0引言少年儿童身体发育尚未完全,消化系统功能较弱,加之饮食不节,缺乏适当运动而致肠胃积滞的现象日益增多。根据传统名方结合现代中药技术开发生产的宝贝开胃颗粒(Baobei Kaiwei granule,BKG),由厚朴、炒苍术、炒枳实、陈皮、鸡内金、熟大黄、甘草等组成,临床 治疗小儿脾胃不和,肠胃积滞疗效显著,本文对其药效进行深入评价。1材料和方法1.1实验药物BKG由江苏扬子江药业集团提供,批号040104,1g干粉相当于5 g生药,试验前用蒸馏水配成所需浓度。香砂六君丸,河南宛西制药厂生产,批号040130,规格:60 g生药/200粒;阿司匹林,南京恒生制药厂生产,批号040617,规格:25mg/片;利舍平(利血平),上海医大制药厂生产,批号040520,规格1m l:1mg。1.2实验动物SD大鼠,体重200~220 g;KM小鼠,体重20~22 g,雌雄兼用,由南京军区医学动物实验中心提供,许可证号:SCXK(苏)2003-0004 。1.3大鼠胃液分析SD大鼠50只,雌雄各半,随机分为阴性对照组(等渗盐水),BKG组(0.5g/kg组、1 g/kg组和2 g/kg组),阳性对照组(香砂六君丸1.2 g/kg),每组10只,给药体积1 m l/100 g体重。实验前禁食12 h,自由饮水。大鼠用乙醚轻度麻醉,于剑突下沿腹白线切开长约2.5 cm的切口,结扎幽门和十二指肠结合部,立即十二指肠给药,缝合后送回饲养笼中。术后禁食禁水,5 h后颈椎脱臼处死<1>,进行下列测定。1.3.1胃液量测定大鼠处死后,取出胃,用刻度离心管收集大鼠胃液,3 000 r/m in离心15m in后,吸取上清液,计量胃液体积。1.3.2胃酸测定取胃液上清液2 m l加托弗氏及酚酞指示剂各2滴,用0.02mol/L NaOH溶液滴定,直至姜黄色出现为游离酸终点,继续用NaOH滴定至出现微红色不退为总酸度 终点。记录两次滴定所消耗的NaOH溶液的总毫升数,游离酸、总酸度和总酸排出量根据下列公 式计算:游离酸(mmol/L)=游离酸滴定终点消耗的NaOH体积×10
总酸度(mmol /L)=两次滴定消耗的NaOH体积×10总酸排出量(μmol/L)=总酸度×每小时胃酸量1.3.3胃蛋白酶测定采用Meet毛细玻管法,将内径1~2mm的毛细管截成10cm长,洗净烤干,利用毛细管虹吸作用灌满蛋清,确保无气泡,置入85℃热水中使蛋白凝固,置入冰箱备用。实验时,取胃液上清液1m l置入三角瓶中,加0.05 mol/L盐酸15m l摇匀,置入蛋白管2根,塞好瓶口。37。C温箱中孵育24 h后取出蛋白管,用游标卡尺测量其两端透明部分长度,四端之和求平均值<1>。胃蛋白酶活性计算公式如下:胃蛋白酶活性(活性单位/m l)=平均值2×161.4胃排空实验KM种小鼠50只,雌雄各半,随机分为阴性对照组(等渗盐水),BKG组(1 g/kg组、2 g/kg组和4 g/kg组),阳性对照组(香砂六君丸2.4g/kg),每组10只,试验前禁食12 h,自由饮水。以0.2m l/20 g体重皮下注射给药,40 m in后每只小鼠灌胃给0.1%的甲基橙溶液0.2m l,20m in后颈椎脱臼处死,剖腹取胃置于小烧杯中,加10 m l蒸馏水,沿胃大弯剪开胃,将胃内容物充分洗于蒸馏水中,用NaHCO3调pH至6.0~6.5,倒入刻度离心管,2 000r/m in离心10m in,取上清液用UV-754型紫外分光光度计在420 nm处测光密度,测得的光密度为胃甲基橙光密度。以0.1%甲基橙0.2 m l加10 m l蒸馏水作对照,根据下列公式计算甲基橙胃残留率<1>,基数甲基橙光密度(A)为1.011 。甲基橙胃残留率=甲基橙光密度(A)基数甲基橙光密度(A)×100%1.5肠推进实验实验分组同1.4,小鼠禁食24h后,以0.5m l/20 g灌胃给药,40m in后灌胃给5%碳末和10%阿拉伯胶制成的混悬液0.2 m l/20 g,20m in后颈椎脱臼处死,切开腹腔分离肠系膜,剪取幽门至回肠部的肠管置于托盘上,轻轻将小肠拉直 ,测量十二指肠至回肠末端的长度为小肠总长度,幽门至碳末前沿距离为碳末推进长度。根据下列 公式计算碳末推进百分率<2>:碳未推进百分率=碳末推进长度小肠总长度×100%1.6健脾实验小鼠实验分组同1.4,每组20只。连续7d皮下单点注射利舍平注射液(1 m l/mg)0.2m l/kg,同时各组分别以0.5 m l/20 g灌胃给受试物或对照物,于末次给药后1 h分别进行常压耐缺氧和抗疲劳游泳实验<3>。同时设立正常对照组(不经利舍平注射的动物)。1.6.1常压耐缺氧实验末次给药后1 h,将小鼠置入盛有15 g钠石灰的广口瓶内,用凡士林涂抹瓶口使之密闭,立即计时,以呼吸停止为指标,记录小鼠因缺氧死亡的时间。1.6.2抗疲劳游泳实验玻璃缸内水深20 cm,水温(20±0.5)℃,在小鼠尾部负2 g的重物,末次给药后1 h时,将小鼠分别置入玻璃缸内游泳。当小鼠头部沉入水中10 s不能浮出水面者为体力耗竭,即刻计时为小鼠游泳时间。1.7统计学方法采用SPSS 12.0统计软件处理,实验数据以均数±标准差(x±s)表示,均数比较采用t检验。P≤0.05为差异有显著性统计学意义。2结果2.1对胃功能的影响BKG 3个剂量组的胃液量、总酸度、总酸排出量与等渗盐水组相比显著增加,胃蛋白酶活性无明显差异,提示BKG能明显促进胃液和胃酸的分泌,促进作用随剂量的增加而增强。表1 BKF对胃功能的影响Tab le 1 E ffects of BKG on the gastric function组别n胃液量(m l)游离酸(mmol/L)总酸度(mmol/L)总酸排出量(μmol/L)胃蛋白酶活性(活性单位/m l)对照组10 9.33±1.69 106.6±8.19 118.22±12.14 220.60±42.54 236.00±21.44BKG组0.5 g/kg组10 11.50±1.21**107.2±8.23 132.94±18.92*305.76±32.16**237.23±23.69 1 g/kg组10 12.41±1.95**108.9±8.47 134.68±12.52**334.28±41.78**247.16±21.34 2 g/kg组10 12.74±2.40**109.6±8.19 138.82±18.60**353.71±52.00**247.33±24.16香砂六君丸组10 11.09±1.91*107.7±14.66 133.70±15.92*296.55±40.44**241.84±25.57与对照组比较,*P<0.05,**P<0.012.2对胃排空的影响BKG 2 g/kg以上小鼠胃甲基橙A值明显低于对照组(P<0.05),表明BKG 2g/kg以上能明显促进胃排空。表2 BKG对胃排空的影响Tab le 2 E ffect of BKG on the gastric emptying组别n胃甲基橙(A值)甲基橙残留率(%)对照组10 0.276±0.100 27.30±14.35BKG组1 g/kg组10 0.145±0.180 14.35±17.35 2 g/kg组10 0.144±0.164 14.31±12.27*4 g/kg组10 0.122±0.189 12.03±16.27*香砂六君丸组10 0.137±0.145 13.53±14.35*与对照组比较,*P<0.052.3对小鼠肠推进运动的影响BKG 3个剂量组的小肠碳末推进百分率均明显高于对照组,并随剂量增加而增强,表明BKG能促进小鼠肠推进运动。表3 BKG对小肠推进的影响Tab le 3 E ffects of BKG on the intestinal push ing movem ent组别n碳末推进长度(cm)小肠总长度(cm)推进百分率(%)对照组10 18.33±3.96 38.46±4.32 50.27±6.50BKG组1g/kg组10 26.77±3.90 40.03±4.66 66.87±6.87*2g/kg组10 31.70±5.33 42.97±5.49 73.77±7.14*4g/kg组10 31.47±6.75 41.17±5.52 76.44±6.23*香砂六君丸组10 22.36±5.17 41.67±4.82 53.66±8.31与对照组比较,*P<0.012.4健脾作用利血平造模后小鼠耐缺氧时间和游泳时间均明显短于正常小鼠(P<0.01)。BKG 3个剂量组连续7 d灌胃给药后,脾虚小鼠的耐缺氧和游泳时间与等渗盐水组相比明显延长(P<0.05),表明BKG具有强身健体作用。表4三组脾虚型小鼠常压耐缺氧和游泳实验的比较Tab le 4 The test of enduring m eager oxygen in natural atmos-pheric pressure and resisting the fatigue of sw imm ingof sp leen insuffic ient rats组别n耐缺氧时间(m in)
游泳时间(m in)对照组10 15.88±2.10 3.60±0.90BKG组1 g/kg组10 15.90±2.01 4.80±1.60 2 g/kg组10 18.90±2.90*5.02±1.80*4 g/kg组10 20.30±3.80*5.40±2.00*正常对照组10 25.60±2.20**9.80±2.10**与对照组比较,*P<
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