夏枯草具有清火,明目,散结,消肿.用于头痛、眩晕、瘰疬、瘿瘤、乳痈肿痛、甲状腺肿大、淋巴 结结核、乳腺增生症.本品处方由夏枯草单味药组成,通过文献分析<1~7>主要含总黄酮等成 分,夏枯草虽含金丝桃苷及熊果酸,但含量甚微,基本不能作为其控制指标,考虑到暂无法获取夏 枯草微丸专属性的指标成分供检测用.为了控制该制剂质量,参考现有方法,并结合微丸剂型特点 ,开展方法学研究,拟定以芦丁为标准品,采用分光光度法对制剂中的夏枯草总黄酮进行含量测定 .1材料与方法1.1仪器与试药岛津UV—1240紫外分光光度计;SartoriusBP 211D电子天平(感量0.1mg;0.01mg.载量210g;80g);水浴锅(北京中 兴伟业仪器有限公司);JL—180DTH超声波清洗器.夏枯草对照药材(741-2001 05)、
芦丁对照品(712-200004)均由中国药品生物制品检定所提供.其余试剂均为 分析纯.1.2方法以芦丁为标准品,采用分光光度法对制剂中的夏枯草总黄酮进行含量测定.2 结果与分析2.1测定波长的选择据文献报道<8~11>,夏枯草主含黄酮类成分,可溶于甲醇 、乙醇,故以甲醇、乙醇为提取溶剂采用回流、超声提取方法进行考察;芦丁最大吸收波长在50 0nm左右,故取各个样品溶液与芦丁对照品乙醇溶液显色,以不加样品(但需加显色剂及NaO H试液)的80%乙醇溶液为空白,分别于400~700nm波长范围内进行扫描,结果见表1.表1不同提取溶剂的提取结果提取溶剂甲醇回流乙醇回流甲醇超声乙醇超声样品吸收波长(nm)501501 498 498芦丁吸收波长(nm)501由上可见,芦丁对照品在501nm波长处有最大吸收,甲醇回 流样品与乙醇回流样品均在501nm波长处有最大吸收,考虑到甲醇回流样品吸收度比乙醇回流 样品吸收度高,故选择甲醇回流提取样品,501nm作为测定波长.2.2对照品溶液的制备取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量,精密称定,加乙醇制成每1ml含200μg的溶液,即得.2.3供试品溶液的制备取本品装量差异项下内容物,研细,取0.3g,精密称定,置具塞烧瓶中,精密加甲醇50m l,称定重量,置水浴回流1小时,取出放冷,用甲醇补足减失重量,滤过,弃初滤液,取续滤液作 为供试品溶液.2.4标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml,分别置25m l的容量瓶中,各加水至6m l,加5%亚硝酸钠溶液1m l,摇匀,放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1m l,摇匀,放置6分钟,加4.3%氢氧化钠试液10m l,摇匀,加80%乙醇至刻度,摇匀,放置15分钟,随行空白.照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录V B)试验,在波长501nm处测定吸收度,以吸收度与其对应的浓度计算回归方程.表2标准曲线测定数据对照品浓度(mg.m l-1)0.2078 0.4156 0.6234 0.8312 1.0390 1.2468
吸收度(A)0.116 0.230 0.345 0.459 0.576 0.687计算得回归方程A=0.550942×C+0.001466,R=1.0000,表明浓度在0.2078~1.2468mg/m l范围内,与吸收度呈良好线性关系.图1芦丁标准曲线图2.5精密度试验取样品(批号0412 01),按供试品溶液的制备与测定法制备供试品溶液,并重复测定五次,吸收度(A)的相对标准偏差为0.78%.结果见表3.表3精密度考察结果测定次数吸收度(A)RSD(%)10.3762 0.3703 0.3694 0.3705 0.3730·782.6重复性试验按拟定的含量测定方法,取同一批供试品(批号041201 ),称取五份,进行含量测定,结果见表5.表4重复性试验序号吸收度(A)总黄酮含量(%)平均值(%)RSD(%)10.362 10.812 0.364 10.663 0.361 11.054 0.359 11.065 0.363 10.6310·84 1·92.7稳定性考察2.7.1对照品溶液的稳定性考察取芦丁对照品溶液,于制样后15、2 0、25、30、40、60分钟测定,结果见表6.表5芦丁对照品溶液的稳定性考察测定时间(min)15 20 25 30 40 60 RSD(%)吸收度(A)0.424 0.422 0.420 0.417 0.416 0.413 0.98实验所得RSD为0.98%,说明芦丁对照品溶液在制样后60分钟内测定稳定.2.7 .2供试品溶液的稳定性考察按正文含量测定方法制备供试品溶液,于制样后不同时间进样测定,结果见表7.表6供试品溶液的稳定性考察测定时间(min)15 20 25 30 RSD(%)吸收度(A)0.360 0.358 0.355 0.350 1.22实验所得RSD为1.22%,说明供试品溶液在制样后30分钟内测定稳定.2.8回收 率试验精密称取已知含量的样品(041201批,含量108.4mg/g),精密加入对照品 适量(三种不同水平,各两份),按正文总黄酮含量测定方法进行含量测定,计算回收率,结果表 明回收率的重现性好.结果见表8.回收率(%)=实测总黄酮含量-样品中总黄酮含量对照品加 入量×100%表7回收率测定结果NO吸收度样品取样量(g)样品中总黄酮含量(mg)对照品加入量(mg)实测总黄酮含量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)10.314 0.1504 16.303 13.024 28.360 96.702 0.313 0.1510 16.368 13.024 28.278 96.213 0.352 0.1507 16.336 16.280 31.732 97.294 0.349 0.1518 16.455 16.280 31.550 96.385 0.386 0.1524 16.520 19.536 34.920 96.856 0.386 0.1511 16.379 19.536 34.898 97.1796·8 0·442.9样品测定精密量取供试液1m l置25m l的容量瓶中,加水至6m l,照标准曲线制备项下的方法,自“加5%亚硝酸钠溶液1m l”起,依法操作;另量取甲醇1m l置25m l的容量瓶中,加水至6m l,照标准曲线制备项下的方法,自“加5%亚硝酸钠溶液1m l”起,依法操作,制成空白溶液,在波长502nm处,以空白溶液校正基线,测定供试品液吸收 度的值代入回归方程计算供试品溶液中总黄酮的量.表8夏枯草微丸含量测定结果样品批号测定结果(mg/袋)12平均(mg/袋)041201 152.6 151.1 151.8041202 149.6 148.8 149.2041203 153.6 151.8 152.7如表8所示:三批样品含量在150mg/袋左右,按下浮20%计为120mg/袋, 因此暂订本品微丸剂每袋含总黄酮不得少于120.0mg.3结论与讨论3.1结论利用分光光 度法对夏枯草微丸中的总黄酮进行含量测定,操作简单,重现性好,可作其含量控制方法.3.2 讨论在含量测定时曾采用HPLC法对夏枯草中熊果酸进行含量控制,由于熊果酸为末端吸收,紫 外吸收不明显,故未采用;后换成蒸发光散射检测,虽能很好的检测,但工艺采用水为溶媒进行提 取,熊果酸脂溶性成分,含量太低不能作为控制指标,故也没有采用,同时还采用HPLC法对黄 酮中的金丝桃苷相应的研究,也没有取得较好的效果.紫外分光光度法测定夏枯草微丸中总黄酮的含量@谢鸣$西南民族大学少数民族药物研究所!四川成都610041
@彭镰心$西南民族大学少数民族药物研究所!四川成都610041
@刘超$西南民族大学少数民族药物研究所!四川成都610041
@尚远宏$西南民族大学少数民族药物研究所!四川成都610041
@孟庆艳$西南民族大学少数民族药物研究所!四川成都610041
@刘圆$西南民族大学少数民族药物研究所!四川成都610041以芦丁为标准品,采用分光光度 法并对夏枯草微丸中的总黄酮进行其含量测定;该法简便易行,重现性好,结果可靠,可作为该制 剂的质量控制标准.夏枯草微丸;;UV;;
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