在各种诱因引起的肝纤维化中，氧自由基是促使肝纤维化 形成的主要原因之一，脂质过氧化反应的醛类产物不仅引起肝 星状细胞(HSC)的增殖与活化，而且激活库普弗细胞释放导 致肝纤维化形成的细胞因子}’}。中药复方汉丹肝乐具有良好的抗 肝纤维化作用，但其药理作用可能是多方面的侧。本实验旨在通 过观察不同干预措施下肝内氧化及抗氧化体系的变化情况，了 解汉丹肝乐是否可通过改善体内氧化及抗氧化体系发挥作用， 为临床用药提供依据。 一、材料与方法 1.实验动物及主要试剂:雄性Wistar大鼠52只，体重 (2oo步20)9，由贵阳医学院实验动物中心提供。汉丹肝乐(由 中药汉防己碱、丹参、赤芍等组成)由中国贵阳制药厂生产，批 号200137。秋水仙碱购自中国云南植物药业有限公司，批号 2000101。过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧 化酶(SOD)、谷胧甘肤(GSH)和维生素E(VitE)试剂盒均 购自中国南京建成生物公司。猪血清自制。 2.动物模型复制:将大鼠随机分为6组:正常对照组、病 理模型组、秋水仙碱组与汉丹肝乐低、中、高剂量组。除正常 对照组外，其余各组均腹腔注射猪血清0.sml/次，每周2次， 共12周，复制大鼠免疫性肝纤维化模型。模型组及正常对照组 不给药，其余各组在造模开始第l天即灌胃给药，汉丹肝乐低、 中、高剂量组每天给药量分别为0.3、0.6、0.99/kg(分别相 当于临床给药量的5、10、巧倍)，秋水仙碱组为0.15 mg/kg， 持续12周，各组均以普通饲料喂养。第12周末颈动脉放血处死 动物，留取肝脏组织。 3.肝组织匀浆液MDA、SOD、CAT、GSH、VitE测定: 按照试剂盒说明书操作。 4.肝组织病理学检查:取部分肝叶用4%中性甲醛固定 24h，石蜡包埋切片，采用Masson三色染色胶原纤维半定量分 析。观察方法:“一”:正常，“十”:汀_:管区、小叶中央静脉周围 胶原纤维增加;“+斗”:汇管区、小叶中央静脉周围胶原纤维进 一步增加，并开始穿插、分隔肝小叶;“曰十”:胶原纤维围绕 肝细胞、分隔肝小叶;“川曰”:胶原纤维隔进一步增宽、增多。 5.统计学分析:数据用见士s表示，用SPSSll .0软件包 进行方差分析、Ridit分析。 二、结果 1.汉丹肝乐对肝内氧化及抗氧化的影响:与正常组相比， 模型组大鼠肝组织中SOD、GSH、VitE、CAT明显低于正常 对照组(尸<0.01)，MDA明显高于正常组(尸<0.01)。与模型组 相比，汉丹肝乐各组的SOD、GSH、VitE、CAT均有不同程 度的升高，MDA均有不同程度的下降(尸<0.05或尸<0.01)， 且各组均优于秋水仙碱组(表l)。 2.汉丹肝乐对大鼠免疫性肝纤维化程度的影响:正常对 照组大鼠肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，无胶原纤维 增生;模型组大鼠肝小叶破坏，肝索排列紊乱，汇管区因纤维 结缔组织增生而扩大，胶原纤维增生，并向邻近肝小叶延伸分 割肝组织形成纤维间隔及假小叶.秋水仙碱组纤维增生减少不 明显，纤维间隔较完整;汉丹肝乐低剂量组纤维增生减少不明 显，纤维间隔比较完整，中剂量组肝组织结构明显改善，汇管 区纤维结缔组织显著减少，纤维增生明显减少，纤维问隔细窄， 且极不完整，高剂量组纤维增生显著减少，纤维间隔儿乎消失 (图1、2)。肝纤维化平均分级指数显示:汉丹肝乐中、高剂量 组分别为0.20、0.12，明显优于秋水仙碱组(0.33)。与模型组相 比，汉丹肝乐中、高剂量组肝纤维化程度明显减轻(尸<0.05)。 与正常对照组相比，模型组纤维化平均分级指数增加(尸< 0 .01)，见表2。 3.免疫性肝纤维化平均分级指数与SOD、CAT、MOA、 GSH和VitE之间的相关性:肝纤维化平均分级指数与MDA的 含量呈正相关(厂二0.93，尸<0.01)，与SOD、CAT和VitE呈 负相粼r值分别为一0.76、一0.75、一0.85，P值均<0.01)。 三、讨论 肝纤维化形成和发展是一个极其复杂的过程，现已经证实 自由基脂质过氧化起着重要作用，它不仅可促进HSC增殖，而 且可促进HSC向肌成纤维细胞转化}引。在正常生理条件下，肝 脏的抗氧化体系极为复杂，VitE为肝细胞膜主要抗脂质过氧化 物质，能迅速与过氧化物结合，从而稳定细胞膜，被视为肝细 胞的第一道防线;GSH是细胞内重要的水溶性抗氧化剂，能保 2 18 中华肝脏病杂志2006年3月第14卷第3期C址n J He训tol，March 2006，Vol 14，No.3 表1汉丹肝乐对肝内氧化及抗氧化体系的影响(戈士S) 组别动物数(只)SOD(U/g)GSH(mg/mg蛋白)CAT(U/g)VitE(mg/g蛋白)MDA(nmol/g蛋白) 正常对照组8 925.57士55.8658.24士13.13456.21土28.9149.62士8.22131.68土12.24 摸型组12 27.53士13.75.25.60士4.31.118.66士7.26.22.54士2.81.298.00士26.32. 汉即砾于阶」;鼠组8 530.35士27.51△37.39土7.41△228.25土9.12△28.46士4.22△204.63土15.10林 中剂主淤且8 571.19士26.42△38.94士7.51△246.46土9.52△30.60土3.61△191.32士14.62△ 高剂量组8 675.62士34.75△41.91土8.22△301.27士10.41△38.26士5.21△182.40土14.28△ 秋水仙碱组8 412.54士20.63△29.22士5.69△178.00士8.91△24.59士3.22△261.62士16.38# 注:SOD:超氧化物歧化酶，GSH:谷脱甘肤.CAT:过氧化氢酶:VitE:维生素E:MDA:丙二醛:与正常对照组相比，’尸 <0 .01:与模型组相比，#尸<0.05.△尸<0.01 表2各组肝纤维化程度指数统计分析 动物数肝纤维化程度 组别侧脚淋-.一~一一------二竺二:二二二之三匕二-------- 一’(只)一十++十十++++十平均 正常对照组8 8 0 0 0 00 摸型组12 0 2 3 3 4 0.50△ 汉丹肝乐心筋」几组8 1 3 2 1 1 0.28 中剂且组8 2 2 3 1 0t0.20# 高剂且组8 2 3 2 1 0 0.12. 秋水仙碱组8 1 2 2 2 1 0.33 注:与模型组相比，.尸<0 .01，#尸<0.05.与正常对照组相比，△尸<0.01 图1中药复方治疗前肝内大量胶原纤维增生Masson x 200 图2中药复方治疗后胶原纤维明显吸收Masson x 200 护蛋白琉基免受氧化损伤，为肝细胞内主要的抗脂质过氧化物 质，且可与SOD共同消除超氧阴离子，从而保护细胞内的结构 稳定。MDA是不饱和脂肪酸过氧化分解的终产物之一，被作为 自由基产生的间接指标。 本实验结果显示免疫性肝纤维化形成后，肝内MDA大量 产生，而肝内抗氧化剂SOD、CAT、vitE、GSH明显下降，这 可能由于肝内氧自由基的大量产生而使主要抗氧化剂SOD、 C AT、VitE、GSH大量消耗引起。同时通过相关分析表明，各 级纤维化程度与MDA呈正相关，而与SOD、VitE、CAT呈负 相关，由此推测，肝内氧化及抗氧化体系的变化在肝纤维化的 形成和发展过程中具有重要意义。 本实验显示汉丹肝乐能显著减轻肝脏的脂质过氧化反应， 减少自由基的产生，恢复正常的肝内氧化及抗氧化体系，从而 发挥较好的抗肝纤维化作用，其具体机制尚待进一步深人研究。中药复方对猪血清免疫性肝纤维化肝中氧化及抗氧化的影响@程明亮$贵阳医学院附属医院传染科!550004
@付荣泉$贵阳医学院附属医院传染科!550004<正>在各种诱因引起的肝纤维化中,氧自由 基是促使肝纤维化形成的主要原因之一,脂质过氧化反应的醛类产物不仅引起肝星状细胞(HSC )的增殖与活化,而且激活库普弗细胞释放导致肝纤维化形成的细胞因子。中药复方汉丹肝乐具有 良好的抗肝纤维化作用,但其药理作用可能是多方面的。本实验旨在通过观察不同干预措施下肝内氧化及抗氧化体系的变化情况,了解汉丹肝乐是否可通过改善体内氧化及抗氧化体系发挥作用,为临床用药提供依据。一、材料与方法 1．实验动物及主要试剂：雄性Wistar大鼠52只,体重 (20±20)g,由贵阳医学院实验动物中心提供。汉丹肝乐(由中药汉防已碱、丹参、赤芍等组 成)由中国贵阳制药厂生产,批号200137。秋水仙碱购自中国云南植物药业有限公司,批号肝纤维化;;模型;;动物;;免疫;;汉丹肝乐1Wang H, Chen ZZ. Lipid peroxidation and liver fibrosis. Guowai Yixue Linchuang Sbengwuhuaxue Yu Jianyanxue Fence, 1998, 19: 138--139.王红，陈在忠．脂质过氧化与肝纤维化．国外医学临床生物化学与检验学分册，1998．19：138--139．
2 Zhang WS, Cheng ML, Lu YY. Effect of HanDanGanLe on the. cytokines in fibrotic rats. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2003,11:285--287.张文胜，程明亮，陆荫英．中药复方对肝纤维化大鼠细胞因子的影响．中华肝脏病杂志，2003，11：285--287．
3 Poli G.
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