贝母类药材系中国药典收载品种<1>,具有清肺,止咳除痰作用。用于肺热咳嗽,痰多<1>。西 贝素为贝母类药材的主要药效成分之一<2-3>,原质量标准没有西贝素含量测定指标。控制西 贝素的含量对于提高贝母类药材的内在质量至关重要。本实验试图采用HPLC-ELSD测定贝 母类药材的含量,为其质量标准中增加主要有效成分的含量测定方法提供参考。1仪器和试药HITACHI高效液相色谱仪;PumpL-7110;All-tech 500蒸发光散射检测器(ELSD,美国);TECHOMPN-2000色谱工作站;YCQ-300超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司);Sartorius Bp211D型电子天平;西贝素(自制,98%,面积归一法测定);乙腈为色谱纯,水为双蒸水 ,其他溶剂均为分析纯。伊犁贝母、川贝母、平贝母、新疆贝母均购自西安万寿路药市,经西北大 学王亚州教授鉴定为合格药材。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:KromasilC18柱 (250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水-三乙胺(26:74:0.06);流速:1.0ml/min;柱温:室温;检测器参数,漂移管温度:104℃,氮气流速:2.4l/min。2.2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的西贝素对照品25mg置25ml量瓶 中,加甲醇溶解并稀释至刻度的储备液,配制成质量浓度为0.202mg/ml的西贝素对照品 溶液。2.3供试品溶液的配制经粉碎(过4号筛)、60℃干燥2h的贝母药材粉末2g,加氨 水200μl,氯仿:甲醇(8∶2)5.0ml,混匀,超声处理25min,放置过夜。滤过,滤液蒸干残渣用甲醇溶解,定容于5ml容量瓶中,0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。2.4线性关系考察分别精密吸取西 贝素对照品溶液2.0、4.0.、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0μl进样。 依上述色谱条件测定,以西贝素峰面积为纵坐标,西贝素对照品的进样量为横坐标,绘制标准曲线 ,得回归方程为Y=859888X-261722,r=0.9991,线性范围为0.404 μg~2.828μg。2.5精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μl,按上述条件连续进 样5次,结果西贝素平均峰面积的RSD为1.6%(n=5)。2.6重复性试验取伊贝母药材 0.5g“3.2”项下方法平行制备五份溶液,分别进样测定,结果西贝素的平均含量为174 .2,RSD为1.23%。2.7稳定性试验精密吸取上述供试品溶液10μl,于0、2、4、6、10、16、24h进样,结果西贝素峰面积RSD为0.89%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。2.8加样回收率试取已知含量的伊贝母1g,60ml共6份,按低、中、高3个浓度分别加入已配好的西贝素对照品溶液2 ml,2.5 ml,3 ml,每个浓度点作两份,按“3.2”项下方法制备样品液,按上述色谱条件测定西贝素的含量, 计算回收率,分别为97.1%、96.6%、96.8%、RSD分别为2.3%、1.4%、 1.2%。2.9样品测定取本品按上述方法制备供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液和西贝素 对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪中,按上述色谱条件测定,按外标法计算供试品溶液 中的西贝素含量,结果见表1及图1。表1贝母类药材类中西贝素的测定结果(n=4)批号含量(μg·g-1)RSD(%)伊贝母050902176.5 0.74川贝母050503 135.3 1.35新疆贝母050711 145.7 0.58平贝母050809 100.4 1.33图1对照品(A)、贝母药材(B)色谱图1.西贝素(6.8min)3讨论蒸发光散射 检测器(ELSD)是新的一种质量型检测器,对不易挥发的化合物,无论有无紫外吸收均能检测 。我们选择该检测器对贝母类成药中的异甾体生物碱西贝素进行HPLC直接分析,结果表明检测 灵敏度理想,且建立了贝母类药材的质控标准和评价指标。用反相高效液相色谱法分析生物碱常用 离子对色谱法和离子抑制色谱法。前者通常是向流动相中加入少量缓冲盐或表面活性剂;后者则向 流动相中加入少量弱碱或缓冲盐,调节流动相的ph值,抑制组分的解离,改善峰形。显然离子对 色谱法不适于本研究,因蒸发光散射检测器要求流动相必须能在一定的漂移管温度下完全蒸发,若 在流动相中加入缓冲盐或表面活性剂则均会导致检测器响应值本底增大,灵敏度下降。因此我们选 择向流动相中加入三乙胺的离子抑制色谱法。结果表明,在优化的流动相配比下西贝素达基线分离 ,而且峰形对称。整个分析可在10min内完成,适合常规分析。蒸发光检测器测定贝母类药材中西贝素的含量@岳斌$陕西中医学院!2003级研究生陕西咸阳712046
@张明$陕西中医学院!2005级研究生陕西咸阳712046
@李筱$陕西中医学院药学系药理基地!陕西咸阳712046目的建立贝母类药材中无紫外吸收的 活性异甾体生物碱西贝素的ELSD测定方法。方法蒸发光散射检测器法。结果西贝素的线性范围 为0.404μg-2.828μg;低、中、高浓度回收率分别为97.1%、96.7%、9 6.8%;最低检测限为0.201μg。结论本法快速、简便、灵敏和分离度好,适用于贝母类 药材中西贝素的含量的测定。贝母;;西贝素;;高效液相色谱法;;蒸发光散射检测法<1>国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部
.北京:化学工业出版社,2005.25,95.
<2>李萍,刘理南,徐国钧.12种贝母的西贝素含量测定.中草药,1991,22(5):205.
<3>赵德永.4种川贝母的总皂苷、总生物碱及西贝素的含量测定.中国中药杂志,1994,19(2):71.
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