HPLC法测定广西十个不同产地两面针中新棒状花椒酰胺的含 量
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出版日期： 六月 30, 2005
两面针
系芸香科花椒属植物,别名 上山虎、入地金牛、两背针,主要分布于我国广西、广东、云南、贵州、四川、浙江、福建、江西 、台湾等省,生于山野坡地灌木丛中。中药两面针具有悠久的药用历史,其根和茎皮具有驱风化湿 、消肿止痛、行气之功效,民间用中药两面针水煎服或研粉冲服,广泛用于镇痛、抗炎和麻醉,主 治风湿关节痛、跌打扭伤肿痛、神经痛、牙痛、肠胃绞痛、胆道蛔虫症引起的疼痛及疡病等<1～ 3>。早在1982年曾报导从中药两面针中分离出来一种木脂素化合物叫两面针结晶8(结构未 确定)具有解痉、镇痛和镇静等作用<4>。1983年洪等还报导了两面针结晶8镇痛作用机理 <5>。但这种具有解痉、镇痛和镇静等活性作用化合物的结构还不清楚,作者为了进一步地研究 中药两面针中具有解痉、镇痛和镇静等活性的化合物,从两面针中分离出来一种具有镇痛、抗炎和 止血活性作用的化合物,经鉴定为新棒状花椒酰胺,又名α山椒素。本研究首次采用HPLC法测 定两面针中的新棒状花椒酰胺的含量,并对广西十个不同产地的两面针进行了含量分析的比较,为 具有镇痛、抗炎和止血活性作用的两面针的开发应用提供可靠的理论依据。1仪器、药材和试剂1 .1仪器日本岛津UV2201紫外分光光度计,日本岛津高效液相色谱仪(LC10A高压泵, SPD10A紫外检测器,GS-light色谱数据处理软件)。1.2药材新棒状花椒酰胺对 照品由本研究小组分离和鉴定。两面针样品采自广西的金秀,百色,北流,钦州,苍梧,天峨,桂 平,邕宁,桂林,龙州十个不同产地。样品由柳州两面针股份有限公司黄光伟高级工程师鉴定,并 保存在柳州两面针股份有限公司。1.3试剂乙腈:HPLC级色谱纯甲醇:HPLC级色谱纯2 实验方法2.1色谱条件大连依利特公司HYPERSILBDSC18高效液相色谱柱(5μm ,4.6mm×250mm),C18保护柱,检测波长:268nm,柱温:40℃,流动相: 乙腈水(50:50),流速:1.0mL/min,进样量:20.0μL,外标法定量。2. 2求标准曲线和线性回归方程准确称取0.0100g新棒状花椒酰胺对照品,用HPLC级甲醇 溶解后定容于50mL容量瓶中,摇匀后作为对照品贮备液。准确量取对照品贮备液0.50mL 、1.00mL、2.00mL、5.00mL和8.00mL于10.00mL容量瓶中,以H PLC级甲醇定容至标线,摇匀,得对照品溶液。表1对照品新棒状花椒酰胺的浓度和峰面积Table1Theconcentrationandthepeakareaofneoherculinasreferencesubstance浓度Concentration(mg/mL)峰面积Peak area123平均值Meanvalue0.0118279821800490181279 118137540.0235331573623940359068435825940.0 471904067267511695539871377720.101770828017 34447317501177175179770.1627819836282577562 833635828137983取各浓度对照品溶液20.0μL进样测定,每个浓度进样3次 ,以平均峰面积为纵坐标,对应的浓度c(mg/mL)为横坐标作标准曲线和线性回归方程,在 0.01～0.16mg/mL范围内的线性关系良好,见表1和图1。图1对照品新棒状花椒酰 胺的标准曲线和线性回归方程Fig.1Thestandardcurveandthelinearregressionequationofneoherculinasreferencesubstance2.3样品测定取广西十个不 同产地两面针根的干燥横切薄片约0.55g,精密称定,置于100mL圆底烧瓶中,加45m LHPLC级甲醇,于68℃水浴中加热回流2h,冷却后用甲醇定容至50.00mL,摇匀, 用0.45μm有机相滤膜过滤,取20.0μL进样测定,每个样品进样3次,以平均峰面积根 据线性回归方程计算其浓度(mg/mL),然后计算药材中新棒状花椒酰胺的含量(%)。对照 品溶液与两面针原根药材中的色谱图见图2和图3。图2对照品溶液色谱图(3:新棒状花椒酰胺 )Fig.2Thechromatogramofneoherculinasreferen cesubstance(3:Neoherculin)2.4精密度试验在十个不同产地两面 针样品中,精密吸取试样溶液20.0μL,连续进样3次,计算RSD。2.5加标回收率的测 定图3两面针根提取液色谱图(27:新棒状花椒酰胺)Fig.3ThechromatogramofneoherculininrootofZanthoxylumnitidumextract(27:Neoherculin)准确量取已经过测定、含量已知 的百色两面针横切片,准确加入一定量的新棒状花椒酰胺对照品,依2.3法提取,测定并计算加 标回收率。3实验结果3.1新棒状花椒酰胺的含量(%)和RSD(见表2)表2广西十个不同 产地两面针中新棒状花椒酰胺含量Table2ThecontentofneoherculininZanthoxylumnitdinerootthatfrom10differentgrowingareasatGuangxiprov ince产地Growingareas平均含量(%)Meancontent(%)标准偏差 RSD金秀0.4680.016百色0.1560.004北流0.1350.006钦州0. 0830.002苍梧0.0180.001天峨0.0780.004桂平0.0840.00 4邕宁0.0260.001桂林0.0090.002龙州0.0790.0043.2加标回 收率实验结果(见表3)表3加标回收率实验结果(n=3)Table3Recoveryra teofthesamples(n=3)加入量Sample(mg/mL)测得量Recoverysample(mg/mL)回收率Recoveryrate(%)平均回收率Meanrecovery rate(%)标准偏差RSD(%)0.027630.02837102.70.083640 .08453101.1101.41.140.14820.1489100.54讨论本研究 小组在对两面针有效成分的研究中发现,两面针中的新棒状花椒酰胺(又名α-山椒素)具有镇痛 、抗炎和止血生物活性。现对广西十个不同产地两面针根中的新棒状花椒酰胺进行了含量测定,结 果发现采自广西金秀的样品含量最高,为0.468%,其次是百色样品,为0.156%,含量 最低的是桂林样品,为0.009%。这为两面针在镇痛、抗炎和止血等方面的开发利用提供了可 靠的科学依据,具有重要的应用前景。HPLC法测定广西十个不同产地两面针中新棒状花椒酰胺的含量@刘绍华$柳州两面针股份有限公司博士后工作站!柳州545001
@覃青云$柳州两面针股份有限公司博士后工作站!柳州545001
@唐献兰$柳州两面针股份有限公司博士后工作站!柳州545001
@方堃$柳州两面针股份有限公司博士后工作站!柳州545001
@杨卫豪$柳州两面针股份有限公司博士后工作站!柳州545001
@张祥民$复旦大学化学系!上海200433高压液相色谱;;两面针;;新棒状花椒酰胺;;α -山椒素分析并比较了广西十个不同产地的两面针中具有镇痛、抗炎和止血活性的新棒状花椒酰胺 的含量。采用HPLC法,色谱柱为HYPERSILBDSC18,流动相为乙腈:水(50: 50),流速为1.0mL/min,柱温40℃,检测波长268nm,进样量为20.0μL 。发现不同产地的两面针中新棒状花椒酰胺的含量差别较大,金秀样品含量最高,为0.468% ;桂林样品含量最低,为0.009%。本研究将为两面针在镇痛、抗炎和止血等方面的开发利用 提供了可靠的科学依据,具有重要的应用前景。1 JiangsuNewMedicalCollege(江苏新医学院).ChineseTraditionalMedicineDictionary(中药大词典上册).People’s PublishingHouseofShanghai(上海人民出版社),1977.40
2 YangCL(杨仓良).ThePoisonousHerbsofBenCao(毒药本草 ).Beijing:ChineseMedicinePressRR(中国中医药出版社),1993.431
3 ThePharmacopoeiaCommissionofPRC(国家药典委员会).P harmacopoeiaofThePeoplesRepublicofChina(中华人 民共和国药典).Edition2000,Vol.I,herbalmedicinevol ume.Beijing:BeijingChemicalIndustryPress(化学工业出版社),2000.133
4 ZengXY(曾雪瑜),ChenXF(陈学芬),HeXQ(何兴全),et al.Studiesontheantispasmodicandanalgesicactionsofcrys tal8isolatedfromZanthoxylumnitidum(ROXB.)DC.Acta PharmacolSin(药学学报),1982,17:253258
5 HongGX(洪庚辛),ZengXY(曾雪瑜).Studiesonthe mechanismofanalgesicactionofcrystal8isolatedfromZan thoxylumnitidum(
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