贞芪扶正胶囊是由女贞子、黄芪等药材经适当加工而制成的胶囊剂,具有补气养阴的功效,用于久病 虚损、气阴不足。配合手术、放射治疗、化学治疗,可促进正常功能的恢复。黄芪为方中主药,黄 芪甲苷是方中的主要有效成分。在贞芪扶正胶囊质量标准中,只测定了黄芪甲苷的含量,采用的方 法是薄层扫描法<1>,文献报道的方法还有HPLC-UV法<2>;但由于黄芪甲苷属四环三 萜类皂苷,结构中无生色团,只能用紫外末端吸收进行测定,检测灵敏度低,误差较大。我们采用 HPLC-
蒸发光散射检测器(ELSD)进行测定,提高了方法的灵敏度和准确度,得到了较为 满意的结果。女贞子药材以齐墩果酸为对照品测定含量,贞芪扶正胶囊制备采用水提工艺,齐敦果 酸为酯溶性物质,因此含量很低。根据徐娟华等报道,红景天苷元及其葡萄糖苷具有抗衰老、抗寒 冷、抗微波辐射等作用,我们以红景天苷为对照品建立了测定贞芪胶囊中红景天苷的高效液相色谱 法。测定贞芪扶正胶囊中黄芪甲苷和红景天苷的含量,能够更好地控制贞芪胶囊的质量。1仪器与试药1.1仪器KNAUERK-1500泵,K-1500溶剂组合器(Ger-many),Alltech2000ES蒸发光散射检测器(USA),BF2002色谱工作站(北京瑞利分析 仪器有限责任公司):KQ3200B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。1.2试药黄 芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0819-9802),红景天苷对照品(中国 药品生物制品检定所,批号:0818-200103),
贞芪扶正胶囊(甘肃扶正药业科技股份 有限公司批号:040318,040712,040809,041006,041204,041214,041217,050202),乙腈为色谱纯(Dikma),正丁醇,氨等其它试剂为分析纯,亚沸重蒸水。2方法与结果2.1黄芪甲苷的含量测定2.1.1色谱条件及适用性试验色谱柱Inertsil ODS-3 C18(5μm,250 mm×4.6mm);流动相为乙腈-水(37∶263),流速1.0 mL/m in;室温:ELSD检测条件:检测器漂移管温度106°C,载气(空气)流速2.7 L/m in。在上述色谱条件下,得到贞芪扶正胶囊供试品及黄芪甲苷对照品色谱图(见图1A、B),黄芪甲苷的保留时间为10.893 m in,色谱峰的对称因子为1.00,按黄芪甲苷计算的理论塔板数为n=12 774,黄芪甲苷与相邻色谱峰的分离度为2.6。2.1.2供试液的制备取10粒胶囊,倾出内容物,混匀,精密称量约0.8 g,置50 mL锥形瓶中,加甲醇25 mL浸泡过夜,超声1 h,过滤,回收甲醇。残渣用60 mL水饱和的正丁醇溶解,移置分液漏斗中,用氨试液(40%)洗涤两次,每次20 mL,减压回收正丁醇,残渣加甲醇溶解,定容到10 mL,用0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液<3>。2.1.3阴性样品的制备精密称量阴性样品(黄芪阴性)约0.8 g,按2.1.2项下方法依法制备,即得阴性样品液。进样10μL,按上述色谱条件测定。结果见图1C。在色谱图上约10 m in处无色谱峰出现,即阴性样品不干扰黄芪甲苷测定。图1黄芪甲苷H PLC-EL SD色谱图A贞芪胶囊样品B黄芪甲苷对照品C黄芪甲苷阴性样品2.1.4对照品溶液的制备精密称量黄芪甲苷对照品9.53 mg,置50 mL量瓶中,加适量甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,即得0.190 6 mg/mL的对照品溶液。2.1.5标准曲线的绘制取黄芪甲苷对照品溶液,分别精密吸取4,8 ,12,16,20μL注入液相色谱,测定峰面积。以峰面积的对数为纵坐标,黄芪甲苷进样量(μg)的对数为横坐标绘制标准曲线,回归方程为logA=1.6990logC+5.622 7,相关系数R=0.999 5,黄芪甲苷在0.76~3.81μg范围内呈良好的线性关系。2.1.6加样回收率实验取已知含量的本品内容物,精密称取约0.45 g,6份,分别加入对照品溶液0.5 mL,按2.1.2项下制备供试品溶液,吸取供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,记录峰面积 ,以外标两点法计算回收率为98.4%,RSD为0.9%,结果表明本法加样回收率良好,见 表1。表1回收率测定结果样品含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)
回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.9950 0.953 1.939 99.10.952 4 0.953 1.885 97.91.016 2 0.953 1.951 98.1 98.4 0.90.973 3 0.953 1.903 97.60.969 5 0.953 1.921 99.90.939 7 0.953 1.876 98.32.1.7精密度实验取批号为041006的样品供试品溶液,吸取10μL,重复进样 5次,测定样品中黄芪甲苷的含量,RSD为1.38%,测定方法的精密度良好。2.1.8重复性试验精密称取批号为041214的胶囊内容物样品5份,每份0.8g,照2.1.2项下制备供试品溶液,分别吸取10μL,进样,测定含量。黄芪甲苷平均含量为2.15 mg/g,RSD=1.9%(n=5),测定方法重复性良好。2.1.9稳定性试验取批号为050202的样品供试品溶液,分别于0,2,4,6,8 h进样10μL,测定峰面积的RSD=2.17%,说明供试品溶液中黄芪甲苷在8 h内稳定。2.1.10最低检测限取黄芪甲苷对照品溶液,加适量甲醇适当稀释,测定,当信噪比 S/N=3时,黄芪甲苷的最低检测限为0.114μg。2.1.11样品测定精密称取胶囊内容物0.8g,按2.1.2项下制备供试品溶液,进样10μL。另取黄芪甲苷对照品溶液8μL和16μL ,分别注入液相色谱仪,以外标两点法计算含量,结果见表2。表2含量测定结果(n=3)批号内容物含量(mg/g)RSD(%)0403182.22 2.15040712 2.14 1.86040809 2.13 1.93041006 2.09 1.44041204 2.26 1.73041214 2.17 2.21041217 2.11 1.67050202 2.24 2.032.2红景天苷的含量测定2.2.1色谱条件及适用性试验Inertsil ODS-3 C18(5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱;用溶剂组合器A、B电磁阀控制改变流动相比例,在进入高压泵前混合供液,进行低压梯度洗脱;流动相为乙腈-水(0~10 m in,10∶90;20~25 m in,30∶70;30~38 m in,10∶90),流速1.0 mL/m in:检测波长278 nm;柱温30°C。在上述色谱条件下,得到贞芪扶正胶囊供试品及红景天苷对照品色谱图(见图2A,B),红景天苷的保留时间为11.469 m in,色谱峰的对称因子为1.04,按红景天苷计算的理论塔板数为n=11 283,红景天苷与相邻色谱峰的分离度为3.8。2.2.2供试液的制备取10粒胶囊,倾出内容物,混匀,精密称量约0.8 g,置50 mL锥形瓶中,加甲醇25 mL浸泡过夜,超声1 h,过滤并洗涤,蒸干回收甲醇,残渣加甲醇适量洗涤,定容到5 mL量瓶中,用0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液<4>。2.2.3阴性样品的制备精密称量阴性样品(女贞子阴性)约0.8 g,按2.2.2项下方法制备女贞子阴性样品溶液。吸取10μL进样,按上述色谱条件测定,得到色谱图2C。在色谱图上11.5 m in处无色谱峰,即阴性样品不干扰红景天苷测定。2.2.4对照品溶液的制备精密称量红景天苷对照品约5 mg,置25 mL量瓶中,先加适量甲醇溶解,再加甲醇至刻度,摇匀,备用。2.2.5标准曲线的绘制分别精 密吸取红景天苷对照品溶液2,4,8,12,16,20μL注入液相色谱,测定峰面积。以峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线,回归方程为A=269158.562 5C+13 014.65,相关系数R=0.999 9,红景天苷在0.4~4μg范围内呈良好的线性关系。图2红景天苷H PLC色谱图A贞芪胶囊样品B红景天苷对照品C红景天苷阴性样品2.2.6加样回收率实验取已知含量的本品内容物,精密称取约0.4 g,5份,分别加入对照品溶液1.5 mL,按2.2.2项下制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液及红景天苷对照品溶液10μL注入 液相色谱仪,记录峰面积,以外标对照法计算样品的平均回收率为100.7%,RSD为2.1 %,结果见表3,本法加样回收率良好。表3回收率测定结果样品含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.3110.330 6 0.646 6 101.50.309 0.330 6 0.652 0 103.80.312 0.330 6 0.643 7 100.3 100.7 2.10.318 0.330 6 0.643 6 98.60.311 0.330 6 0.639 0 99.22.2.7精密度实验取批号为040712的样品供试品溶液,吸取10μL,重复进样 5次,测定样品中红景天苷的含量,RSD为2.0%,测定方法精密度良好。2.2.8稳定性试验取批号为041204的样品供试品溶液,分别于0,2,4,6,8h进样10μL,测定峰面积的RSD为2.2%,说明供试品溶液在8 h内稳定。2.2.9样品测定精密称取胶囊内容物0.8 g,按2.2.2项下制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液及红景天苷对照品溶液10μL注入液 相色谱仪,以外标法计算含量,结果见表4。表4含量测定结果(n=3)批号内容物含量(mg/g)RSD(%)0
More abstracts about the 贞芪扶正胶囊中黄芪甲苷和红景天苷的含量测定