伊曲康唑是三唑类抗真菌药,由于其主要代谢产物羟基伊曲康唑的重要抗真菌活性,而使其具有广谱 抗菌活性和良好的耐受性。目前国内市场上流通的有伊曲康唑胶囊和伊曲康唑口服液,伊曲康唑片 为拟进口产品,为了对生产、运输以及贮藏过程中可能产生的有关物质进行检查,建立了HPLC法并同时测定伊曲康唑片的含量。1仪器与试剂ShimadzuClass-10VP DAD和Agilent 1100系列高效液相色谱仪,乙腈为色谱纯(MERCK),其余试剂均为分析纯。伊曲康唑对照 品(原料精制而得)、伊曲康唑片样品(北京韩美药品有限公司)。2方法与结果2·1色谱条件 色谱柱:DiamonsilTMC18(4·6mm×250mm,5μm),流动相:乙腈- 磷酸二氢钾(0·01mol·L-1磷酸二氢钾的水溶液,含0·2%三乙胺,用磷酸调pH至 3·5)(65∶35);检测波长:261nm;流速:1ml·min-1;进样量:10μ l。柱温:30℃。理论塔板数按伊曲康唑峰计算,应不低于2000。2·2方法的专属性2· 2·1分别取按处方配比的辅料、伊曲康唑对照品和伊曲康唑片细粉适量,用流动相溶解并稀释成 每1ml含100μg的溶液,分别取上述三种溶液各10μl,按上述色谱条件,进行测定。结 果辅料、伊曲康唑对照品及伊曲康唑各色谱峰均分离很好,见图。2·2·2酸破坏:分别取伊曲 康唑对照品适量用1mol·L-1的盐酸溶液溶解后,室温放置5小时,用1mol·L-1的 氢氧化钠溶液中和,按上述色谱条件进行测定。结果酸破坏的伊曲康唑产生多个杂质峰,主成分与 杂质峰分离良好(图d)。2·2·3碱破坏:分别取伊曲康唑精制品适量,用1mol·L-1 的氢氧化钠溶液溶解,室温放置5小时,用1mol·L-1的盐酸溶液中和,按上述色谱条件进 行测定。结果碱破坏的伊曲康唑与其杂质峰分离良好(图e)。2·2·4氧化破坏:分别取伊曲 康唑对照品适量,用流动相溶解,加10%的过氧化氢溶液适量,5小时后用流动相稀释5倍,按 上述色谱条件进行测定。结果氧化破坏的伊曲康唑与其杂质峰分离良好(图f)。2·2·5高温 破坏:分别取60℃放置10天的伊曲康唑对照品适量,用流动相溶解并稀释成每1ml含100 μg的溶液,按上述色谱条件进行测定。结果高温破坏的伊曲康唑与其杂质峰分离良好(图g)。 图HPLC方法专属性考察图谱a·辅料;b·伊曲康唑对照品;c·伊曲康唑片;d·酸破坏; e·碱破坏;f·氧化破坏;g·高温破坏;1·伊曲康唑2·3线性关系考察精密称取伊曲康唑 对照品适量,加流动相制成348·8μg·ml-1浓度的溶液,再用流动相分别稀释成0·1 744、0·872、1·744、3·488、8·72、17·44、34·88、69·7 6、87·2、174·4及348·8μg·ml-1浓度的溶液,照上述色谱条件进行测定, 记录色谱图。以样品浓度C对峰面积A进行回归,回归方程为:A=30·101×C+11·5 4,r2=0·9999;线性范围为:0·174~348·8μg·ml-1。2·4精密度 试验取伊曲康唑对照品适量,分别用流动相溶解并稀释成100μg·ml-1和1μg·ml- 1的溶液,重复进样5次,峰面积的平均值分别为25·3800和2520·1061,RSD 分别为0·43%和0·13%(n=5)。2·5稳定性试验取精密度试验项下的两种溶液,分 别在0、2、6、12、24小时内测定,峰面积的平均值分别为25·7523和2535·1 000,RSD分别为0·38%和0·32%(n=5)。2·6检出限取线性关系考察项下溶 液依次稀释后进行测定,伊曲康唑在浓度为0·42μg·ml-1,进样0·1μl,信噪比( S/N)>3,最低检出量为0·042ng。2·7回收率试验精密称取伊曲康唑对照品9份, 按处方比例加入辅料,制成含伊曲康唑100μg·ml-1的溶液,滤过;照上述色谱条件进行 测定,用回归方程计算回收率。结果见表1。表1伊曲康唑的回收率试验结果(n=3)加入量(μg)测得量(μg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)40·440·5245 100·30841·2 41·2695 100·16980·8 81·7981 101·23599·6 98·9385 99·336104·8 104·3652 99·585 100·2 0·76102·4 103·4655 101·041120·0 118·9845 99·154113·6 114·6223 100·900124·0 123·8784 99·9022·8测定方法及结果2·8·1含量测定:取本品重量差异项下的细粉适量,精密称 定,加流动相溶解并制成约含伊曲康唑100μg·ml-1的溶液,照高效液相色谱法进行测定 ,取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取伊曲康唑对照品适量,同法测定,按外标法计算 ,结果见表2。2·8·2有关物质检查:取含量测定项下的溶液作为供试品溶液;精密量取供试 品溶液适量加甲醇稀释成含伊曲康唑1·0μg·ml-1的溶液,作为对照溶液。取对照溶液2 0μl注入液相色谱仪,调节仪器灵敏度,使伊曲康唑峰高约为记录仪满量程的20%~25%, 再取供试品溶液和对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至伊曲康唑峰保留时间 的2倍,供试品溶液如显杂质峰,各杂质峰面积之和不得大于对照溶液峰面积的2倍(2·0%) ,结果见表2。表2伊曲康唑片含量及有关物质测定结果批号伊曲康唑含量(%)进口标准新方法有关物质(%)进口标准新方法20040321103·4 104·5 0·68 0·8020040322 103·1 102·6 0·62 0·7220040323 101·2 99·9 0·65 0·763讨论伊曲康唑的流动相溶液在261nm波长处有最大吸收,二极管阵列检测图谱提取得 到的UV图中显示:伊曲康唑和其主要降解产物的最大吸收波长均在261nm附近,故选择26 1nm作为本色谱条件的检测波长。伊曲康唑是三氮唑衍生物,为有机碱化合物,分子中含有氮原 子,参照《英国药典》2000年版有关伊曲康唑的检查方法<1>,选择乙腈-水系统为流动相 ,在流动相中加入一定量的盐来调节化合物的解离,同时还需要对流动相的pH值进行控制。用伊 曲康唑粗品作为被分离对象,先后用下列不同的流动相进行试验:乙腈-磷酸二氢钾(0·01m ol·L-1磷酸二氢钾的水溶液,含0·2%三乙胺,用磷酸调至pH3·5)比例分别为①6 5∶35,②67∶33,③70∶430。结果见表3。表3不同比例的流动相中伊曲康唑的分离情况磷酸盐∶乙腈出峰个数分离情况保留时间(分钟)35∶6510伊曲康唑与相邻峰很好分离,其余各峰均能分开。R伊=2·81 11·66533∶67 11主峰与相邻峰的分离较好,其余各峰均能基本分离。R伊=2·34 10·21030∶70 11主峰与相邻峰能基本分离,其余各峰均能基本分离。R伊=2·23 8·759由表3可见:三种条件下伊曲康唑与相邻峰均能很好分离(分离度均符合要求),其余各 杂质峰也能基本分离。选择①即乙腈-磷酸二氢钾(0·01mol·L-1磷酸二氢钾的水溶液 ,含0·2%三乙胺,用磷酸调pH至3·5)比例为65∶35作为本色谱条件的流动相较为合 适。原进口标准先用提取液<甲醇-四氢呋喃(1∶1)>超声加温溶解样品,再用流动相稀释后 ,用磷酸缓冲液(取0·2mol·L-1磷酸二氢钾50ml及0·2mol·L-1氢氧化钠 溶液29·54ml,置于200ml容量瓶中,加水至刻度,pH为7·0)-乙腈(35∶6 5)为流动相的高效液相色谱法进行测定,方法操作麻烦,同时四氢呋喃毒性较大,应尽量避免使 用;本文起草的HPLC方法直接用流动相溶解并稀释样品后,用乙腈-磷酸二氢钾水溶液作为流 动相,三乙胺作为扫尾剂进行测定,方法简便,易行,色谱峰对称性好。伊曲康唑片含量测定和有关物质检查方法探讨@王雪芹$河南省药品检验所!郑州450003
@王桂兰$河南省药品检验所!郑州450003本文探讨了HPLC法测定伊曲康唑片的含量及其 有关物质。采用DiamonsilTMC18色谱柱;乙腈-磷酸二氢钾(0.01mol.L -1磷酸二氢钾的水溶液,含0.2%三乙胺,用磷酸调pH至3.5)(65∶35)为流动相 ;检测波长:261nm;流速:1ml.min-1;伊曲康唑与其相邻杂质峰能完全分离,伊 曲康唑在0.174~348.8μg.ml-1浓度范围内线性关系良好,r2=0.9999 。平均回收率100.2%,RSD为0.76%。该法简便、准确、专属性好,可以用于伊曲康 唑片的含量测定及有关物质检查。伊曲康唑;;有关物质;;高效液相色谱法<1>BP
.2000(Ⅱ):897,2003(Ⅰ):1035
<2>傅强,刘海净,朱珠,等.改进的人血清中伊曲康唑浓度的HPLC测定法.中国药学杂志,2000,35(12):838
<3>白林,陈秀兰,吕晓川,等.伊曲康唑胶囊的人体药代动力学研究.中国药学杂志,1 999,34(7):470m作为本色谱条件的检测波长。伊曲康唑是三氮唑衍生物,为有机碱 化合物,分子中含有氮原子,参照《英国药典》2000年版有关伊曲康唑的检查方法<1>,选 择乙腈-水系统为流动相,在流动相中加入一定量的盐来调节化合物的解离,同时还需要对流动相 的pH值进行控制。用伊曲康唑粗品作为被分离对象,先后用下列不同的流动相进行试验:乙腈- 磷酸二氢钾(0·01mol·L-1磷酸二氢钾的水溶液,含0·2%三乙胺,用磷酸调至pH 3·5)比例分别为①65∶35,②67∶33,③70∶430。结果见表3。表3不同比例的流动相中伊曲康唑的分离情况磷酸盐∶乙腈出峰个数
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