中药益母草为唇形科益母草属植物(Leonu-rus japonicusHoutt.)的干燥地上部分,性味苦、辛、微寒,归肝、心包经。具有活血 调经、利尿消肿的功效,是中医妇科良药。作者从益母草的地上部分分离得到5个化合物,分别鉴 定为5,7,3′,4,′5′五甲氧基黄酮(5,7,3,′4,′5′pen-tameth oxyflavone,Ⅰ)、汉黄芩素(wogonin,Ⅱ)、洋芹素7O葡萄糖苷(apigenin7Oglucopyra-noside,Ⅲ)、大豆素(daidzein,Ⅳ)、槲皮素(qu ercetin,Ⅴ)。其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ为首次从益母草属中分离得到,Ⅲ、Ⅴ为首次从本种植物中分离得到。1仪器与材料瑞士BrukerARX 300核磁共振仪测定(TMS内标),Yanaco MP S3显微熔点仪(温度未校正)。柱色谱硅胶(50~79μm,青岛海洋化工有限公司),Sephadex LH 20(Amersham Pharma-cia Biotech AB),ODS(Merk公司)。实验所用试剂、溶剂均为分析纯。药材由山海关制药厂提供,由本校中药学教研室孙启时教授鉴定。2提取分离益母草地上部分干燥粉末10 kg用体积分数为95%的乙醇提取3次,合并滤液,减压回收乙醇,得干浸膏475 g,加3 L水混悬,分别用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。其中乙酸乙酯层30 g经硅胶柱色谱,氯仿甲醇系统梯度洗脱,根据TLC合并共得到18个组分。组分1(0·5 g)经硅胶柱色谱,环己烷乙酸乙酯系统梯度洗脱得化合物Ⅰ(3 mg);组分2(2 g)经硅胶柱色谱,石油醚丙酮系统梯度洗脱得到化合物Ⅱ(15 mg);组分6(2·5 g)经Sephadex LH 20柱色谱,甲醇洗脱(按每份10 mL收集),合并流分31~37,甲醇重结晶得到化合物Ⅳ(5 mg);组分10(1 g)通过Sephadex LH 20柱,甲醇洗脱(按每份10 mL收集),合并21~27流分回收溶剂得化合物Ⅴ(6 mg),组分12经ODS柱色谱,体积分数为50%甲醇洗脱得化合物Ⅲ(20 mg)。3结构鉴定化合物Ⅰ:白色细针状结晶(丙酮),mp 196~198℃,盐酸、镁粉反应阳性,推测为黄酮类化合物。1H NMR谱(300 MHz,CDCl3,δ)上3·92、3·94、3·96、3·96、3·98(各3H,s)为5个甲氧基信号。6·40(1H,d,J=2·1 Hz)、6·58(1H,d,J=2·1 Hz)推测为黄酮A环6位和8位质子,且A环为5,7二取代。7·09(2H,s)归属为2′ 和6′位两个质子信号,6·64(1H,s)归属为3位质子信号。经与文献<1>对照,确定化合物Ⅰ为3′,4′,5,5′,7五甲氧基黄酮(3′,4′,5,5,′7pentamethoxy-flavone)。化合物Ⅱ:黄色针状结晶(CHCl3),mp 190~193℃,盐酸镁粉反应呈樱红色,Molish反应阴性,254 nm下有蓝色荧光,硫酸显色呈黄色,由以上信息推测此化合物为黄酮苷元。1H NMR(300 MHz,DMSOd6,δ)谱中12·52(1H,s)为5位羟基氢信号,10·84(1H, s)为7位羟基氢信号,8·07(2H,m)、7·62(3H,m)为黄酮苷元未取代B环氢 信号。此外的3个单峰中的7·02(1H,s)归属为3位氢信号、6·32(1H,s)则为 A环上的氢信号、3·86(3H,s)为连在6位或8位的甲氧基信号。至此,此化合物可推测为5,7二羟基8甲氧基黄酮或5,7二羟基6甲氧基黄酮。碳谱数据如下:δ162·9(C2)、δ104·3(C 3)、δ181·9(C 4)、δ156·2(C 5)、δ99·0(C 6)、δ157·3(C7)、δ127·7(C 8)、δ149·5(C 9)、δ103·7(C10)、δ130·8(C 1′)、δ129·1(C 2′,6′)、δ126·2(C 3′,5′)、δ131·9(C 4′)、δ60·9(OCH3)。与汉黄芩素(5,7二羟基8甲氧基黄酮)的1H及13CNMR谱对照基本一致<2>,故将化合物Ⅱ鉴定为汉黄芩素(5,7 dihydroxy 8 methoxyflavone,即wogonin)。化合物Ⅲ:淡黄色细针状结晶(MeOH),mp 226~228℃,盐酸镁粉反应阳性,Molish反应阳性,推测为黄酮苷类化合物,由酸水解及纸色谱确定为葡萄糖。1H NMR(300 MHz,DMSOd6,δ)谱上12·94(1H,s)为A环上5位羟基质子信号,6·43(1H,d,J=2·5 Hz)、6·82(1H,d,J=2·5 Hz)则归属为6位和8位质子。6·92(2H,d,J=8·7 Hz)、7·94(2H,d,J=8·7 Hz)归属为B环2′,3′,5′,6′四个质子信号,6·86(1H,s)则为3位质子信号,结合HMQC,5·04(1H,d,J=6·9 Hz)为糖端基质子信号,且为β构型。由此推测10·45(1H,s)为4′或7羟基质子信号,UV谱数据(MeOH:268、330 nm;MeOH+NaOAc:268、390 nm)说明为4′位羟基质子信号,则葡萄糖连在7位。13C NMR(75 MHz,DMSOd6,δ)谱上94·9、77·2、76·4、73·2、69·6、60·7 信号也说明所连糖为葡萄糖;经与文献<3>对照,确定化合物Ⅲ为洋芹素7O葡萄糖苷(apigenin7Oglucopyra-noside)。化合物Ⅰ~Ⅴ的结构式见图1。Fig.1 The structures of compoundⅠ~Ⅴ化合物Ⅳ:白色细针状结晶(MeOH),mp 195~198℃,盐酸镁粉反应呈阳性,推测为黄酮类化合物,由结晶颜色推测此化合物为二氢黄酮(醇)或异黄酮类化合物,或是甲氧基取代较多的不易形成长共轭链的化合物。结合1H NMR(300 MHz,CD3OD,δ)谱数据,6·00以下的高场区无信号,排除为二氢黄酮(醇)类的可能性,8·03(1H,d,J=8·8 Hz)、6·92(1H,dd,J=8·8,2·2 Hz)和6·84(1H,d,J=2·2 Hz)为典型的AMX偶合系统,且因8·03(1H,d,J=8·8 Hz)的质子处于较低场,将其归属为5位质子信号,则此AMX偶合系统处于A环。6·81(2H,d,J=8·6 Hz)和7·35(2H,d,J=8·6 Hz)归属为B环上的H 3′,5′和H 2′,6′质子信号。1H NMR谱中δ8·12(1H,s)为异黄酮2位氢信号。因氢谱所用溶剂为氘代甲醇,且1H NMR谱上无—OCH3及其他取代基信号,推测A、B环取代基为羟基。至此化合物Ⅳ推测为4′ ,7二羟基异黄酮类,与文献<4>中大豆素的核磁共振数据对照,基本一致,确定化合物Ⅳ为大豆素(daidzein,4,′7dihydroxyisoflavone)。化合物Ⅴ:黄色粉末(MeOH),mp>300℃,盐酸镁粉反应紫红色,推测为黄酮类化合物。1HNMR(300 MHz,DMSOd6,δ)谱上12·50(1H,s)和10·79(1H,s)分别为A环5位和7位羟基质子信号。6·18(1H,d,J=2·5 Hz,H 6)、6·42(1H,d,J=2·5 Hz,H 8)说明A环为5,7二取代;6·87(1H,d,J=8·8 Hz)、7·53(1H,dd,J=2·5,8·8 Hz)、7·67(1H,d,J=2·5 Hz)为典型AMX偶合系统。9·60(1H,s)、9·38(1H,s)和9·32(1H, s)分别为3,3′,4′位3个羟基质子信号,推测B环为3′,4′取代。经与文献<5>对 照,确定化合物Ⅴ为槲皮素(quercetin)。益母草的化学成分@蔡晓菡$沈阳药科大学中药学院!辽宁沈阳110016
@车镇涛$香港中文大学中医学院!香港新界沙田
@吴斌$沈阳药科大学中药学院!辽宁沈阳110016
@高慧媛$沈阳药科大学中药学院!辽宁沈阳110016
@吴立军$沈阳药科大学中药学院!辽宁沈阳110016目的分离、鉴定益母草(Leonurus japonicusHoutt.)提取物中的化学成分。方法采用硅胶柱色谱法、Sephadex LH 20柱色谱法等分离,并通过1H NMR1、3C NMR等谱学技术确定其结构。结果分离得到了5个黄酮类化合物,分别鉴定为5,7,3,′4,′5′五甲氧基黄酮(5,7,3,′4,′5′pen-tamethoxy flavone,Ⅰ)、汉黄芩素(wogonin,Ⅱ)、洋芹素7O葡萄糖苷(apigenin 7Oglucopyra-noside,Ⅲ)、大豆素(daidzein,Ⅳ),槲皮素(qu ercetin,Ⅴ)。结论其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ为首次从益母草属中分离得到,Ⅲ、Ⅴ为首次从本种植物中分离得到。益母草;;化学成分;;黄酮<1>AlanWF,John RL.Flavonoids fromMerrillia Caloxy-lon
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<2>Leslie JH,Guat LS,Keng YS.5,7-Dihydroxy-8-methoxyflavone fromTetracera indica.PlantaMedica,1994,60(5):493-494.
<3>周宏雷,袁久荣.中华苦荬菜化学成分研究.中草药,1996,27(5):267-268.
<4>余冬蕾,杨学东,郭剑.乔木刺桐化学成分的研究.中国中药杂志,2000,25
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