白藜芦醇苷是虎杖的有效成分之一,具有广泛而重要的生物学活性。研究表明:白藜芦醇苷可对抗脂 质过氧化和细胞死亡,有效抑制血管细胞中组织因子和细胞质表面的异常表达,干扰活性多形核白 细胞释放催化性物质,并且降低依附凝血因子Ⅱ多形核细胞的功能,同时抑制血栓烷素的形成和由 二磷腺苷(ADP)、凝血酶与胶原引起的血小板聚集,有效防止动脉粥样硬化和血栓形成,发挥 防治心血管疾病的功效<1,2>。笔者在本实验中主要探讨白藜芦醇苷对犬心肌梗死模型的影响 ,观察心外膜电图的变化,同时检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酸激酶(CK)的活性。 以各项指标为间接依据反映该药对心肌梗死的影响,为其进一步开发利用提供实验依据。1材料与 方法1.1药品与试剂白藜芦醇苷注射液(深圳海王药业股份有限公司提供,黄色澄清液体,批号:0303-0301);硝酸异山梨醇酯注射液(isosorbided initrate,商品名:异舒吉,德国许瓦兹大药厂产品);LDH测试盒(南京建成生物工程 研究所,批号:20020523);CK试剂盒(ENR:U90625,购自Randox公司)。1.2仪器UV/Vis8500型紫外/可见光分光光度计(上海天美分析仪器厂)。1.3动物及分组健康杂种犬,体重10~15 kg,雄雌兼用<由第二军医大学动物中心提供,动物饲养合格证号:SCXK(沪)2002-0 006>,30只。随机分为5组(阴性对照组,阳性对照组,白藜芦醇苷低、中、高剂量组),每组6只。1.4剂量设置白藜芦醇苷注射液按预实验结果,取其低剂量为2.5mg·kg-1,中、高剂量分别为5.0和10.0 mg·k-g1。阳性对照组采用硝酸异山梨醇酯注射液静脉滴注,临床剂量为6 mg·h-1,以60 kg体重计算,为0.1 mg·kg-1·h-1,本实验中犬剂量按体表面积折算,相当于0.2 mg·k-g1·h-1,硝酸异山梨醇酯注射液取相当于中剂量,为0.4 mg·k-g1·h-1。阴性对照组给予等容积的0.9%氯化钠溶液。1.5犬心肌梗死模型的 制备参考文献<3,4>所介绍的方法改进。动物称重后以3%戊巴比妥钠30mg·k-g1静 脉注射麻醉。分离气管并插入气管插管,接SC-M5型麻醉呼吸机(上海医疗仪器厂),待开胸后行机械通气,呼吸频率16~18次·min-1,潮气量350~550 mL。沿胸骨左缘第4肋间开胸,暴露心脏,剪开心包并作心包吊床。在左冠状动脉前降支第2~3 分支间游离冠状动脉,并在其下穿两根丝线,备用于两步结扎。在心脏表面放置30点心外膜电极 并把电极四角用心血管无损伤连线缝合针缝合于心脏表面,四肢经针形电极连接30点心外膜电极,经多导转换开关连至Powerlab生理记录仪,记录30点心外膜电图,心外膜电图定标为1mm·(mV)-1,记录速度1 k·s-1。采用Harris两步结扎法:首次结扎前2 m in,从股动脉注射利多卡因5 mg·k-g1预防心律失常。在结扎时将一段直径1 mm的钢丝插入第一松结内,将钢丝与冠状动脉一起结扎,而后抽出钢丝。30 m in后完全结扎第二结。记录完全结扎后10 m in的心外膜电图作为用药前对照值,而后从股静脉以2 mL·kg-1静脉滴注相应药液,阴性对照组给同体积0.9%氯化钠溶液对照。各组均在30 m in内以电子恒流泵(SH-88AB可控静脉注射推进器,泉州市鲤中医疗电子仪器厂)恒速滴注完毕。分别在给药后5,15,30,60,90,120 m in记录心外膜电图的变化。心外膜电图观察指标:以ST段升高或降低2 mV以上的导联数(N-ST)和ST段升高值的总和(∑ST)为指标观察给药前后的变化,并计 算心肌缺血程度(∑ST)和范围(N-ST)。以用药后不同时间实测值与用药前进行比较,以 用药后不同时间变化百分率(用药前为100%)进行组间比较。1.6指标检测冠状动脉结扎前及给药后2h各取右心室血3 mL,3 000 r·m in-1离心15 m in,取血清测LDH、CK含量。LDH的测定采用LDH测试盒方法,CK的测定采用CK试剂盒方法。在UV751GD型紫外/可见光分光光度计上进行。1.7梗死范围测定结扎2 h后取心脏,称取全心重量;切去心房及右心室,称出左心室重量,并在冠状动脉结扎线下,平行于 冠状沟将左心室切成等厚的5片,用0.9%氯化钠溶液洗净,置0.05%氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)液37℃染色30m in。染色过程中不时摇动染色液使之与心肌充分接触。染色后立即用水冲去多余染料。梗死区不着 色,非梗死区着暗蓝色,剪去着色部分,将未着色的梗死区称重,计算出梗死区重量占全心及左心 室重量的百分比。1.8统计学方法实验数据以x±s表示,用方差分析检验差异的显著性。2结果2.1白藜芦醇苷注射液对心肌缺血程度的影响冠状动脉结扎后5m in,阴性对照组心外膜电图∑ST明显升高,阴性对照组30 m in时∑ST升高达18.2%,此后缓慢回落。白藜芦醇苷注射液组静脉给药后能剂量依赖性地减轻心肌缺血程度,∑ST显著下降,小剂量组30~60 m in与阴性对照组差异有极显著性(P<0.01),90 m in时仍差异有显著性(P<0.05);中剂量组给药15及120 m in差异有显著性(P<0.05),其余各时间点与阴性对照组比较,差异均有极显著性(P<0.01);高剂量组给药后即有显著作用,并持续至120m in,其中,5,15,120 m in差异有显著性(P<0.05),30~90 m in差异有极显著性(P<0.01)。阳性对照组在给药后5~90 m in,∑ST下降,与阴性对照组同时间点比较差异有极显著性(P<0.01),但90~120 m in与阴性对照组差异无显著性。见表1。结果表明,白藜芦醇苷注射液2.5,5.0,10.0 mg·kg-1静脉滴注对犬冠状动脉结扎引起的急性心肌缺血程度有显著的治疗作用。2.2白藜 芦醇苷注射液对心肌缺血范围的影响白藜芦醇苷注射液能剂量依赖性地缩小心肌缺血范围,降低N-ST值,作用可持续120m in。低剂量组(2.5 mg·k-g1)各时间点N-ST值降低率与阴性对照组同时间点比较,60 m in时差异有极显著性(P<0.01),30,90m in时差异有显著性(P<0.05);中剂量组(5.0mg·k-g1)从15 m in起差异有显著性(P<0.05),30~120 m in时N-ST值降低率与阴性对照组同时间点比较,差异有极显著性(P<0.01);高剂量组(10.0mg·k-g1)从5~120 m in降低心肌缺血范围与阴性对照组比较,差异有极显著性(P<0.01)。阳性对照组在给药后5 m in心肌缺血范围与阴性对照组同时间点比较显著下降(P<0.05),从15 m in起与阴性对照组差异有极显著性(P<0.01),起效快而作用时间长。结果见表2。表1 5组犬冠状动脉结扎心外膜电图不同时间∑ST的检测结果x±s组别犬/只剂量/(mg·kg-1)给药前给药后5 m inΣST/mV增加率/%给药后15 m inΣST/mV增加率/%给药后30 m inΣST/mV增加率/%阴性对照组6-153.3±43.7 175.7±51.7 14.7±7.4 177.8±40.7 17.7±10.1 178.8±44.0 18.2±10.6阳性对照组6 0.4 160.5±41.2 149.3±36.7-6.7±4.3*1128.7±46.6-20.9±13.8*1111.2±44.5-32.6±11.0*1白藜芦醇苷组6 2.5 154.5±60.4 154.7±55.0 1.5±9.5 149.5±52.8-1.1±20.3 129.2±57.7-17.4±8.5*16 5.0 153.8±50.7 148.0±39.9-1.7±10.3*1133.7±52.7-11.7±23.2*2116.2±53.7-25.4±17.8*16 10.0 155.0±46.4 151.7±35.6-0.7±7.7*2132.0±43.1-15.4±5.6*2115.2±50.9-28.0±12.8*1组别犬/只剂量/(mg·kg-1)给药后60m inΣST/mV增加率/%给药后90 m inΣST/mV增加率/%给药后120 m inΣST/mV增加率/%阴性对照组6-173.0±42.1 14.5±11.7 165.5±41.7 8.8±3.9 148.5±43.2-3.1±7.8阳性对照组6 0.4 111.0±38.2-31.4±7.6*1115.8±29.7-27.4±6.7*1138.5±45.5-13.7±18.0白藜芦醇苷组6 2.5 122.7±59.6-22.2±12.3*1128.3±55.1-17.3±12.4*2130.2±54.1-15.5±16.86 5.0 105.3±53.6-32.6±19.5*1103.8±54.1-33.2±21.9*1100.5±48.3-32.1±4.8*26 10.0 104.7±45.5-34.1±13.0*1102.0±51.8-37.1±15.7*1 103.3±46.4-35.3±14.3*2与阴性对照组比较,*1P<0.01,*2P<0.05表25组犬冠状动脉结扎后不同时间N-ST的检测结果x±s组别犬/只剂量/(mg·kg-1)给药前给药后5 m inN-ST增加率/%给药后15 m inN-ST增加率/%给药后30 m inN-ST增加率/%阴性对照组6-26.5±4.5 28.2±3.9 6.5±5.4 28.3±2.7 7.2±6.0 29.2±2.9 10.
More abstracts about the 白藜芦醇苷对急性心肌梗死模型犬的影响