中药栀子是茜草科植物栀子(又名山栀)Gardenia jasm inoidesE llis的干燥成熟果实<1>。栀子性味苦、寒,入心、肝、肺、三焦经,具有清热利尿、泻火除 烦、凉血解毒之功效.中药处方中应用甚广。中药水栀子,又名伏尸栀子,是茜草科植物大花栀子(又名栀子花)Gardeniajasm inoidesE llis var.grand i-flora Nakai的干燥成熟果实<2>,水栀子性味苦、寒,一般作染料,药用多作外伤敷料。近年来, 由于栀子及其复方制剂临床应用广泛,市场上栀子生药供不应求,以致大量的栀子次品及水栀子生 药涌入市场,以次充好,以假乱真。黄氏等从形态上,根据长度与直径的比例鉴别栀子与水栀子< 3>。朱氏等从来源、性状、理化、显微鉴别<4>。付氏等发现山桅子与水桅子的药材性状、组 织构造和粉末特征有明显差异<5-6>,从而为两品种的鉴别提供科学依据。但这些方法操作较 复杂,有的特异性不强,我们拟以中药材细胞中普遍存在的,受遗传基因控制的蛋白多肽分子为指 标,用高效毛细管电泳(HPCE)来探索和论证鉴别栀子的可行性。1材料与方法1.1栀子样 品的采集所有正品栀子和伪品栀子的样品,均由中国中医科学院中药研究所黄璐琦研究员鉴定(见 表1)。表1样品采集的地点和数量序列号样品名采样地采样数1栀子河南省南阳县172栀子江 西省新干县93栀子江西省抚州54栀子江西省樟树245水栀子江西省樟树86水栀子江西省新干县吴城乡117水栀子江西省新干县中药材基地98水栀子江西省抚州91.2仪器与试剂美国BIO-RAD公司B ioFocusTM型高效毛细管电泳仪,配有紫外扫描检测器,熔融石英毛细管75μm×50 cm(河北永年光纤厂)。所用试剂均为分析纯。1.3电泳条件电解缓冲液为50 mmol/L硼酸盐溶液(pH8·5);电压为25 kV;温度20℃;紫外检测波长200nm;重力进样,时间3 s。开机后先用0.1 mol/L氢氧化钠冲洗毛细管2 m in,再用去离子水冲洗5 m in,然后用缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样,每2次进样之间设定0.1 mol/L氢氧化钠冲洗毛细管2m in,再用去离子水冲洗3 m in,然后用缓冲液冲洗5m in。1.4样品溶液的配制取生药样品0.5 g,加入蛋白提取液5 mL,在冰浴中研磨成匀浆状,转移至离心管内,以5 000 r/m in离心20 m in,取上清液备用。Tris-甘氨酸提取液:Tris 0.6 g,甘氨酸2.9 g,加蒸馏水溶解至1 000mL;碱性蛋白提取液:Tris-HCL 0.1 mol/L,抗坏血酸56.8 mmol/L,巯基乙醇10 mmol/L,pH 8.0;酸性蛋白提取液:柠檬酸80 mmol/L,Na2HPO432 mmol/L,抗坏血酸5 mmol/L,巯基乙醇10 mmol/L,pH2·8。2结果(1)在酸性提取液中,栀子样品在5.0,5.2,6.2,6.3,7.4,9.8,10.6,13.8 m in处各有一吸收峰,其中5.0,5.2,6.2,6.3,7.4,10.6 m in为强吸收峰;而水栀子在5.0,5.2,6.2,7.40,10.6,13.8 m in处各有一吸收峰,其中5.0,5.2,7.4,10.6 m in为强吸收峰。(2)在中性提取液中,栀子样品在5.0,5.2,6·4,7.2,13.7 m in处各有一吸收峰,其中5.0,6.4,7.2 m in为强吸收峰;而水栀子在5.0,5.2,6.2,7·2,9·6,10.8,13.7 m in处各有一吸收峰,其中5·0,6·2,7.2,9.6,13.7 m in为强吸收峰。(3)在碱性提取液中,栀子样品在4.8,5.0,5.3,6.3,7.2,8.5,10.5,12.2,13.6,14.0,m in处各有一吸收峰,其中5.0,6.3,10.5 m in为强吸收峰;而水栀子在4.8,5.0,5.3,6.3,7.2,8·6,9.4,10.6,12·2,13.1,13.8,13.9 m in处各有一吸收峰,其中5.0,6·3,7.2,10.6,12.2,13·8 m in为强吸收峰。综合3种提取液的图谱,可以看出栀子与水栀子酸性提取液的HPCE图谱基本一 致,而中性提取液和碱性提取液的HPCE图谱有一定差异,容易加以区别。结果见图1、图2。 3讨论HPCE是近年来迅速发展起来的一种重要分离技术,已在多肽、蛋白、核酸、手性化合物 等生物活性物质的分离分析方面显示了极为广阔的前景<6>。胡氏等报道提取莬丝子种子植物蛋 白用HPCE法进行生药鉴定,结果表明不同种间成分和含量上存在明显差异,认为根据种子植物 蛋白的电泳图谱,可有效地鉴别莬丝子的来源<7>。许多学者报道了对酸枣仁及其混淆品,鸡内 金与鸭内金,枸杞子,三七及其混淆品,采用HPCE进行鉴别<8-11>。结果表明种间区别 较明显,认为该方法速度快,分辨力强,重现性好。A、D碱性蛋白B、E中性蛋白C、F酸性蛋白图1栀子蛋白多肽HPCE指纹图谱A、D碱性蛋白B、E中性蛋白C、F酸性蛋白图2水栀子蛋白多肽H PCE指纹图谱应用HPCE对栀子和水栀子蛋白检测结果看,栀子及其水栀子在3种提取液中的H PCE吸收峰有明显的差异,鉴别其他样品结果可重复,故本实验结果可供栀子及其水栀子的鉴别 作参考。栀子及其混淆品水栀子的蛋白高效毛细管电泳法鉴别@冯成强$北京师范大学资源学院中药资源与资源药物研究所中药资源保护与利用北京市重点实验室!北京100088
@张义玲$北京师范大学资源学院中药资源与资源药物研究所中药资源保护与利用北京市重点实验室!北京100088
@张文生$北京师范大学资源学院中药资源与资源药物研究所中药资源保护与利用北京市重点实验室!北京100088
@孟繁蕴$北京师范大学资源学院中药资源与资源药物研究所中药资源保护与利用北京市重点实验室!北京100088
@韩建萍$北京师范大学资源学院中药资源与资源药物研究所中药资源保护与利用北京市重点实验室 !北京100088目的探求更便捷、精准的栀子及其伪品水栀子的鉴定方法。方法采用高效毛细 管电泳法(HPCE)对栀子及其伪品水栀子蛋白多肽进行分析。结果栀子及其伪品水栀子蛋白多 肽高效毛细管电泳图谱有明显的差异,重复性良好。结论高效毛细管电泳可作为栀子及其伪品水栀 子的鉴定方法。栀子;;水栀子;;高效毛细管电泳;;生药鉴别<1>国家药典委员会.中华人民共和国药典(2005年版,一部)
.北京:化学工业出版社.2005:173.
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<11>侯连兵,陈振德,陈志良,等.三七及其混淆品的蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别. 中草药,2000,31(11):859-860.究所中药资源保护与利用北京市重点实验室 !北京100088目的探求更便捷、精准的栀子及其伪品水栀子的鉴定方法。方法采用高效毛细 管电泳法(HPCE)对栀子及其伪品水栀子蛋白多肽进行分析。结果栀子及其伪品水栀子蛋白多 肽高效毛细管电泳图谱有明显的差异,重复性良好。结论高效毛细管电泳可作为栀子及其伪品水栀 子的鉴定方法。栀子;;水栀子;;高效毛细管电泳;;生药鉴别<1>国家药典委员会.中华人民共和国药典(2005年版,一部).北京:化学工业出版社.2005:173.
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<9>陈振德,许重远,谢立,等.蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别鸡内金与鸭内金.中药材,200
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