.2-11.0±0.3大肠杆菌-8.5±0.3-13.0 ±0.2枯草芽孢杆菌-9.0±0.2-15.2±0.2金黄色葡萄球菌-11.0±0.4-13.0±0.4表1竹子水提取物的抑菌效果(抑菌圈直径mm)注:“-”表示无抑菌圈,下表同。不同溶剂对竹叶提取物抑菌作用的影响@杨卫东$中国林业科学研究院亚热带林业研究所!浙江富阳311400
@费学谦$中国林业科学研究院亚热带林业研究所!浙江富阳311400
@王敬文$中国林业科学研究院亚热带林业研究所!浙江富阳311400比较不同溶剂提取方法对 淡竹和箬竹抑菌能力的影响,采用抑菌圈法测定淡竹和箬竹不同溶剂提取物对5种供试菌的抑菌作 用。结果表明,淡竹、箬竹水提取物对白色假丝酵母菌、酿酒酵母菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌有抑制作用,抑制作用效果不明显;淡竹、箬竹丙酮提取物对5种供试菌均表现抑 制作用,淡竹丙酮提取物抑制效果为枯草芽孢杆菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌=酿酒酵母菌>白 色假丝酵母菌,箬竹抑菌效果是大肠杆菌>枯草芽孢杆菌>白色假丝酵母菌>金黄色葡萄球菌>酿 酒酵母菌;淡竹、箬竹乙酸乙酯提取物对5种供试菌均表现出较强的抑菌作用,淡竹乙酸乙酯提取 物平均抑菌圈直径为23.7mm,箬竹平均抑菌圈直径为22.8mm。两种竹叶水提取物抑菌 效果较差,丙酮、乙酸乙酯能比较有效地从竹叶中提取具有抑菌活性的化学物质,其中乙酸乙酯的 提取物抑菌效果最好,说明溶剂影响竹子提取物的抑菌能力。淡竹;;箬竹;;微生物;;抑制作用1刘力林新春金爱武等.苦竹各器官营养元素分析J.浙江林学院学报2004212172～175.
2毛燕.早竹和高节竹叶化学成分的初步测定J.浙江林学院学报1997144410～414.
3赖椿根马聿桓张斌等.箬竹叶水提取物化学成分研究J.浙江林学院学报1995122161～165.
4张英吴晓琴俞卓裕.竹叶黄酮和内酯的季节性变化规律研究J.林产化学与工业200222265～69.
5周焱刘暑艳邹丽芳.几种野生植物提取物抑菌作用研究J.中国野生植物资源200423230～32.
6韩建华祝木金冯俊涛等.27种植物抑菌活性初步筛选J.西北农林科技大学学报2002306134～137.
7檀东飞苏燕卿吴若菁等.棘托竹荪乙酸乙酯提取物的抑菌作用研究J.海峡药学20021451 01～103.、箬竹水提取物对白色假丝酵母菌、酿酒酵母菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄 色葡萄球菌有抑制作用,抑制作用效果不明显;淡竹、箬竹丙酮提取物对5种供试菌均表现抑制作 用,淡竹丙酮提取物抑制效果为枯草芽孢杆菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌=酿酒酵母菌>白色假 丝酵母菌,箬竹抑菌效果是大肠杆菌>枯草芽孢杆菌>白色假丝酵母菌>金黄色葡萄球菌>酿酒酵 母菌;淡竹、箬竹乙酸乙酯提取物对5种供试菌均表现出较强的抑菌作用,淡竹乙酸乙酯提取物平 均抑菌圈直径为23.7mm,箬竹平均抑菌圈直径为22.8mm。两种竹叶水提取物抑菌效果 较差,丙酮、乙酸乙酯能比较有效地从竹叶中提取具有抑菌活性的化学物质,其中乙酸乙酯的提取 物抑菌效果最好,说明溶剂影响竹子提取物的抑菌能力。淡竹;;箬竹;;微生物;;抑制作用1刘力林新春金爱武等.苦竹各器官营养元素分析J.浙江林学院学报2004212172～175.
2毛燕.早竹和高节竹叶化学成分的初步测定J.浙江林学院学报1997144410～414.
3赖椿根马聿桓张斌等.箬竹叶水提取物化学成分研究J.浙江林学院学报1995122161～165.
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5周焱刘暑艳邹丽芳.几种野生植物提取物抑菌作用研究J.中国野生植物资源200423230～32.
6韩建华祝木金冯俊涛等.27种植物抑菌活性初步筛选J.西北农林科技大学学报2002306134～137.
7檀东飞苏燕卿吴若菁等.棘托竹荪乙酸乙酯提取物的抑菌作用研究J.海峡药学2002145101～103.
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