吴茱英是一种常用中药，含有生物碱、挥发油及 苦味素等化学成分，具有镇痛、降血压等广泛的药理 作用川，其中吴茱英碱和吴茱英次碱为主要活性成 分。近年来，有关吴茱英碱和吴茱英次碱的测定方 法报道较多，体内分析方法及药动学研究较少。 Jeng等闺和Ko等〔’」分别研究了静脉注射吴茱英碱 或吴茱英次碱后血药浓度测定及药动学参数，但该 方法不能满足口服给药后昊茱英碱和吴茱英次碱的 体内分析。中药多为口服给药，吴茱英碱和吴茱英 次碱口服给药后血药浓度相对较低，药动学性质与 静脉给药有所不同。因此，建立专属性强、
灵敏度 高、操作简便的体内分析方法，对于吴茱英碱、吴茱 英次碱活性成分的合理应用具有重要意义。本实验 旨在建立一种高灵敏度、高专属性、快速简便的吴茱 英碱和昊茱英次碱口服给药血药浓度测定方法，并 将其用于吴茱英碱和吴茱英次碱药动学研究。 1材料与方法 1.1试药及试剂 甲醇、乙睛、四氢吠喃均为色谱纯(Meok公 司)，吴茱英碱和吴茱英次碱对照品(中国药品生物 制品检定所，批号802-94()2和801驯刃1)，梭甲基纤 维素钠300一800(中国医药集团上海化学试剂公 司)，市售吴茱黄药材，由浙江大学田景奎副教授鉴 定为芸香科植物吴茱英「(及。而:utae。卿(juss.) Benth.」的干燥近成熟果实。 1.2仪器及色谱条件 美国Agilent 1 100型液相色谱一质谱联用仪，含 在线真空脱气机、四元高压梯度泵、自动进样器、柱 温箱、二极管阵列检测器、ESI(Eleetrosprav IoniZa- tion)源以及数据处理系统;TGL一16高速台式离心 机(上海安亭科学仪器厂)。 色谱条件: Asilentzo山ax SB一C18色谱柱(4.6 ~，250 rnnl .5脚);柱温:30℃;流动相:乙睛一2% 四氢吠喃水溶液(62:38);流速:o.smL·而n一’;进样 量:50拼L。 质谱条件:电喷雾电离源(”I一ES)，负离子模 式;干燥气:氮气;干燥气流速:12L·mi。一’，温度: 350℃;雾化压力:275k】〕a;毛细管电压:3 sooV;选 择性离子监测(SIM)模式，用于定量分析的离子分别 为m/:302(吴茱英碱，〔M一H」一)，m/:286(吴茱英 次碱，〔M一H〕一)及595(吴茱英次碱，仁ZM+Na- ZH〕一)。 1.3样品制备 称取3009吴茱英药材，敲碎果壳后用体积分 数为95%乙醇3仪x〕mL(含l%盐酸)浸泡过夜，过 滤后滤渣用体积分数为95%乙醇3(xX)rnL水浴回 流l.sh，合并滤液，减压浓缩后置于真空干燥箱，60 ℃干燥得到粉末，备用。 1.4实验动物 健康家兔(浙江省医学科学院动物中心)，体重 2 .0一2.5 kg。 1.5血浆样品预处理 精密移取2以)拼L血浆，加人300拼L甲醇，涡流 混旋3 min，10(X汉):·min一‘离心10 min，取上清液50 汕注人HpLC/MS系统进行分析。 1.6实验方案 家兔在实验前12h开始禁食不禁水，吴茱英药 材提取物用0.5%的梭甲基纤维素钠水溶液制成混 悬液后灌胃，剂量为20zng·kg一‘(按吴茱英碱和吴茱 英次碱的总量计算)。分别在灌胃后0，5，10，15，30， 45，印，90.120，2叨，3团，480，720和l斗《)min于耳缘 静脉取血，加肝素抗凝后，于3以刃r·而n一’离心10 而n，得到血浆，置于一20℃冰箱保存，待用。 1.7数据分析 根据所测得的吴茱英碱和吴茱英次碱血药浓 度一时间数据，采用3咫7软件拟合，以曲线拟合优度 中国药学杂志ZJ拓年l月第41卷第l期 和Mc值为拟合度指标进行模型识别，确定房室模 型，计算主要的药动学参数。 2结果 2.1色谱行为 经正、负离子模式全扫描分析，发现吴茱英碱和 吴茱英次碱在负离子模式下有较好的响应。吴茱英 碱的最强响应信号为质荷比(m/:)3胆的离子峰 (「M一H〕一)，吴茱英次碱有两个相对峰度较强的分子 离子峰，即m/:为286(仁M一H〕一)和595(仁ZM十Na- ZH>一)。在S加监测中，选择m/:3沮定量检测吴茱 英碱，m/:286，595定量检测吴茱英次碱。吴茱英碱 与吴茱英次碱的保留时间分别为11 .3和13.0而n，且 达到了基线分离，分离度大于1 .5，空白血浆不干扰吴 茱英碱及吴茱英次碱测定，结果见图l。 0 4 8 1216 10 15>0 15 1广minl沪mm了min 图1吴茱英碱及吴茱英次碱的SIM色谱图 A一空白血浆;B一空白血浆加对照品;C一含药血浆;，一吴茱英碱;2一吴茱英 次碱 Eg IC腼.、lat卿飞lms of ev诫anune and otaee呷ine in、~场 5.，leeted ion nlonito巧ng(SIM)m记e A一blank<>l aslna;B一讨二。s伊ked诚th ev，li，ne耐ru嗦arPll*51出ldan七C- p飞~溯动e;1一ev记l棚Ine;2一ru嘛笼川】i础 2.2标准曲线 取空白血浆，配制成吴茱英碱质量浓度为 0.32，0.50，1.6，3.2，6.4，16.0，32.0拌g·L一’，吴茱英 次碱质量浓度为1.0，2.0，4.0，8.0，20.0，40.0雌· L一’的血浆样品，按“1 .5”项下方法操作后进样分析。 以血药浓度为横坐标(X)，色谱峰面积值为纵坐标 (Y)进行线性回归，结果血浆中吴茱英碱在0.32- 32.0滩·L一’内呈良好线性，标准曲线方程为y二33 836X一3 523 .1(:二0.9996);吴茱英次碱在1 .0- 40.0雌·L一’内呈良好线性，标准曲线方程为Y=5 914.IX一1 723.5(;=0.9992)。 按色谱峰信噪比S/N为10计算，吴茱英碱及吴 茱英次碱的最低定量质量浓度分别为0.32和1 .0 滩·L一’，RsD值分别为n.1%和n.8%。 2.3回收率 按“2.2’’项下操作，制备低、中、高3种质量浓度 的吴茱英碱(0.8，6.4，16.0滩·L一’)和吴茱英次碱 (2.0，8.0，20.0滩·L一’)质量控制样品(quality eon- Ch认月uZ舰J，2记夏b五l川翻z叮，以.41筋.1·49 trol，QC)，每个浓度平行配制6份。按“1.5”项下操2.4精密度 作，将测得的吴茱英碱和吴茱英次碱面积与相应浓按，’2 .2”项下操作，制备低、中、高3种质量浓度 度直接进样的对照品峰面积比较计算绝对回收率;的吴茱英碱(0.8，6.4，16.0滩·L一’)和吴茱英次碱 将测得的吴茱英碱和吴茱英次碱面积代人标准曲线(2 .0，8.0，20.0滩·L一’)质控样品(QC)，每一浓度进 方程，以测得量和加人量之比计算方法回收率，结果行6样本分析，计算日内精密度;3种浓度连续测定 见表1。6d，计算日间精密度，结果见表1。 表1吴茱荚碱和吴茱英次碱的回收率和精密度.n二6，无土: Tab 1 Reeove叮andp溉ision ofe训洲lianune and rutaec呷ine.n二6，无土s G玻卫lpoUlld Evoli出lljne R山a代冠vPine 。)nc entrati小犷滩·L一l瓜咖tl砚overy/%Metll仪{~ry/%In盼day招D/%伍比卜曲RSD/% 1 10，4 ..… ‘斗，︸，、1，、︺ ，乙0 7q，夕Q产 …… ，，，、，︸l二4八、 0 .8 6 .4 16.0 20 8 .0 200 即.8士4 .7 刃.9士4 .2 834士2.3 85 .8士2.4 85 .1士2.2 叩2土39 男.3士3 .2 98 .1土3.0 98.3士27 107.0士19 97 .5士47 970土39 2.5稳定性 按，’l .5”项下方法处理血浆样品，在48h内的 不同时间点进样分析，结果吴茱英碱和吴茱英次碱 的峰面积的RSD值分别为2.3%和3.8%，表明血浆 样品至少在48h内稳定。 2.6药动学研究 5只家兔单剂量口服给药，吴茱英碱、吴茱英次 碱的平均血药浓度一时间曲线见图2。采用3P87软 件计算，以曲线拟合优度和AIC值等为拟合度指标 进行模型识别，结果发现吴茱英碱和吴茱英次碱在 家兔体内的药动学行为都符合一室模型，主要药动 学参数见表2。 20招场14脸10 一山哭 200 400 600 800 j/mm 图2家兔口服给药后血浆中吴茱英碱和吴茱英次碱的平 均血药浓度一时问曲线.n二5 闷卜一吴茱英碱;刁卜一吴茱英次碱 Fig ZM~pl~concentra}iootimep以汇le of ev以五。neand nllaecalplne aftf”{a抓nsle oral adntinistration.n二5 今一。诫~;刁卜一训a‘，呷i， 3讨论 3.1本实验建立的方法具有较高的准确度、灵敏度 表2口服给药后家兔体内吴茱英碱和吴茱英次碱的主要
药动学参数.n二5，无士， Tab 2 Main phannacokinetiel〕arallleters Ofe劝洲11~ne and rutae- carl〕ne after a single orala山‘币stration in rabbit。.n二5，无士￡ !匆刊翻terF明洲卜~Rula创二出1”仪 人。/~一10一05土住020一a7土认02 Ka/而n一住07士住以0.呢t 0.02 艺1矿皿n一5 .2士4刀 tl/ ZK。/佃n 13.6士10一29.3土2.8 rl/ZK犷mill 16.7士8.8 10.2士3.5 ￡max/
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