卤蕨(Acrostichum aureurm)为卤蕨科(Acrostichaceae)植物,遍布于亚洲热带海岸、大西洋 的非洲西岸和美洲东岸以及大洋洲沿岸,属于嗜热广布性种类,在我国分布于广东、广西、台湾、福建和海南<1>,为组成红树林树种之一。红树植物(Mangroveplants)已成为寻找天然生物活性成分的重要资源之一<2,3>,卤蕨的化学成分研究尚未 见报道。对卤蕨的95%(体积分数)乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分作了初步的细胞毒活性测试 ,结果发现乙酸乙酯萃取部分对小鼠B16细胞显示出较强的生长抑制活性。为了寻找其中的活性 成分,对卤蕨的95%(体积分数)乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行了化学成分分离,得到6个化合物,经波谱分析确定它们的结构分别为:ponasteroneA(1)、pterosterone(2)、山奈酚(3)、槲皮素(4)、4-(3,4-二羟 基苯基)-2-丁酮(5)、胡萝卜苷(6)。以上化合物均为首次从该植物中分离得到。MTT 法体外抗肿瘤活性测试结果显示,6个化合物对小鼠B16细胞均无生长抑制活性。由于本次研究 中分离得到的化合物均为中等极性的化合物和含量较大的化合物,而活性筛选结果显示这些化合物 均无细胞毒活性,因此推断活性成分有可能为低极性成分或微量成分,还有待进一步研究。1仪器 与试药熔点用北京泰克仪器有限公司生产的X-5型显微熔点仪测定(未校正)。旋光度在JASCO-20C数字旋光仪上测定。IR用Bio-RadFTS仪测定,KBr压片。MS用VG Autospec-3000型仪测定。NMR用Bruker AM-500型超导核磁共振仪测定,TMS为内标。薄层色谱和柱色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂产品,Sephadex LH-20为Merck公司产品。卤蕨药材于2004年11月采自海南省文昌市红树林保护站,并经该站梁勇站长鉴定为Acrostichum aureurm,凭证标本存放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。2提取与分离卤蕨干燥枝条5·4 kg粉碎后,用体积分数95%的乙醇冷浸提取3次,减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于 水中成悬浊液,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后,减压浓缩分别得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏和正丁醇浸膏。乙酸乙酯浸膏(38·2g)经真空柱色谱,以氯仿-甲醇梯度洗脱分成9个流份(Fr·1~Fr·9)。Fr·6(0·68 g)经硅胶柱色谱,以氯仿-甲醇(体积比16∶1)洗脱得到化合物1(51 mg)和2(106 mg);Fr·5(3·27 g)经Sephadex LH-20柱色谱,以95%乙醇洗脱得到化合物3(45 mg)、4(14 mg)和6(50 mg);Fr·7(0·58 g)经Sephadex LH-20柱色谱(95%乙醇洗脱),后继续硅胶柱色谱,以氯仿-甲醇-水(体积比6∶1∶0·1)洗脱得到化合物5(11 mg)。3结构鉴定化合物1:无色针晶(甲醇),mp 256~258℃,<α>1D9·5=+85°(c=0.5,甲醇)。其薄层色谱用硫酸显色呈 红色,UV谱最大吸收在298nm处,显示具有共轭双烯酮的结构特征,Lieber-mann-Burchard反应呈阳性,IR谱显示3400cm-1附近的羟基吸收和1650 cm-1附近的共轭羰基吸收,说明它为蜕皮甾酮类化合物。负离子FAB-MS谱给出准分子离子 峰m/z463
-,结合13C-NMR和DEPT谱数据可推断其分子式为C27H44O6。其1H-NMR及偶合常数值与文献<4>的ponasteroneA数据吻合,因此该化合物中羟基取代碳的构型亦与ponasterone A一致。化合物1的1H-NMR和13C-NMR数据归属如下。1H-NMR(CD3OD-d4)δ:5·83(1H,d,J=1·9 Hz,7-H),3·97(1H,br s,3-H),3·86(1H,dd,J=11·9,3·4 Hz,2-H),3·36(1H,m,22-H),3·18(1H,t,J=8·1 Hz,9-H),2·40(1H,dd,J=12·9,4·1 Hz,5-H),1·20(3H,s,21-H),0·99(3H,s,19-H),0·95(3H,d,J=5·9 Hz,27-H),0·93(3H,d,J=5·5 Hz,26-H),0·91(3H,s,18-H)。13C-NMR(CD3OD-d4)δ: 206·5(C-6)、168·0(C-8)、122·2(C-7)8、5·3(C-14) 、78·0(C-22)、77·9(C-20)、68·8(C-2)、68·6(C-3)、 51·8(C-5)、50·5(C-17)、48·7(C-13)3、9·3(C-10)、 37·7(C-23)、37·4(C-1)、35·2(C-9)、32·9(C-4)、32 ·6(C-12)、31·8(C-15)、30·5(C-24)、29·2(C-25)、2 4·4(C-19)、23·4(C-27)、22·8(C-26)、21·6(C-16)、 21·6(C-11)、21·0(C-21)、18·5(C-18)。其中48·7(C-13)信号被溶剂峰掩盖。化合物2:无色针晶(甲醇),mp234~236℃,<α>1D9·5=+12°(c=0·3,甲醇)。薄层色谱用硫酸显色呈紫 红色,Liebermann-Burchard反应呈阳性,负离子FAB-MS给出准分子离 子峰m/z479-,结合13C-NMR和DEPT谱数据可推断其分子式为C27H4 4O7。与化合物1比较,化合物2的13C-NMR和DEPT谱在低场区多了一个次甲基信号 ,同时在高场区少了一个亚甲基信号,2D-NMR谱分析发现C-24位氢被羟基所取代。1H-NMR(CD3OD-d4)δ:5·81(1H,d,J=2·2Hz,7-H),3·95(1H,br s,3-H),3·86(1H,dt,J=15·2,3·8 Hz,2-H),3·60(1H,m,24-H),3·30(1H,m,22-H),3·15(1H,t,J=8·4 Hz,9-H),2·35(1H,m,5-H),1·21(3H,s,21-H),0·96(3H,s,19-H),0·95(3H,d,J=6·9 Hz,27-H),0·90(3H,d,J=6·8 Hz,26-H),0·88(3H,s,18-H)。13C-NMR(CD3OD-d4):δ 206·6(C-6)、168·0(C-8)、122·2(C-7)、85·3(C-14) 、77·8(C-22)、77·7(C-20)、77·6(C-24)、68·8(C-2) 、68·6(C-3)、51·8(C-5)、50·5(C-17)、48·7(C-13)、 39·3(C-10)、37·4(C-1)、35·8(C-23)、35·2(C-9)、3 2·9(C-4)、32·5(C-12)、31·8(C-15)、34·2(C-25)、2 4·4(C-19)、19·3(C-27)、17·1(C-26)、21·6(C-16)、 21·6(C-11)、21·0(C-21)、18·1(C-18)。以上数据与文献<5> 的pterosterone数据吻合。其中48·7(C-13)信号被溶剂峰掩盖。化合物3:黄色针晶(甲醇),mp254~256℃,盐酸-镁粉反应阳性。EI-MSm/z:286+(100)、258 (44)、229(40)、213(28)、184(15)、152(28)、143(29 )、136(23)、121(62)、105(23)、93(36)、77(28)、69( 52)。IR(KBr)σ:3360、1658、1560、1500、1450、1360、1300、1290、1200、1066、1010、994、876、829cm-1。1H-NMR(DM-SO-d6):δ12·48(1H,br s,5-OH),8·08(2H,d,J=8·7 Hz,2′,6-′H),6·90(2H,d,J=8·7 Hz,3′,5-′H),6·40(1H,d,J=1·5 Hz,8-H),6·18(1H,d,J=1·5 Hz,6-H)。13C-NMR(DMSO-d6)δ:176·9(C-4)、164·9(C -7)、161·8(C-5)、160·2(C-4′)、157·3(C-9)、147·9 (C-2)、136·6(C-3)、130·7(C-2,′6′)、122·8(C-1′) 、116·4(C-3,′5′)、104·2(C-10)、99·3(C-6)、94·5( C-8)。化合物3的13C-NMR数据与文献<6>山奈酚的数据吻合。化合物4:黄色针晶(甲醇),mp217~219℃,盐酸-镁粉反应阳性。EI-MSm/z:302+(100)、273 (21)、245(14)、229(15)、153(22)、137(32)、128(19 )、121(12)、109(14)。IR(KBr)σ:3400、1660、1510、1240、1180cm-1。1H-NMR(DMSO-d6)δ:7·73(1H,d,J=2·2 Hz,2′-H),7·62(1H,dd,J=8·6,2·2 Hz,6-′H),6·88(1H,d,J=8·4 Hz,5-′H),6·38(1H,d,J=1·6 Hz,8-H),6·18(1H,d,J=1·6 Hz,6-H)。13C-NMR(DMSO-d6):δ177·4(C-4)、165·7(C -7)、162·5(C-5)、158·3(C-9)、148·8(C-4′)、148·1 (C-2)、146·3(C-3′)、137·2(C-3)、124·2(C-1′)、121·7(C-6′)、11
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