川木香为菊科川木香属植物川木香Vladimiriasouliei(Franch·)Lin g·及灰毛川木香Vladimiriasouliei(Franch·)Lingvar·cinereaLing·的干燥根<1>,为中医和藏医等民族医交叉用药品种<2>,中药用川木香为菊科川木 香属植物川木香及灰毛川木香的干燥根,藏药用川木香为川木香干燥根。川木香具有行气止痛的功 效,是治疗胃肠疾病的常用药。川木香中主要含倍半萜内酯类化合物,其中木香烃内酯和去氢木香 内酯的含量较高,并且二者的药理活性比较明显<3>。本文首次以硝酸银薄层法对川木香进行薄 层分析,其薄层斑点分离度高,同时以去氢木香内酯作为定量指标进行川木香质量标准研究。1仪 器、试剂及材料岛津LC-10Avp高效液相色谱仪(SPD-10Avp紫外检测器,CTO-10Asvp柱温箱,Lc-10Atvp双泵,N2000色谱数据工作站);AutoScience AS5150A超声波清洗器;德国Sartorius公司BP211D,BS200S电子天平 。薄层色谱硅胶G(青岛海洋化工有限公司)。硝酸银(成都科龙化工试剂厂),甲醇为色谱纯, 水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。去氢木香内酯,中国药品生物制品检定所提供(11152 5-200404,供含量测定用);木香烃内酯,中国药品生物制品检定所提供(111524 -200402,供含量测定用);川木香对照药材,中国药品生物制品检定所提供(1091- 200001,供鉴别用)。川木香药材,13个样品:200501~200513(成都市荷 花池药材市场购买,以购买顺序编号)。2方法与结果2·1硝酸银薄层鉴别取川木香药材<4>,粉碎,过40目筛,混匀,称取约1g,置具塞三角瓶中,加乙酸乙酯20 mL,密塞,超声30 min,滤过,取滤液,挥干溶剂,残渣加甲醇1 mL使溶解,取上清液作为供试品溶液。另取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液作为对照品溶液;取川木香对照药材,称取约1 g,置具塞三角瓶中,加乙酸乙酯20 mL,密塞,超声30 min,滤过,取滤液,挥干溶剂,残渣加甲醇l mL使溶解,取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验,吸取供试品溶液5μL,木香烃内酯、去氢木香内酯对照品溶液各5μL,川木香对照药 材溶液5μL,分别点于同一以含2·5%硝酸银的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上, 以环己烷-乙酸乙酯-丙酮(8∶1∶1)为展开剂,置展开缸内,在20℃左右展开,取出,晾 干,喷5%香草醛-浓硫酸溶液,105℃烘至显色,置可见光下观察,供试品色谱中,在与对照 品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图1。2·2含量测定2·2·1色谱条件色谱柱:DiamonsilTM钻石(C18,250mm×4·6mm,5μm);流动相:甲醇-水(70∶30);流速:1·0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:220 nm;灵敏度:0·08AUFS。2·2·2色谱行为测定波长的选择取去氢木香内酯对照品的甲醇溶液,在200~700 nm波长进行扫描测定,在204 nm波长处有最大吸收,为末端吸收,此波长下检测,由于流动相为甲醇-水系统,甲醇的截止波长为210 nm,在流动相中甲醇的干扰较大,为减少流动相的吸收干扰,结合仪器条件以及预试结果,将测定波长选定为220 nm。1~4川木香药材5川木香对照药材6木香烃内酯对照品7去氢木香内酯对照品图1川木香药 材TLC鉴别对照品和样品色谱行为将对照品与样品液各10μL注入色谱仪,样品分离度以去氢 木香内酯峰计不低于2·5,理论塔板数以去氢木香内酯峰计不低于6000,色谱峰见图2和图 3。图2去氢木香内酯对照品图3川木香药材样品2·2·3线性关系的考察精密称取去氢木香内酯对照品适量,加甲醇制成每1mL含0·0214 mg的溶液。分别精密吸取上述去氢木香内酯对照品溶液5μL、7·5μL、10μL、12·5 μL、15μL注入液相色谱仪,记录色谱图及其峰面积积分值,以峰面积(A)为纵坐标,进样 量(C)为横坐标,进行回归,得回归方程A=1962241·29C+145·00,r=0 ·9999,线性范围为0·127~0·321μg。2·2·4精密度试验精密吸取去氢木香 内酯对照品溶液5μL,连续进样5次,测得峰面积积分值RSD为0·91%。2·2·5提取 方法考察溶剂的选择:对甲醇、75%甲醇、无水乙醇、75%乙醇、50%乙醇进行试验,甲醇 较好,选择甲醇为溶剂。提取方法的确定:超声和水浴回流提取方法进行试验,回流较好,选择回流法提取。提取时间的考察:选择回流提取30min,45min,60 min进行试验,去氢木香内酯含量在45 min时提取完全,故确定提取时间为45 min。2·2·6稳定性试验考察取样品(批号200506)供试液与去氢木香内酯对照品溶液,于0 h、1 h、2 h、4 h及8 h分别进样,峰面积积分值RSD分别为0·77%和1·74%。2·2·7重现性试验取样品( 批号200506)5份,分别按含量测定项下方法测定,计算去氢木香内酯含量,含量RSD为1·19%。2·2·8回收率试验分别取6份已知含量的样品(批号200506)约0·25g,分成3组,分别精密加入高、中、低3组剂量的去氢木香内酯对照品(5·2 mg、6·5 mg、7·8mg),照样品测定项下方法测定,本品回收率在95%-105%之间,平均回收率 为97·51%,RSD=2·38%。结果见表1。表1川木香药材加样回收率试验结果取样量 (g)样品中去氢木香内酯含量(mg)加入量(mg)测得总量(mg)回收率(%)0·25036·49 5·2 11·51 96·640·2502 6·49 5·2 11·61 98·470·2563 6·64 6·5 12·91 96·450·2514 6·52 6·5 12·72 95·460·2513 6·51 7·8 14·22 98·760·2584 6·70 7·8 4·44 99·252·2·9样品测定取本品<5>,粉碎,过40目筛,取0·5 g,精密称定,置烧瓶中,精密加入甲醇50 mL,称定重量,回流提取45 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液1 mL稀释到10mL的量瓶中,用微孔滤膜(0·45μm)滤过,作为供试品溶液。分别精密吸取 对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,计算,即得。结果见表2。 表2样品中去氢木香内酯含量测定(n=2)编号样品产地去氢木香内酯含量(mg/g)200 501甘孜丹巴18·55200502阿坝壤塘19·27200503阿坝小金28·712 00504阿坝小金28·27200505凉山木里12·31200506阿坝小金26·1 1200507阿坝小金38·30200508阿坝小金28·36200509凉山木里10 ·83200510阿坝黑水18·99200511甘孜炉霍18·23200512阿坝金川 24·50200513阿坝小金25·673讨论3·1在薄层鉴别中选择普通硅胶G板时,木 香烃内酯和去氢木香内酯分离不理想,有斑点重叠现象;在用含有硝酸银的硅胶板中,木香烃内酯 和去氢木香内酯的分离度良好。3·2在含量测定分析中,不同编号的药材的去氢木香内酯含量差 异较大,这可能是不同产地药材质量不同的具体体现。川木香质量标准研究@王战国$成都中医药大学民族医药研究所!四川成都610075
@赖先荣$成都中医药大学民族医药研究所!四川成都610075
@肖莹莹$成都中医药大学民族医药研究所!四川成都610075
@张艺$成都中医药大学民族医药研究所!四川成都610075目的:建立川木香的质量标准。方 法:采用硝酸银薄层和HPLC法对川木香进行了定性、定量分析。薄层色谱条件:2.5%硝酸 银薄层板,展开剂环己烷-乙酸乙酯-丙酮(8∶1∶1),喷5%香草醛-浓硫酸溶液在105 ℃烘至显色。定量分析:色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-水(70∶30),检测波长220 nm。结果:采用硝酸银薄层鉴别的分离效果明显优于硅胶G薄层。含量测定中去氢木香内酯的平 均回收率为97.51%;RSD值为2.38%。结论:所建立的定性鉴别和定量方法可用于控 制川木香的质量。川木香;;硝酸银;;TLC;;去氢木香内酯;;HPLC;;质量标准<1>国家药典委员会.中华人民共和国药典
.北京:化学工业出版社,2005:25
<2>郭全兴.35种中药及藏药的同名异源研究.西北药学杂志,2002,2,(16)1:13-15
<3>王永兵,王强.木香的药效学研究.中国药科大学学报,2001,(32)2:146
<4>李文军,张艺,孟宪丽.藏药然降多吉胶囊质量标准研究.成都中医药大学学报,2001,(24)2:35-37
<5>王永兵,许华,王强.RP-HPLC法测定川木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量.西北药学杂志,2000,15(1):250514 6·52 6·5 12·72 95·460·2513 6·51 7·8 14·22 98·760·2584 6·70 7·8 4·44 99·252·2·9样品测定取本品<5>,粉碎,过40目筛,取0·5 g,精密称定,置烧瓶中,精密加入甲醇50 mL,称定重量,回流提取45 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液1 mL稀释到10mL的量瓶中,用微孔滤膜(0·45μm)滤过,作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品
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