黄芩苷灌胃后在兔眼晶状体中的药代动力学研究

黄芩为唇形科多年草本植物黄芩(Scutellariabaicalensis Georgi)的根。别名黄金茶、山茶根、烂心草。黄芩苷是黄芩的主要成分<1>,据文献介绍 ,黄芩苷具有多种药理作用,其主要作用是抗氧化、清除自由基、抗炎、抗病毒、抗过敏,并对免 疫、血管、神经等系统有保护作用。在眼科方面主要应用其抗病毒和调节免疫的功效,用来治疗病 毒性角膜炎<2>。黄芩苷在抗氧化方面也有较强的能力。如果黄芩苷能够透过血眼屏障进入眼内 ,那么它将可以用来预防和治疗白内障。本研究采取黄芩苷粉灌胃的给药方式,探讨其在白兔晶状 体中的药代动力学变化。现将结果报道如下。1材料与方法1·1仪器与试药高效液相色谱仪为A glilent1100,四元梯度泵(G1311A),可变波长紫外检测器(G1314A) ,自动进样器(G1311A),安捷伦色谱工作站,METTLERAE240分析天平,高速 台式离心机,超声波清洗器。黄芩苷标准品由中国药品生物制品鉴定所提供(批号110715- 200212)。黄芩苷粉(纯度为93%)及内标物对二甲氨基苯甲醛由黑龙江省药品检验所提 供。高效液相色谱仪所用试剂为色谱纯,水为重蒸水。1.2实验方法1.2.1实验动物:44 只健康日本大耳白兔(哈尔滨医科大学第一临床医学院动物室提供),体重2.0~2.5kg, 随机分为11组。禁食水12h后,以80mg/kg黄芩苷灌胃。分别于灌胃后0.25,0. 50,0.75、1、1.5、23、5、8、、12h采取耳缘静脉空气栓塞处死白兔。去除晶 状体囊,取全部晶状体置分析天平称重后制成10%的组织匀浆液,于-20℃冰箱备用。1.2 .2色谱条件:色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18不锈钢柱,5μm,200mm ×4.6mm(迪马公司)。流动相为甲醇∶0.2%磷酸溶液=47∶53,流速∶1ml/m in。紫外检测波长为279nm。柱温30℃。1.2.3样品处理:取不同时间组的白兔晶状体组织匀浆液200μl,加入含有内标的甲醇溶液300μl,混匀后超声波振荡10min,15000r/min离心10min,取上清50μl进样测定。1.2.4标准曲线制备:晶状体匀 浆标准黄芩苷液的稀释浓度为0.01、0.02、0.04、0.08、0.1、0.4、0. 8、1.0μg/ml,按上述样品处理方法和色谱条件进行预处理和测定。以峰面积比(黄芩苷 /内标)(Y)和浓度(X)进行线性回归,回归方程Y=0.7847X-0.0005(r= 0.9999)。线性范围0.01~1μg/ml。按信噪比为3计算最低检测浓度,黄芩苷在 晶状体中的最低检测浓度为5ng/ml。1.2.5回收率和精确度实验:分别配制0.01、0.1、0.8μg/ml3个浓度的晶状体加标准黄芩苷液,按“样品处理”项下操作并进行分析,求得黄芩苷在晶状体中的 回收率。在同一天和5天间(1批/天)对以上3个浓度的黄芩苷标准晶状体液分别处理5批后进 样分析,分析计算日内和日间精密度,结果见表1、2。表1黄芩苷回收率实验结果(-x±s)黄芩苷加入量μg·ml-1黄芩苷测得量(均值)μg·ml-1平均回收率%rs%0.010.009 98.8 1.40.1 0.099 99.1 1.20.8 0.796 99.5 1.8表2黄芩苷精密度实验结果(-x±s)黄芩苷加入量μg·ml-1日内精密度浓度μg·ml-1RSD%日间精密度浓度μg·ml-1RSD%0.01 0.009 1.4 0.009 1.50.1 0.099 1.2 0.093 1.50.8 0.796 1.8 0.787 1.32结果2·1色谱行为在此色谱条件下,内标的保留时间为11.7min,黄芩苷的保留时 间为14.2min,无其它峰干扰,方法的准确度和精确度符合生物样品的测定要求<3>(图 1)。图1色谱图A空白晶状体;B晶状体+黄芩苷标准液;C晶状体样本1内标;2黄芪苷2. 2白兔晶状体液黄芩苷含量黄芩苷灌胃后白兔晶状体中的不同时间点的黄芩苷质量浓度见表3,并 根据此浓度绘制药时曲线(图2)。表3不同时间点兔晶状体中的黄芩质量浓度时间(h)浓度( μg·ml-1)0.250.50.7511.52358、121.069±0.1534. 765±0.8761.627±0.5011.447±0.3951.611±0.4852 .975±0.8751.431±0.0870.862±0.328未测出图2白兔黄芩苷灌 胃后晶状体的药时曲线3讨论我们应用反向高效液相色谱技术对黄芩苷灌胃后在不同时间点的浓度 进行了测定。结果表明,黄芩苷能透过血-眼屏障,进入晶状体,由晶状体的药时曲线图(图2) 我们可以看出灌胃后0.5h后达高峰,峰值为(4.765±0.876)μg/ml,在0. 5~0.75h内迅速下降,0.75~1.5h之间缓慢下降,降至(1.611±0.485 )μg/ml后又有所升高,至2h时达第二个峰值(2.975±0.875)μg/ml,随 后逐渐下降,5h降至(0.862±0.328)μg/ml,8~12h血浆中黄芩苷的质量 浓度很微量,基本测不到。文献报道黄芩苷由于极性大不能直接吸收入血,在肠道菌群B2葡萄糖 醛酸苷酶作用下转化为其苷元黄芩素,黄芩素在小肠黏膜中的UDPG2葡萄糖醛酸转移酶作用下 转化为黄芩苷后部分吸收入血,部分又被黏膜细胞中的MRP2蛋白排到肠腔外;还有一部分黄芩 素直接吸收入血后被肝微粒体转化为黄芩苷及其他代谢物。晶状体中黄芩苷的药时曲线呈现双峰状 态可能与上述理论有关。但也可能与晶状体富含蛋白质有关。我们推测,晶状体中的某种蛋白对黄 芩苷具有亲嗜性,短时间的迅速结合之后又随着消除作用不断解离。这些假设都需要进一步的实验 证明。黄芩具有抗炎,抗病毒,抗氧化等许多功效<4~6>,有报道称黄芩苷与β-内酰胺抗生 素有协同作用,可以与β-内酰胺抗生素联合使用,用于治疗耐甲氧西林含葡菌(MRSA)引起 的感染<7>。黄芩苷滴眼剂滴眼后能减少炎症细胞PGE(2)的数量<8>。但全身给药后是 否能到达眼内,从而对眼部病灶起到直接作用在国内外期刊未见报道。我们的实验结果为黄芩苷全 身用药治疗眼内疾病提供了一些必要的实验数据。但在此浓度下黄芩苷是否能够达到有效的治疗作 用还需要详尽的实验数据支持。黄芩苷灌胃后在兔眼晶状体中的药代动力学研究@贾智艳$哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院!黑龙江哈尔滨150001
@崔浩$哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院!黑龙江哈尔滨150001目的通过黄芩苷灌胃 后,根据各组日本大耳白兔晶状体中黄芩苷浓度的变化,研究黄芩苷在晶状体中的药代动力学特点。方法44只日本大耳白兔随机分成11组,各组每只白兔按80mg/kg黄芩苷灌胃,在用药前(0h)和用药后0.25,0.50,0.75,1,1.5, 2,3,5,8,12h取晶状体,采用反向高效液相色谱法进行测定。结果黄芩苷浓度在15m in时为(1.069±0.153)μg/ml,0.5h时达高峰,峰值为(4.765±0 .876)μg/ml,在0.5~0.75h内迅速下降,0.75~1.5h之间缓慢下降, 降至(1.611±0.485)μg/ml后又有所升高,至2h时达第二个峰值(2.975 ±0.875)μg/ml,随后逐渐下降,5h降至(0.862±0.328)μg/ml, 8、12h晶状体中黄芩苷的浓度很微量,基本测不到。结论本方法灵敏、特异、准确,可用于眼 晶状体中黄芩苷浓度的测定;黄芩苷灌胃后能够通过血-眼屏障进入晶状体,这为黄芩苷全身用药 治疗眼部疾病提供了实验依据。黄芩苷;;兔;;晶状体;;药代动力学<1>李彤彤,李宏,侯茂君.黄芩化学成分及黄芩苷提取方法研究进展.天津药学,2002,14(3):7.
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