HPLC与二极管陈列检测(DAD)和质谱(MS)技术联用,可以在化学成分分离的同时,在线 提供每个谱峰的紫外图谱和质谱信息。在多数情况下,通过对比文献数据或与标准化合物对照可以 鉴定各谱峰的化学成分结构。因而,用HPLC/DAD/MS联用技术可以直接分析、鉴定在成 分很复杂的中药药材中的某种化学成分。厚朴药材的主要成分是和厚朴酚与厚朴酚,常被用作厚朴 的质量评价标准<1>。我们在利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究厚朴化学成分中 ,发现和厚朴酚峰与厚朴酚峰之间有相对含量较高的未知峰。本文利用HPLC/DAD/MS联 用技术,通过对比厚朴化学成分文献数据<2-7>,鉴定了此未知峰的化学成分,为厚朴化学成分的鉴定以及HPLC指纹图谱提供有效帮助。1实验部分1.1仪器与试剂仪器HITACH I液相色谱仪,包括H ITACH I IntegratorD-7500,H ITACH I Pump L-7150,H ITACH I Detector L-7420UV-VIS;HP 1100 LC/MS 1949A美国安捷伦公司(惠普公司)制造;AS系列超声波清洗器;AL-01溶剂过滤器。试剂厚朴药材为市售,经本校药学院中药学教研室刘永教授鉴定为Magnolia officinalis的干燥树皮。厚朴酚及和厚朴酚的对照品由日本和光纯药工业株式会社提供 ;甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,所有溶剂都经过0.45μm的过滤器过滤并脱气。1.2实验条件色谱条件色谱柱:Alltim a C185μm 150 mm×4.6 mm;流动相:甲醇-水(75:25);柱温:30℃波长:254 nm;流速:1.0 mL/m in。质谱条件记录总离子流(TLC)色谱图,离子扫描方式:APC I(-),质量扫描范围m/z 100-500;毛细管电压:6000V;传输/裂解电压:70 V;干燥气(N2)流速:4 L/m in;雾化气(N2)压力:40 psi;干燥气温度:300℃。1.3对照品及样品溶液的制备对照品配制0.2 mg/m l厚朴酚,和厚朴酚的甲醇溶液,取配制的厚朴酚与和厚朴酚溶液,等量混合即得对照品溶液。样品精称1.00 g厚朴粗粉,置50 mL的具塞锥形瓶中加甲醇溶液20 mL,振摇,超声0.5 h,室温浸提24 h,滤过,定容在25 mL的量瓶中,摇匀,用0.45μm滤膜过滤,即得。1.4实验步骤每次取5μL样品溶液进样,记录20 m in内的高效液相色谱图(见图1)。图1厚朴药材的高效液相色谱图2结果与讨论2.1 HPLC-DAD分析结果在厚朴提取物的HPLC图中,厚朴酚与和厚朴酚之间有一个未知峰,保留时间为10.168 m in,对未知峰在200~400nm的波长范围内进行三维扫描,结果在206 nm和272 nm处有最大吸收。2.2 HPLC-MS分析结果在APC I(-)中,未知色谱峰的
-离子峰m/z为281.1;碎片峰m/z为164.1和 133.1见(图2)。图2未知物分子离子峰与未知物离子碎片峰2.3未知峰的鉴定有关文献 <6>报道分子量为282的物质由于其分子量比厚朴酚与和厚朴酚分子量多16,可能是羟基取 代化合物。我们通过厚朴药材化学成分文献报道<7~8>,推测出分子量为282的物质可能是obovatol或4,4-′diallyl-2,3-′d ihydroxy b i-phenyl ether。从未知物的碎片峰可知:m/z 164.1为<(M-1)-C9H9>-1峰,m/z 133.1为<(M-1)-C9H9O2>-1峰,从而确认未知物化合物中含有苯氧烯丙基。未 知物的DAD和MS的数据与obovatol文献值<7>一致。因此,未知物是二个苯环介于 氧连接的木质素obovatol。通过chem-3D估算,obovatol的极性小于厚朴酚、大于和厚朴酚,这与HPLC中色谱峰的流出顺序一致。图34,′5-d ia lly l-2,3-d ihyd roxy b ipheny l ether2.4 obovatol的结构特性及活性图4 4,4-′d ia lly l-2,3-′d ihyd roxy b ipheny l ether据文献<8>报道obovatol可能是从对-烯丙基苯酚和4-烯丙基儿茶酚合成而 来的,是一种具有C-O酚类化合物骨架的稀有化合物。迄今为止尽管C-C酚类的木酚素化合物 ,如厚朴酚与和厚朴酚在木兰科的植物中被发现,有趣的是在厚朴药材中存在大量的这种C-O酚 类化合物。这可能对化学分类学和木兰科植物生物合成活性尤为重要。obovatol对S.mutansMT5091(serotypec)和OMZ176(serotype d)抗细菌成分的最小抑制浓度为M IC50μg/mL。本实验利用LC-MS将厚朴药材提取成分进行分离,同时根据质谱提供的化 合物的分子量碎片信息,结合厚朴药材化学成分的有关报道,鉴定了厚朴药材中另一种化学成分o bovatol,此化学成分在国内的论文中尚未见报道。高效液相色谱法-二极管阵列检测-质谱法初步鉴定厚朴中的obovatol@孙艳涛$延边大学理学院化学系!吉林延吉133002
@王大力$延边大学理学院化学系!吉林延吉133002
@金东日$延边大学理学院化学系!吉林延吉133002HPLC/DAD/MS;; 厚朴;;o bovatol<1>王承南,夏传格.厚朴药理作用及综合治理利用研究进展.经济林研究,2003,21(3):80.
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