阿尔茨海默病(Alzheimer'sdiseases,AD)是老年痴呆中最常见的一种,随 着年龄的增长,其发病率显著升高<1>。其基本病理特点为老年斑、神经纤维缠结形成及神经元 的脱失。近年来许多研究证实脑胶质细胞及其所产生和分泌的细胞因子在AD脑组织病理变化的发 生发展中有重要意义<2～4>,在老年斑及神经纤维缠结的形成及发展过程中均有胶质细胞增生 及细胞因子的过量产生<5,6>,提示炎性反应在AD的发病机制中有重要作用。因此采用抗炎 药物治疗AD成为AD治疗研究中的新进展。作者观察非甾体类抗炎药物尼美舒利在防治AD方面 的脑保护作用,并初步探讨其脑保护机制。1材料与方法1.1实验动物雄性SD大鼠25只,体 重250～300g(河南省实验动物中心),随机分为空白对照组、假手术组、β淀粉样蛋白( Aβ)组、Aβ+羧甲基纤维素钠组、Aβ+尼美舒利组,每组5只。1.2动物模型的制作及分 组用无菌生理盐水将Aβ140(由首都医科大学宣武医院多肽室提供)稀释为10g/L,37 ℃孵育1周,使其变为聚集状态的Aβ。Aβ组、Aβ+羧甲基纤维素钠组、Aβ+尼美舒利组: 大鼠以体积分数为10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.4g/kg)后,固定于脑立体定向仪上( 由郑州大学人体解剖学教研室提供),选择双侧海马CA1区为注射靶区,于前囟向后3.0mm 、中线旁开2.0mm处,用牙科钻钻开颅骨,暴露硬脑膜,微量注射器(购自上海精密仪器厂) 自脑表面垂直进针2.8mm,将Aβ溶液1μl缓慢注入,留针5min,以保证溶液充分弥散 ,缓慢撤针,缝合切口,常规饲养。假手术组注入等体积生理盐水。空白对照组不做任何处理。A β+尼美舒利组:尼美舒利片剂溶于50g/L羧甲基纤维素钠溶液制成2.5g/L混悬液,于 海马注射Aβ1周前用灌胃针将1ml尼美舒利注入大鼠胃内,1次/d,共5周。Aβ+羧甲基 纤维素钠组:每d灌胃50g/L羧甲基纤维素钠溶液1ml作治疗对照,方法同上,共5周;其 余各组不做治疗干预。1.3学习记忆能力检测各组大鼠均于第5周行Y型电迷宫测试,选用电压 40V,设一臂为起步区,随机选择各臂作为安全区。大鼠在起步区静置3min,予以电击致其 逃至安全区,灯光持续15s,然后熄灯休息1min,开始下一次操作。①学习测试:规定大鼠 受电击后从起步区直接逃至安全区为正确反应,以达到连续10次中9次(9/10)正确反应所 需的电击次数(尝试次数)表示其学习获得能力。若尝试次数超过30次则不再测试,并以30次 为最大值计数。②记忆再现测试:学习测试24h后,再次以同样的方法测试大鼠的记忆能力,记 录每只大鼠连续10次刺激中正确的反应次数作为记忆成绩。大鼠的学习记忆成绩以学习尝试次数 和再现次数表示。1.4免疫组织化学检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与Bcl2的表达各组 大鼠于迷宫测试后取脑组织,制作石蜡切片,选取注射区附近连续切片,进行GFAP及Bcl2 免疫组化染色。免疫组化染色采用SP法,操作按试剂盒说明书进行,GFAP、Bcl2一抗和 SP试剂盒均购自北京中杉公司。每张玻片取3个高倍镜视野,分别计数3个高倍视野内的阳性细 胞数,计算每高倍视野下阳性细胞均数。1.5统计学处理采用SPSS10.0统计软件行方差 齐性检验,单因素方差分析,多个样本间比较用LSD法。检验水准α=0.05。2结果2.1 各组大鼠学习记忆能力比较见表1。表1各组大鼠学习记忆能力比较组别n尝试次数再现次数空白 对照组58.20±1.307.40±1.14假手术组58.80±1.797.20±1. 30Aβ组525.80±1.64△3.20±1.30△Aβ+羧甲基纤维素钠组526.2 0±1.30△3.40±1.40△Aβ+尼美舒利组513.20±1.48△5.40±1 .14△△与空白对照组和假手术组相比,P<0.05;与Aβ+羧甲基纤维素钠组和Aβ组相 比,P<0.052.2GFAP及Bcl2免疫组化染色结果GFAP表达特点:Aβ组海马区 星形胶质细胞胞浆呈棕黄色且较深,胞体肥大、突起增粗、数量增多;Aβ+尼美舒利组与其比较 星形胶质细胞的上述变化明显减轻。与空白对照组和假手术组相比,Aβ组与Aβ+羧甲基纤维素 钠组GFAP及Bcl2阳性细胞数明显增加(P<0.05);与Aβ组及Aβ+羧甲基纤维素 钠组相比,Aβ+尼美舒利组GFAP阳性细胞数明显降低,Bcl2阳性细胞数增加(P<0. 05)。见表2。表2各组GFAP及Bcl2阳性细胞数比较组别nGFAP阳性细胞数Bcl 2阳性细胞数空白对照组525.67±3.0445.13±2.50假手术组525.80± 3.0046.33±2.16Aβ组540.27±3.26△60.40±3.20△Aβ+ 羧甲基纤维素钠组540.00±3.18△60.00±3.36△Aβ+尼美舒利组535. 07±2.66△79.20±2.80△△与空白对照组和假手术组相比,P<0.05;与A β+羧甲基纤维素钠组和Aβ组相比,P<0.053讨论随着人类社会的老龄化进展,AD在老 年人群中的患病率有逐渐增高的趋势,严重影响患者的日常生活质量<1>。迄今为止,AD尚无 特效治疗方法和药物。研究资料表明,AD患者脑内持续存在着慢性炎症反应,并可能是其他病理 特征形成和发展的诱发因素<7>。流行病学研究表明长期服用非甾体类抗炎药物(NSAIDS )的人群患AD的危险性明显低于同年龄对照组,且其脑内的淀粉样斑块较同年龄的对照组明显减 少<7,8>。因此,抗炎治疗成为AD治疗的新途径,也是近年来AD治疗研究的热点。尼美舒 利是一种甲磺酰胺类非甾体类抗炎药物,其选择性抑制COX2,抗炎作用强,且对胃和肾等器官 的COX1作用较少,减少了非甾体抗炎药常见的消化道溃疡和出血等不良反应。本研究结果显示 ,尼美舒利治疗组较Aβ组的学习能力及记忆能力都有所提高,但仍低于空白对照组,尚未恢复到 正常水平,说明尼美舒利作为一种抗炎药物可以延缓AD的发生发展,改善模型大鼠的学习和记忆 能力,发挥一定的脑保护作用。星形胶质细胞是脑内数量最多、分布最广的一种细胞,参与多种生 理和病理反应,在老年斑及神经纤维缠结的形成及发展过程中均有大量胶质细胞增生。GFAP为 星形胶质细胞的特异性标志蛋白,其过度表达被认为是病理条件下星形胶质细胞增生的一个重要标 志<9>。本研究结果显示,Aβ组GFAP阳性细胞数较空白对照组和假手术组皮层区GFAP 阳性细胞数明显增加,且胞体增大,突起增粗。而用尼美舒利治疗后,则有明显改善。表明尼美舒 利可抑制脑白质内星形胶质细胞的过度活化增生,推测其作用机制可能与以下几点有关:①抑制炎 性反应,减轻脑损伤,从而抑制星形胶质细胞的过度增生;②减少慢性脑缺血鼠脑内小胶质细胞的 激活<10>,从而减轻其刺激星形胶质细胞增生的作用。另外研究表明作为一种退行性的中枢神 经系统疾病,在AD的发病过程中,细胞凋亡起主导作用。细胞内与凋亡有关的基因分为2类,诱 导凋亡基因和抑制凋亡基因。其中Bcl2是重要的抗凋亡基因<11>。本实验结果显示Aβ组 海马区Bcl2阳性细胞数较空白对照组增加,且差异具有统计学意义。推测可能是机体对抗损伤 的一种保护性代偿机制。而Aβ+尼美舒利组Bcl2阳性细胞数明显高于Aβ组与Aβ+羧甲基 纤维素钠组,说明经尼美舒利治疗后,大鼠的抗细胞凋亡基因表达上调。综上所述,尼美舒利可改善AD大鼠动物模型的记忆和学习能力,发挥一定的脑保护作用,其机制可能与其抑制星形胶质细胞的增生及细胞凋亡有关。尼美舒利对Alzheimer's大鼠的脑保护作用@张博爱$郑州大学第一附属医院神经内科!郑州450052
@马兴荣$郑州大学第一附属医院神经内科!郑州450052
@贾延劼$郑州大学第一附属医院神经内科!郑州450052
@孙治坤$上海交通大学附属瑞金医院神经内科!上海200025目的:建立大鼠Alzheim er's病(AD)炎症病理模型,探讨非甾体类抗炎药物尼美舒利在AD防治中的作用。方法: 25只大鼠随机均分为β淀粉样蛋白(Aβ)组、Aβ+羧甲基纤维素钠组、Aβ+尼美舒利组、 假手术组与空白对照组。前3组在大鼠双侧海马CA1区立体定向注射Aβ造AD模型,假手术组 注射生理盐水,正常对照组不做任何处理。Aβ+尼美舒利组采用尼美舒利(2.5g/L)灌胃 治疗,Aβ+羧甲基纤维素钠组给予50g/L羧甲基纤维素钠。4周后各组大鼠均作Y型迷宫测 试观察学习记忆能力。采用免疫组化法检测大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Bcl2 的表达。结果:与假手术组和空白对照组相比,Aβ组、Aβ+羧甲基纤维素钠组和Aβ+尼美舒 利组学习记忆能力显著降低(P<0.05),GFAP及Bcl2阳性细胞数明显增加(P<0 .05);与Aβ组及Aβ+羧甲基纤维素钠组相比,Aβ+尼美舒利组学习记忆能力显著改善, GFAP阳性细胞数明显降低,Bcl2阳性细胞数增加(P均<0.05)。结论:在体条件下 尼美舒利通过抑制胶质细胞增生及细胞凋亡等机制对AD大鼠发挥脑保护作用。阿尔茨海默病;; 尼美舒利;;学习记忆能力;;胶质纤维酸性蛋白;;Bcl-2;;大鼠1 CummingsJL,ColeG.Alzheimerdisease.JAMA,2002,287(18):2335
2 SteritWJ,CondeJR,HarrisonJK.ChemokinesandAlzhei mer'sdisease.NeurobiolAging,2001,22(6):909
3 LueLF,WalkerDG,RogersJ.Modelingmicroglialactiva tioninAlzheimer'sdiseasewithhumanpostmorternmicrogl
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