甘油果糖注射液系复方制剂,主要含甘油、果糖,在临床上为高渗透性脱水药,用于降低脑出血、脑 梗塞、脑外伤、脑膜炎、脑肿瘤等引起的高颅压<2>。为了临床使用的安全,必须对甘油果糖进 行热原检查。在《中国药典》2005年版二部公示细菌内毒素及热原项中新增品种中亦有包含。 为此本文对甘油果糖的细菌内毒素检查的方法进行研究。1材料1.1试剂细菌内毒素国家标准品 :批号:981规格:9000EU/支厂家:中国药品生物制品检定所鲎试剂批号:04070 512,04081012规格:0.1ml/支,0.25EU/ml厂家:福州新北生化工业 有限公司细菌内毒素检查用水:批号:041005规格:5ml/支厂家:福州新北生化工业有 限公司1.2样品甘油果糖注射液批号:040805规格:250ml/瓶(含甘油25g与果 糖12.5g)1.3仪器:电热干燥箱、旋涡混合器、电热恒温水浴箱1.4玻璃器皿:试管、 刻度吸管2方法与结果2.1试验准备:试验所用器皿,经250℃烘烤2hr以上除去可能存在 的外源内毒素。2.2鲎试剂灵敏度的复核按《中国药典》2000版二部附录XIE细菌内毒素 检查法进行,结果(见表1),所用上述批号鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml,其灵敏度标示符合规定,鲎试剂可用于试验。表1鲎试剂灵敏度复核结果批号细菌内毒素浓度(EU/ml)0.50.25 0.125 0.06阴性对照λ(EU/ml)04070512++++++++----------0.2504081012++++++++----------0.25 2.3样品细菌内毒素限值(L)及最大有效稀释倍数(MVD)的确定非肠道给药途径的K=5E U/(ml.hr),剂量(M)按家兔体重每1kg注射10ml,根据公式L=K/M,计算 得L=0.5EU/ml,甘油果糖注射液最大有效稀释倍数MVD=1·C/λb=2(倍), λb为鲎试剂灵敏度标示值0.25EU/ml,C为甘油果糖注射液的浓度,当L以EU/ml 表示时,C为1.0ml/ml2.4干扰实验刚细菌内毒素检查用水和样品最大有效稀释倍数( MVD)下浓度的稀释液分别将同—支内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品2.0λ、 1.0λ、0.5λ、0.25λ四种浓度的内毒素溶液,然后按鲎试剂灵敏度复核操作步骤进行 干扰实验,试验结果(见表2)。表2干扰试验结果鲎试剂批号样品批号040503内毒素浓度(EU/ml)0.50.25 0.125 0.06阴性对照灵敏度EtEt(EU/ml)04070512样品稀释液++++++++- ---------0.2504081012样品稀释液++++++++--------- -0.25由表2可知:Et在0.5Es-2.0Es(包括0.5Es和2.0Es)范围内 ,结果显示该批样品在该液浓度下对试验无干扰作用。2.5样品的检测取样品,按《中国药典》 2000版二部附录XIE细菌内毒素检查法考察其内毒素限值结果(见表3)表3注射用丝裂霉 素细菌内毒素检查试验结果鲎试剂批号样品批号供试品管供试品阳性对照管阴性对照管阳性对照管04070512040805--+-+04081012 040805--+-+由此可知,该批样品可用细菌内毒素检查法代替甘油果糖注射液的热原检查。3讨论3.1甘油果糖注射液在75 ml/ml稀释液浓度下的干扰试验,试验表明对灵敏度标示值为0.25EU/ml的鲎试剂无干 扰作用,可进行细菌内毒素检查。3.2根据试验结果,细菌内毒素检查法可代替甘油果糖注射液 的热原检查。甘油果糖注射液细菌内毒素检查法初探@李粉玲$韩山师范学院!广东潮州521041
@蔡汉权$韩山师范学院!广东潮州521041
@齐云$福州新北生化工业有限公司!福建福州350002
@周山勇$福州新北生化工业有限公司!福建福州350002目的:建立甘油果糖注射液的细菌内 毒素检查法。方法:按《中国药典》2000年版细菌内毒素检查法和细菌内毒素应用指导原则要 求进行试验<1>。结果:样品按最大有效稀释倍数稀释后无干扰作用。结论:
细菌内毒素检查法 可用于甘油果糖注射液热原检查。甘油果糖注射液;;
细菌内毒素;;鲎试剂(TAL);;干扰 试验<1>国家药典委员会,中华人民共和国药典(二部)
,北京:化学工业出版社,2000附录XIE,86—87,712—713。
<2>杨树源,岳勇,李庆彬,等.甘油果糖注射液降低颅内高压的临床观察.中华神经外科杂志,1994,10:272-274.
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