脑正常结构与功能的维持要求一个稳定的内环境,这须借助血-脑屏障(Blood-B rain Barrier,BB B)的完整来实现。在许多病理条件下,如感染、炎症、脑梗死、脑肿瘤、脑损伤及高血压等时BB B会遭到破坏,致发生血管外渗和脑水肿、颅内高压,从而对脑疾病的治疗不利。此时应用能降低BBB破坏的药物或措施则当属必要。已证实H H I-I能增加大鼠脑微循环血流,并能改善高分子右旋糖苷所致的脑微循环紊乱。本实验进一步观察其对大鼠BB B破坏的保护作用。1材料和方法1.1实验动物健康W istar大鼠60只,雄性,Ⅱ级,体质量(220±20)g,购自军事医科学院四所。1.2实验仪器大鼠血压计,R BP-1B,北京中日友好医院制;分光光度计,721型,上海;高速冷冻离心机,20PR-52D;数字式万分之一精密天平,1207PM2A,德国。1.3实验用药H H I-I,本所药物研究所制备,主要成分为桃仁、赤芍。乌拉坦,批号20031120,上海天莲 精细化工有限公司。伊文思蓝(EB),F20040213,国药集团化学试剂有限公司。苯肾上腺素,P6126-5G,SIGM A。1.4血-脑屏障破坏模型10%乌拉坦(1m L/100g体质量)腹腔注射将大鼠麻醉,股静脉内注射苯肾上腺素,0.01%,1.5m g/kg体质量引起高血压性脑血管通透性破坏。1.5血管通透性破坏的测定给大鼠静脉内注射伊文思蓝(EB),2g/100m L4m L/kg体质量。5m in后静脉内注射苯肾上腺素。30m in后处死动物取皮质脑标本,测定EB含量。1.6EB含量测定大鼠处死后,开胸,左心室内缓慢注入37℃生理盐水约100m L,此洗净血循中多余的染料和血液。开颅,取大脑皮质约0.05g左右,溶于5m L磷酸缓冲液(0.1m ol/L,pH=7.42)和氢氧化钠的混合溶液(含5%的1m ol/L NaO H)中,冰水浴中制成匀浆。4℃下放置20m in,4℃,10000r/m in条件下离心15m in。取上清液,用721分光光度比色,λ=620nm。根据标准曲线求出其中EB浓度<1- 2>。1.7实验方案将大鼠随机分为6组,每组10只:空白对照组(不作任何处理),高血压 模型组(股静脉内注射苯肾上腺素后不治疗),低、中、高剂量给药组(静脉内注射1.5%、3.0%、6.0%浓度的HH I-I,2m L/kg)。治疗对照组以生理盐水代替H H I-I。各组动物按设计分组处理,60m in后股静脉内注射EB,再5m in后给予苯肾上腺素,30m in后处死动物取脑组织标本,测定EB含量(见表1)。1.8统计学处理所得数据用均数±标准 差表示(x±s),用SPSS10.0软件进行秩和检验。2实验结果苯肾上腺素股静脉内注射 可使大鼠血压明显升高,并使血-脑屏障通透性破坏,可见模型组大鼠脑皮质内EB浓度比正常组(0.0280±0.0457)μg/mg明显升高(0.1210±0.0681)μg/m g,P<0.05。各浓度H H I-I组均能明显降低因给与苯肾上腺素所致的血-脑屏障通透性增高,脑皮质内EB浓度分别天津中医药Tianjin Journal of Traditional Chinese M edicine2006年02月第23卷第1期Feb.2006,V ol.23N o.1为(0.0366±0.0714),(0.0247±0.0506),(0.0025±0.0079)μg/m g(1.5%、3.0%、6.0%H H I-I组)。H H I-I浓度增加有使血-脑屏障通透性破坏进一步改善的趋势。静脉内给与相同容量的生理盐水(治 疗对照组)未能保护苯肾上腺素造成的血-脑通透性破坏(见表2,图1)。3讨论3.1引起B BB破坏的因素其影响很多,概略地包括:微血管内皮细胞分泌的前炎因子(IL-α,IL-β,IL-6,GM-CSF,TN F-α等)、血浆N O、V EG F-A、血管生成素-1(A ng-1)、缓激肽、前列环素、内皮素(E T-1)等。高血压与BB B破坏密切相关。本实验应用苯肾上腺素静脉注射引起BB B破坏。H H I-I保护血-脑通投性破坏是否通过其降低血压的作用尚不得而知,活血化瘀药有可能降低血压,曾有报告提出活血化瘀药丹参滴丸有降低血压的作用<3>。3.2BB B破坏的研究方法包括外源性示踪剂(伊文思蓝、异硫氰酸荧光素等)、放射标记物还有溶质或离子 标记物(荧光素钠、虫荧光素等<4>。内源性血管外渗研究有免疫组化法。此外还应用活体显微 镜及闭合脑窗。体外细胞培养,相对简单、广泛实用、说服力强。培养操作容易,可作药物筛选。应用原代内皮细胞和星形细胞的人BBB模型是估测药物向CNS通透的有用工具<5>。但此方法缺乏机体整体的神经-体液调节和各器官系统相互制约机制。本 实验应用伊文思蓝静脉注射作为BBB通透性示踪剂,伊文思蓝在血液中能与血清白蛋白结合,分 子量达67000D,可用来研究蛋白性物质的血-脑通透性。实验证实,正常大鼠脑对伊文思蓝无通透性,静脉内注射苯肾上腺素后通透明显增加,有BBB破坏现象,表明模型制作成功。3.3BBB通透性的发生机制有关通透性破坏的发生机制目前已研究得非常深入,应用辣根过氧化酶(H R P)为示踪剂<6>证实可有:1)经细胞通透(tran-scytosis),即内皮细胞中的吞饮囊泡将从血液中吸附的成分从内皮细胞腔内侧(lum inalend)转移至腔外侧(ablum inalend)。高血压、脑缺血等引起的B BB破坏时可见内皮细胞内囊泡增多。2)经内皮导管通透(transendothelialc hannels),这些导管是由两个或多个囊泡融合形成,它们给小或大分子的血浆内物质提供 直接的通透管道。在渗透压性BBB开放、高血糖及脑创伤、急性或慢性高血压时用高伏电镜能见 到。3)经细胞间紧密联合(tightjunction)通透,这些结构给水或小的溶质因压 力驱动的滤过提供细组别空白对照模型组低剂量给药组中剂量给药组高剂量给药组治疗对照组表1实验方案Tab.1Experim ental Schem e处理001.5%H H I-I3.0%H H I-I6.0%H H I-IN.S.时间间隔(min)60606060处理Evens蓝Evens蓝Evens蓝Evens蓝Evens蓝Evens蓝时间间隔(m in)5处理0苯肾上腺素苯肾上腺素苯肾上腺素苯肾上腺素苯肾上腺素时间间隔(m in)303030303030处理取脑标本取脑标本取脑标本取脑标本取脑标本取脑标本表2H H I-I对大鼠血-脑屏障通透性破坏的保护作用(x±s)Tab.2Protective Effect of H H I-I A gainst BBBBreakdow n in R ats(x±s)组别空白对照组模型组1.5%H H I-I组3%H HI-I组6%H HI-I组治疗对照组n101010101010脑组织伊文思蓝含量0.0280±0.045 70.1210±0.0681@0.0366±0.07140.0247±0.05060. 0025±0.00790.1484±0.1068注:@与空白组比较P<0.05;与模型 组,治疗对照组比较P<0.05。@与空白组比较P<0.05,与模型组,治疗对照组比较,P<0.05。图1HH I-I对大鼠血-脑屏障破坏的影响Fig.1Influence of H H I-I on BBB Breakdow n in R atsμg/m g组别68胞旁通道(paracellularpathw ay)。本实验证实H H I-I静脉注射能防止苯肾上腺素引发的BB B破坏,即可降低增高的血-脑通透性。估计此作用对临床上因脑肿瘤、脑损伤、脑部炎症、脑中风等所致的BBB通透性增加有预防或治疗作用,对预防脑水肿、降低病死率有积极意义。H H I-I降低血-脑通透性的机制还不清楚,本实研究已证实H H I-I能调节白细胞在毛细血管后静脉中的过度募集(滚动及黏附),降低黏附分子m R N A表达,降低肿瘤坏死因子-α(TN F-α)诱导的黏附分子表达,这表明H H I-I降低B BB破坏与降低同时发生的白细胞募集和黏附分子表达上调有关<7-9>。H H I-I还能改善脑血流<10>,能明显地预防10%葡聚糖(9m L/kg)引起的大鼠脑微循环障碍<11>。改善血液循环能改善脑血供,可改善一些病理条件下 的脑缺血、脑缺氧,可防止因此所致的进一步脑损伤。降低血-脑屏障破坏程度可减少向脑的血管 外渗,从而减轻脑水肿,可减少因此发生的并发症甚至死亡。有报告提出前列环素有类似作用,作用与HH I-I相似,本室最近亦报告称H H I-I能降低致死性缺氧所致的小鼠脑水肿<12>。由此看来H H I-I是一个治疗由脑中风、脑外伤、脑肿瘤等病所引起的脑水肿,降低并发症和病死率极有前途的 药物。活血化瘀注射液I号对大鼠高血压性血-脑屏障破坏的保护作用@赵连根$天津市中西医结合急腹症研究所!天津300100
@刘大全$天津市中西医结合急腹症研究所!天津300100
@陈玉玲$天津市中西医结合急腹症研究所!天津300100<目的>探讨活血化瘀注射液I号( HHI-I)对大鼠高血压性血-脑屏障破坏的保护作用。<方法>将大鼠随机分为6组,10只 /组:空白对照组(不作任何处理),高血压模型组(股静脉内注射苯肾上腺素后不治疗),低、 中、高剂量给药组(静脉内注射1.5%、3.0%、6.0%浓度的HHI-I,2mL/kg,和治疗对照组(以生理盐水代替HHI-I)。各组动物按设计分组处理,60min后
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