葛根为豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根,一般宜在11月下旬至次年3月采挖2～4a生的葛根<1 >。其主要有效成分为葛根素,作者利用高效液相色谱法(HPLC)测定信阳大别山天然葛根中
葛根素,报道如下。1材料与方法1.1材料Agilent高效液相色谱仪、光电二极管阵列检 测器(DAD)、HP1100色谱工作站(美国)。葛根素标准品(中国药品生物制品检定所) ;葛根样品采自大别山区;甲醇(色谱纯);水为去离子水(用时过0.45μm膜);其他试剂为分析纯。1.2实验方法1.2.1色谱条件:色谱柱为ZorbaxXDBC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇水;梯度洗脱:0～60min由体积 分数为25%的甲醇上升到100%,流速为0.5ml/min;检测波长为250nm;柱温 25℃;进样量为20μl。1.2.2样品的制备:取葛根样品洗净,80℃烘干,粉碎过50 目筛。精密称取葛根粉末约100mg,置圆底烧瓶中,量筒量取体积分数为30%乙醇80ml ,加入烧瓶中。水浴100℃回流30min,转移到100ml容量瓶,用体积分数为30%乙 醇定容,摇匀,过滤。1.2.3标准曲线的绘制:准确称取葛根素标准品10mg,置于25m l容量瓶中,用体积分数为30%乙醇溶解、定容,分别配制成20mg/L、40mg/L、8 0mg/L、100mg/L、200mg/L标准系列。按上述色谱条件进样,将所得峰面积( Y)与相应质量浓度(X)进行线性回归分析,得线性回归方程:Y=136.42X+148. 08,相关系数r=0.9999,提示在20～200mg/L范围内,质量浓度与峰面积线性 关系良好。2结果与讨论2.1样品精密度平行称取6份样品,按照实验方法分别上机测定,测得 葛根素含量(质量分数)分别为:5.67%、6.09%、6.27%、5.58%、6.21 %和5.91%。其平均含量为(5.96±0.28)%,相对标准偏差(RSD)为4.79 %,表明精密度良好。2.2回收率取5组样品做加标回收试验,结果见表1。平均回收率为(9 9.93±4.66)%,RSD为4.66%,结果表明回收率高,准确度好。表1样品回收率 测定结果编号本底值/mg加标量/mg测得值/mg回收率/%16.323.19.4510 0.9625.913.29.30105.9336.553.69.9093.0545.4 74.09.51101.0056.523.19.5898.712.3样品稳定性试验取制 备好的样品溶液立即进样分析及放置2h、4h、10h、24h时进样分析,同一时间进样3次 ,峰面积的平均值分别为8868、8790、8952、8544、8715,RSD为1.7 7%,表明样品溶液在24h内稳定。2.4样品提取方法比较按照1.2.2样品处理方法,试 验纯水和不同体积分数乙醇的影响,结果见表2。表2不同乙醇浓度提取工艺结果比较φ(乙醇) /%t(提取)/min峰面积峰形水307278单峰20307940单峰30308828 单峰40308779单峰70309514双峰由表2可知,葛根的水提和不同体积分数乙醇的 提取,其测定结果有较大差别。使用体积分数30%乙醇提取时葛根素的测定值最高,此时异黄酮 分子中的酚羟基主要以离子状态存在,HPLC色谱图是单一峰。而体积分数70%乙醇提取时异 黄酮分子中的酚羟基以分子与离子共存,HPLC色谱图出现双峰,这与文献报道一致<2>。故 作者选取体积分数30%乙醇提取。2.5乙醇提取时间的影响平行称取6份样品,按照样品提取 方法,分别回流15min、20min、25min、30min、35min、40min, 上机测定,结果提取25min时峰面积已达最大,提取30min、35min、40min时 其测定结果基本一致。为保证葛根素完全提取,本实验选用提取时间为30min。2.6测定方 法专属性采用DAD对样品色谱峰进行扫描(范围190～400nm,间隔2nm),葛根素峰 光谱图见图1。图1葛根素峰光谱扫描图由图1可知在250nm、304nm有2个吸收峰,且 在250nm有最大吸收,与文献报道一致<3>。上述结果提示,在该实验条件下,葛根素峰为 单一组分。2.7样品测定样品前处理使用体积分数为30%乙醇提取,取上清液0.45μm微 孔滤膜滤过,20μ进样。以色谱峰面积计算样品含量。葛根素标准品色谱图见图2(A),样品 色谱图见图2(B)。图2样品测定结果A:葛根素标准品;B:样品2.8结论作者采用体积分 数30%乙醇对样品进行提取,方法简单,提取率高,样品溶液稳定性好。甲醇水梯度洗脱,使葛 根中大部分黄酮类化合物得到了较好的分离,得到较完整的HPLC色谱图。所建立的方法,可对 样品提取溶液直接定容衡释,比文献<4>报道的方法更易操作,且精密度和重现性好,为测定葛根素和评价野葛质量的良好方法。大别山野葛葛根素的高效液相色谱法测定@张洪权$郑州大学公共卫生学院卫生化学教研室!郑州450052
@常爱武$郑州大学医学实验中心!郑州450052
@吴拥军$郑州大学公共卫生学院卫生化学教研室!郑州450052
@王旗$郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室!郑州450052
@吴予明$郑州大学公共卫生学院卫生化学教研室!郑州450052
@韩萍$郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室!郑州450052目的:应用高效液相色 谱法(HPLC)测定野葛葛根素含量,为野葛药材质量控制提供依据。方法:用体积分数为30%乙醇100℃水浴回流提取葛根样品。应用Agilent高效液相色谱仪,ZorbaxXDBC18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇水为流动相,梯度洗脱,流速0.5ml/ min,20ml进样,以色谱峰面积计算样品含量。用光电二极管阵列检测器(DAD)在25 0nm处测吸光度,检查该方法的专属性。结果:葛根素在20～200mg/L范围内浓度与峰 面积有良好的线性关系(r=0.9999),样品精密度RSD=4.79%,样品回收率为9 3.05%～105.93%,RSD=4.66%。结论:该方法简便,精密度好,回收率及准 确度高,是测定葛根素和评价野葛质量的良好方法。
高效液相色谱法;;光电二极管阵列检测器;;葛根素1 国家药典委员会.中国药典(一部),2000.273
2 金文姗,谈钰元,陈有根,等.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的含量.中国中药杂志,2003,28(1):49
3 任永康.高效液相色谱法测定葛根异黄酮中葛根素的含量.广东药学,2001,11(3):10
4 陈士林,陈四保,杨大坚,等.葛根高效液相指纹图谱的研究.中草药,2003,34(7) :661%,样品回收率为93.05%～105.93%,RSD=4.66%。结论:该方法 简便,精密度好,回收率及准确度高,是测定葛根素和评价野葛质量的良好方法。高效液相色谱法;;光电二极管阵列检测器;;葛根素1 国家药典委员会.中国药典(一部),2000.273
2 金文姗,谈钰元,陈有根,等.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷及大豆苷元的含量.中国中药杂志,2003,28(1):49
3 任永康.高效液相色谱法测定葛根异黄酮中葛根素的含量.广东药学,2001,11(3):10
4 陈士林,陈四保,杨大坚,等.葛根高效液相指纹图谱的研究.中草药,2003,34(7):661
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