0引言葛根素是从中药豆科植物野葛的干燥根中提取的一种异黄酮类化合物。研究报道葛根素能减轻 心肌缺血再灌注损伤<1>,改善微循环<2>。本实验旨在观察葛根素对家兔全脑缺血再灌注模 型血浆丙二醛、超氧化物歧化酶、内皮素及降钙素基因相关肽水平的影响。1材料和方法设计:随 机对照,动物试验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室。材料:实验于2 004-03/2004-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室完成。选用 24只健康成年家兔,雌雄不拘,体质量2.0～2.5kg,由华中科技大学同济医学院动物实 验中心提供<许可证号:SYXK(鄂)2004-0028>。随机将家兔分为3组:假手术组 ,缺血再灌注组和葛根素处理组,每组8只。设计、实施、评估者:实验设计为全部作者,干预实 验和评估均为第一作者,均受过正规培训,未采用盲法评估。方法:造模及分组干预:30g/L戊巴比妥钠耳缘静脉静注麻醉后气管造口,机械辅助呼吸,潮气量10～15mL/次,频率40～50次/m in。3组均按“六血管”模式分离颈内、外动脉和椎动脉<3>,经颈内静脉逆行置管至颈静脉球 处供采血用。实验期间监测平均动脉压、心率、中心静脉压、体温和呼气末二氧化碳。缺血再灌注组和葛根素处理组脑缺血30min再灌注4h。葛根素处理组阻断动脉前静注葛根素5m g/kg,注毕阻断上述6条动脉,继之以微量泵150μg/(kg·m in)输注至实验结束,缺血再灌注组不用药。指标测定:各组于缺血前15m in和再灌注4h2个时点采集颈内静脉血标本。用比色法测定血浆丙二醛、超氧化物歧化酶,用放免法测定血浆内皮素、降钙素基因相关肽。主要观察指标:各组家兔缺血前15m in和再灌注4h血浆丙二醛、超氧化物歧化酶、内皮素和降钙素基因相关肽水平比较。统计学分析 :由第一作者用SPSS11.0软件,结果以x±s表示,组间比较用方差分析。2结果2.1 实验动物数量分析纳入兔24只,均进入结果分析,无脱失值。2.2各组缺血前和再灌注后血浆 丙二醛、超氧化物歧化酶、内皮素及降钙素基因相关肽水平比较见表1。3讨论研究表明自由基引 起的过氧化反应是脑缺血再灌注损伤的主要机制之一<4>。在缺血及再灌注的过程中,白细胞及 毛细血管内皮细胞受损,黄嘌呤、次黄嘌呤大量生成,激活黄嘌呤氧化酶,黄嘌呤氧化酶促进黄嘌 呤代谢释放出分子氧接受的电子,再灌注时,氧供增加可使白细胞耗氧量剧增,产生大量自由基, 同时耗竭超氧化物歧化酶等自由基清除剂。氧自由基引起细胞膜脂质过氧化反应损坏细胞膜结构, 而丙二醛是此反应的主要产物之一,因此对丙二醛的监测可间接反映氧自由基的产生和过氧化反应 的程度,对超氧化物歧化酶的监测可间接反映机体清除自由基的能表1各组缺血前和再灌注后血浆 丙二醛、超氧化物歧化酶、内皮素及降钙素基因相关肽水平比较(x±s,n=10)组别超氧(k化N物U/歧L)化酶假手术组缺血前15min再灌注4h缺血再灌注组缺血前15m in再灌注4h葛根素处理组缺血前15m in再灌注4h4.09±0.054.03±0.373.89±0.836.96±0.35a b4.01±0.204.56±0.37b与假手术组和葛根素处理组比较,aP<0.01;与缺血前15min比较,bP<0.01,cP<0.05丙二醛(m m ol/L)106±17109±15125±1469±6ab118±1588±7b内皮素( ng/L)135±21147±23130±25650±56ac140±30340±35 降钙素基因相关肽(ng/L)91.3±7.698.4±8.688.0±6.476.2± 7.6ac92.0±5.887.0±6.8力。本实验中缺血再灌注组丙二醛水平较缺血前及 假手术组明显升高(P<0.01),超氧化物歧化酶活力较缺血前及假手术组显著降低(P<0 .01),葛根素能明显抑制缺血再灌注后丙二醛的升高,并有效保护超氧化物歧化酶活力,显示 出葛根素抗缺血引起的脂质过氧化反应和较强的自由基清除能力,可保护脑组织免受氧自由基的损 伤。内皮素是体内最强的缩血管多肽,主要在内皮细胞中表达,内皮细胞损伤时释放,其广泛分布 于全身各组织,它不仅能强烈收缩血管导致微循环障碍,而且还与神经元膜上的受体结合刺激磷脂 酶A2,加速花生四烯酸代谢引起自由基大量产生,增加细胞内Ca2+超载和兴奋性氨基酸过量 释放等。研究证明,血浆及脑脊液中内皮素在急性缺血后明显升高的患者,神经元损害加剧<5> 。因此内皮素水平可反映内皮细胞受损及脑缺血再灌注损伤的程度。降钙素基因相关肽是体内最强 的舒血管多肽,具有扩张脑血管、改善脑血流、抗自由基损伤、保护缺血再灌注脑组织ATP酶活 性、保护缺氧神经元等作用。Scherer等<6>证明降钙素基因相关肽能通过降低细胞内C a2+浓度,减弱Ca2+的收缩性来拮抗内皮素的缩血管作用。正常情况下,内皮素、降钙素基 因相关肽处于相对平衡状态,维持着正常的脑血管的舒缩。脑缺血时内皮细胞降钙素基因相关肽释 放减少或活性降低,其舒血管作用减弱,加重了微循环障碍促使微血栓形成,大量血栓形成又加重 了脑的缺血及内皮细胞的损害,从而形成恶性循环。本实验发现脑缺血再灌注4h,缺血再灌注组 与假手术组比较内皮素显著升高,降钙素基因相关肽显著降低(P<0.01),应用葛根素后内 皮素降低而降钙素基因相关肽有所回升(P<0.01)。表明葛根素能通过抑制内皮素的过量产 生,提高降钙素基因相关肽的生成来改善脑血流动力学,纠正神经内分泌系统失衡及对内皮细胞的 保护作用。综上,葛根素可减少脑缺血再灌注损伤后血浆丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活性, 降低内皮素的产生,促进降钙素基因相关肽的生成,从而起到减轻脑缺血再灌注损伤的作用。葛根 素对脑缺血再灌注家兔脑组织及内皮细胞的保护@毛庆军$华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科!湖北省武汉市430030,荆州市第一人民医院麻醉科,湖北省荆州市434000
@夏瑞$荆州市第一人民医院麻醉科!湖北省荆州市434000
@张传汉$华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科!湖北省武汉市430030目的:观察异 黄酮类化合物葛根素对家兔脑缺血再灌注损伤血浆丙二醛、超氧化物歧化酶、内皮素及降钙素基因 相关肽水平的影响。方法:①实验于2004-03/2004-09在华中科技大学同济医学院 附属同济医院麻醉学实验室完成。选用健康家兔24只。随机将兔分为3组:假手术组、缺血再灌 注组和葛根素处理组,每组8只。②3组均按“六血管”模式分离颈内动脉、外动脉和椎动脉。缺 血再灌注组和葛根素处理组脑缺血30min再灌注4h。葛根素处理组阻断动脉前静注葛根素5 mg/kg,注毕阻断上述6条动脉,继之以微量泵150μg/(kg·min)输注至实验结 束,缺血再灌注组不用药。③用比色法测定缺血前15min和再灌注4h2个时点血浆丙二醛、 超氧化物歧化酶,用放免法测定血浆内皮素、降钙素基因相关肽水平。④组间计量资料差异比较采 用方差分析。结果:兔24只均进入结果分析。①再灌注4h血浆丙二醛水平:缺血再灌注组明显 高于其他2组(P<0.01),缺血再灌注组和葛根素处理组明显高于缺血前15min(P< 0.01)。②再灌注4h血浆超氧化物歧化酶水平:缺血再灌注组明显低于其他2组(P<0. 01),缺血再灌注组和葛根素处理组明显低于缺血前15min(P<0.01)。③再灌注4 h血浆内皮素水平:缺血再灌注组明显高于其他2组(P<0.01),缺血再灌注组明显高于缺 血前15min(P<0.05)。④再灌注4h血浆降钙素基因相关肽水平:缺血再灌注组明显 低于其他2组(P<0.01),缺血再灌注组明显低于缺血前15min(P<0.05)。结 论:葛根素能降低缺血再灌注期家兔血浆丙二醛、内皮素的含量,提高超氧化物歧化酶的活力,促 进降钙素基因相关肽的释放,减轻脑缺血再灌注损伤。葛根素;;丙二醛;;超氧化物歧化酶;; 内皮缩血管肽类;;降钙素基因相关肽FanLL,SunLH,LiJ,etal.Thepr otectiveeffectofpuerarinagainstmyocar-dialreperfusioninjury.Studyoncardiacfunction.ChinMedJ1992;105:11-7
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