眼部许多疾病有明显性别差异,可是性激素在这些疾病中的作用如何至今研究甚少。近年研究发现雌 激素除了一般生理作用外,还有扩张血管、调控新生血管生成、保护神经、参与骨质代谢等作用< 1,2>。由于视网膜新生血管是目前眼底病研究的一个热点,雌激素受体在眼组织有明显分布< 3,4>,我们设计了该实验,研究雌激素对视网膜新生血管生成作用的影响。1材料与方法1. 1动物分组清洁级健康成熟雌性SD大鼠(四川大学华西动物实验中心提供)22只,体重200 ～250g。随机分为去势组和假去势组:去势组大鼠切除两侧卵巢,假去势红(上海试剂三厂生 产),10%立摄得(Alcon公司)。海德堡视网膜血管照影仪(HRT),(Heidel berg,德国),多波长眼底激光仪(Coherent)。1.3实验方法1.3.1去势和 假去势方法详见动物实验技术<5>。1周后阴道上皮涂片观察大鼠阴道上皮细胞角化程度,间接 反映体内雌激素水平的变化<6>。1.3.2光动力建立视网膜静脉阻塞方法<7>。尾静脉注 射2%虎红(40mg/kg)后,固定于多波长眼底激光仪前特制的固定架上,以78D前置镜 ,用黄绿色激光光凝视盘周围所有主要视网膜静脉。范围为距视盘1PD(视盘直径)始,长约4 PD。激光参数为光斑直径50μm、能量75mW、曝光时间0.2s、击发点数150～20 0点。大鼠苏醒后回笼饲养。1.3.3术后第14d进行荧光素眼底血管造影(FFA)。根据 视网膜荧光素渗漏程度分为轻、中、重三级:轻度为弥漫的点状或散在的1～2个小片状荧光素渗 漏区,不相互融合;中度为3片以上的小片状荧光素渗漏区,不相互融合;重度为明显的多个荧光 素渗漏区并相互融合成大片状。1.3.4造影结果用非参数方法进行统计学分析。2结果去势和 假去势手术顺利,手术时间10～15min,术中无明显出血和死亡,术后无感染。2.1阴道 上皮涂片2.2.1阴道上皮涂片结果见图1～3,记录方法用成熟值(MV)和成熟指数(MI )表示<6>(表1)。2.2.2阴道上皮细胞成熟值统计学分析假去势组手术前与手术后MV 平均值经统计学检验,二者间的差异无统计学意义。去势组手术前与手术后MV平均值相比有明显 的统计学差异(表2)。2.3光动力法视网膜静脉阻塞和FFA20只激光光凝眼在手术结束时 即可见到静脉内有明显的黑色血栓形成,部分血栓松动后栓子间静脉内无血液流动,远端静脉迂曲 、扩张,周边视网膜散在小点片状出血。术中4只SD大鼠出现心脏搏动停止,经心脏按压2只复 苏,2只死亡。术中无明显玻璃体出血。2周后FFA显示:假去势组和去势组SD大鼠对照眼视 网膜均无荧光素渗漏,激光光凝眼视网膜均有荧光素渗漏,其中假去势组呈弥漫的点状或散在的小片状,去势组SD呈大片状或小片状,明显强于假去势组(图4～6),分级结果见表3。统计分析示Mann-WhitneyU=20000,WilcoxonW=75000,Z=2437,P=0.023,2组之间的 差异具有统计学意义。3讨论去势和假去势动物模型,作为研究雌激素作用的经典方法,在心血管 、神经和骨科等专业广泛应用,并且取得了显著的成果<1,2>,但是在眼科方面应用还未见报 道。本课题首次探讨了用该方法研究雌激素在眼部疾病作用的可行性,结果证实该手术简单易行。 验证去势模型成功与否,直接的方法就是测定血液雌激素水平,但是大鼠在月经周期的不同时间雌 激素水平变异较大,实际研究中很难保证每一只大鼠均处在相同月经周期。目前雌激素水平测定方 法本身波动也很大,直接影响测量结果的评定。由于阴道上皮细胞角化程度主要受雌激素调控,在 正常月经周期不同时间比较稳定,当血液雌激素水平降低时其角化程度明显下降,临床上常采用阴 道上皮涂片间接反映体内雌激图1正常SD大鼠阴道上皮涂片。细胞多边性,胞浆均质红染,核固 缩,着色不明显(HE×200)图2去势手术后1周SD大鼠阴道上皮涂片。细胞大小和形状接 近正常细胞,胞浆淡染,核着色明显(HE×200)图3假去势手术后1周SD大鼠阴道上皮涂 片。细胞大小和形状与正常细胞相同,胞浆均质红染,核固缩,着色不明显(HE×200)图4 正常SD大鼠FFA无荧光素渗漏图5假去势大鼠FFA有许多小的点状荧光素渗漏图6去势SD大鼠FFA大片强荧光素渗漏Fig.1Vaginalepithelium smear of normal female SD rats:polygonal cells,homogoneous and incarnadine cytoplasm,karyopyknosis and less dyed nuclear(HE×200)Fig.2Vaginal epithelium smear of female SD rats after ovariectomy1week:normal shape of Vaginal epithelium,but less incarnadine cytoplasm and hyperchromatic nucleus(HE×200)Fig.3Vaginal epithelium smear of female SD rats after sham-ovariectomy1week:polygonal cells with homogoneous and incarnadinecytoplasm like normal vaginal epithelium(HE×200)Fig.4No fluorescein leakage in normal rats’retina during FFA Fig.5Diffuse fluorescein leakage spots in retina of rats in Sham-ovariectomy group during FFA Fig.6Massive fluoresceinleakage in retina of rats in ovariectomy group during FFA素水平<8,9>。我们在实验中使用这种检测方法,证实假去势组大鼠手术前和手术后1周 阴道上皮细胞MV差异无统计学意义,而去势组手术前后成熟值差异有另一方面可能与雌激素调控 一氧化氮(NO)的基础释放有关:雌激素通过血管内皮细胞上的雌激素受体,调控NO的基础释 放;NO是一种重要的内皮源性血管舒张因子,能够扩张血管,抑制血管平滑肌细胞增生,抑制血 小板聚集和阻止血细胞与血管内皮细胞黏附,生理条件下对维持血管正常扩张和通畅起着重要作用 ;当雌激素水平降低时这种调控作用减弱,NO的生成减少,使视网膜静脉阻塞更容易发生<11 -15>;另外,上述2种原因的协同作用,也可能加重视网膜血管病变。其具体机制以及在其他 缺血性病变中的作用有待进一步研究。雌激素对视网膜新生血管生成作用的研究@张红兵$四川大学华西医院眼科中心!610041成都,现在西安市眼科医院
@张军军$四川大学华西医院眼科中心!610041成都
@马麟$四川大学华西医院眼科中心!610041成都
@张美霞$四川大学华西医院眼科中心!610041成都
@赵英杰$四川大学华西医院眼科中心!610041成都目的探讨用去势和假去势方法研究雌激素 在眼部疾病作用的可行性,以及雌激素对视网膜新生血管生成的影响。方法22只健康成熟雌性S D大鼠随机分为2组,分别用去势和假去势方法建立2组体内雌激素水平有明显差异的雌性SD大 鼠模型,用阴道上皮涂片方法证实;用光动力诱导方法建立视网膜静脉阻塞模型,雌激素影响视网 膜新生血管的生成情况用荧光素眼底血管造影(FFA)证实。结果去势和假去势手术操作简单, 去势SD大鼠手术后成熟值降低明显,而假去势组SD大鼠手术前后成熟值变化不明显(P=0. 000,P=0.756),FFA显示去势组SD大鼠荧光素渗漏呈大片状,明显强于假去势组 的弥漫点状或小片状(P=0.023)。结论去势和假去势方法是研究雌激素在眼部疾病作用的 可靠方法,雌激素对视网膜新生血管生成有明显作用,雌激素水平降低时视网膜新生血管生成增加 。视网膜新生血管;;
雌激素/受体;;
动物模型/大鼠;;去势,
假去势;;
荧光素眼底血管造影1SimonciniT,Maffei S,Basta G,et al.Estrogens and glucocorticoids inhibit endothelial vascular cell adhesion molecule-1expression by different transcriptional mechanisms
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