1前言甲磺酸培氟沙星(Pefloxacin Mesylate,PM)是一种新型喹诺酮类抗菌药,具有作用迅速持久、抗菌浓度低、副作用小 等特点,而且,口服吸收良好,与其他抗生素和抗菌药未见交叉耐药性<1>。随着喹诺酮类药物 的广泛应用,其检测方法也在不断的发展<2,3>。目前,测定甲磺酸培氟沙星的方法有:荧光 光度法<4,5>、分光光度法<6>、高效液相色谱法<7,8>及反相高效液相色谱法<9, 10>。我国卫生部颁布的试行标准方法为紫外分光光度法<11>。本文报道了在不同胶束体系 中甲磺酸培氟沙星的荧光特性;发现在弱酸性介质中,十二烷基硫酸钠(SDS)对甲磺酸培氟沙 星有较强的增敏作用,据此建立了胶束增敏荧光光谱法测定痕量甲磺酸培氟沙星的分析方法。本法的线性范围为0.01~1.63mg·L-1,检出限为6.0×10-3mg·L-1,平均回收率为99.8%~101.7% ,相对标准偏差为0.43%~1.34%。经t和F检验,本法与紫外法的计算值和理论值(置 信度为95%)没有明显的差异,表明两者间有相似的精密度和准确度。2实验部分2.1仪器与 试剂F-4500荧光光度计(日本,日立公司);UV-1601PC紫外可见分光光度计(日 本,岛津);pHS-3C型精密酸度计(上海天时仪器厂)。甲磺酸培氟沙星对照品(质量分数 99.8%,宜昌人福药业有限责任公司)于105℃干燥至恒重,用二次蒸馏水溶解,配成5×10-3mol·L-1储备液备用;十二烷基硫酸钠(SDS)配成0.1mol·L-1的水溶液;不同浓度的BR缓冲溶液分别用0.04 mol·L-1的硼酸/磷酸/乙酸三酸储备液和0.2 mol·L-1的NaOH配制而成。所用试剂均为分析纯。实验用水为二次亚沸蒸馏水。2.2实验方法于10 mL的比色管中依次加入甲磺酸培氟沙星溶液和2 mL SDS溶液,用pH=5.3的BR缓冲溶液定容,摇匀后测荧光强度。液池厚1 cm,eλx=281 nm,eλm=434 nm,同时做试剂空白。3结果与讨论3.1激发与发射光谱待测物PM自身能发射荧光,加入适量 的SDS后其荧光激发和发射光谱均显著增强,且荧光激发波长eλx和发射波长eλm分别发生 了红移和蓝移,如图1所示。这是由于PM在胶束溶液中被分散和粘接到胶束系集时,起了遮蔽作 用,使PM处于更有序的微环境中,从而减少了碰撞的能量损失和氧的淬灭作用,使处于激发单重 态的荧光物质分子受到了保护作用,有利于辐射去活化过程(荧光)与非辐射去活化过程及各种淬灭过程的竞争,从而提高荧光量子产率。本法分别选用281nm和434 nm为激发和发射波长,PM的检测灵敏度有较大提高。3.2 pH值的影响PM分子中含有羰基、羧基和氨基,而氮原子和氧原子在不同酸碱溶液中其激发态分子 可产生与它在基态时明显不同的结构及电子分布。由于质子迁移反应相当迅速,可以在分子仍处于 激发态的情况下发生。因此,严格控制溶液的pH值是十分重要的。实验结果表明:PM/SDS 的荧光强度随体系酸度的减小而增大,当pH=5.3时,其荧光强度达到最大值;而pH>6时,荧光强度开始下降(如图2所示)。故选用pH值为5.3。Fig.1Excitation and emission spectraa,b:PM,λex/λem=278 nm/442 nm;a′,b′:PM/SDS,eλx/λem=281 nm/434 nm;
=3×10-6mol·L-1;=8×10-3mol·L;pH=5.3Fig.2 Effect of pH on fluorescence intensity=3×10-6mol·L-1;=8×10-3mol· L-13.3表面活性剂的影响实验表明:除阴离子表面活性剂SDS和SDBS具有强的增敏作 用外,其它非离子表面活性剂(如Tween-20、Tween-80)和阳离子表面活性剂( 如CPB)对PM基本不增敏。当SDS在体系的浓度为6.5×10-3~1.12×10-2 mol·L-1时,产生强的增敏效应;当浓度大于1.12×10-2mol·L-1时,荧光强度迅速下降,故实验选用4×10-2mol·L-1SDS,用量为2mL。3.4干扰实验对于浓度为3×10-6mol·L-1PM,如果相对误差在5%以内,1 000倍的NaCl、KCl、NH4Cl、Zn(NO3)2、葡萄糖、可溶性淀粉,150倍的CaCl2和0.5 mg·L-1的FeCl3均无干扰。3.5分析性能在最佳实验条件下,PM浓度在0.01~1.63 mg·L-1范围与其荧光强度呈现良好的线性关系,其线性回归方程为F=974.5844cP M+8.2548,r=0.9997,F为荧光强度,cPM为PM的浓度(mg·L-1), 以三倍信噪比计算检出限为6.0×10-3μg·mL-1。3.6样品分析3.6.1试样制 备取10粒PM胶囊,倾出药粉并仔细研碎,称一定量的药粉(PM的含量约为279.29mg/胶囊),加水溶解,转移到500mL容量瓶中定容,过滤,弃去10 mL前滤液,取4 mL后续液用水稀释至100 mL,然后从中取5 mL稀释10倍备用。3.6.2试样分析取适量样液按2.2实验方法操作,对两批药物进行分析 ,测定每粒胶囊中PM的平均含量,其结果列于表1。经t和F检验,本法与紫外法的计算值和理论值(置信度为95%)之间没有明显差异,这表明两者间有相似的精密度和准确度。Table1 Anulyticul results of PM in gelatine capsule(n=5)PefloxacincapsuleLot numberPresent method UV method<11>Found(mg/grain)Equivalent nominalContent(%)Found(mg/grain)Equivalent nominalContent(%)011201 274.57 98.31±0.36(t,1.41;F,1.18)274.55 98.30±0.39021202 280.56 100.45±0.22(t,0.63;F,4.12)280.10 100.29±0.44 Confidence level at 95%t=2.78,F=6.39致谢:感谢宜昌人福药业有限责任公司和浙江亚峰药厂对本工作 所提供的帮助。甲磺酸培氟沙星在胶束中的荧光特性研究及应用@边江鱼$上海应用技术学院化工系!上海200235,山西师范大学化学与材料科学学院,山西临汾041004
@徐莉英$上海应用技术学院化工系!上海200235
@孙景峰$上海应用技术学院化工系!上海200235在弱酸性介质中,十二烷基硫酸钠(SDS )对甲磺酸培氟沙星有较强的增敏作用,据此建立了胶束增敏荧光光谱法测定痕量甲磺酸培氟沙星 的分析方法。本法的线性范围为0.01~1.63mg.L-1,检出限为6.0×10-3μ g.mL-1,回收率为99.8%~101.7%,相对标准偏差为0.43%~1.34%。 甲磺酸培氟沙星;;十二烷基硫酸钠;; 荧光光谱<1>余兰香,熊雁琼.中国新药杂志,1993,2(1):14.
<2>连宁,孙春燕,赵慧春.分析科学学报,2002,18(2):111.
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<11>中华人民共和国卫生部标准(试行)WS-025-(X-021)-94.助。甲磺酸培 氟沙星在胶束中的荧光特性研究及应用@边江鱼$上海应用技术学院化工系!上海200235,山西师范大学化学与材料科学学院,山西临汾041004
@徐莉英$上海应用技术学院化工系!上海200235
@孙景峰$上海应用技术学院化工系!上海200235在弱酸性介质中,十二烷基硫酸钠(SDS )对甲磺酸培氟沙星有较强的增敏作用,据此建立了胶束增敏荧光光谱法测定痕量甲磺酸培氟沙星 的分析方法。本法的线性范围为0.01~1.63mg.L-1,检出限为6.0×10-3μ g.mL-1,回收率为99.8%~101.7%,相对标准偏差为0.43%~1.34%。 甲磺酸培氟沙星;;十二烷基硫酸钠;;荧光光谱<1>余兰香,熊雁琼.中国新药杂志,1993,2(1):14.
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