随着中药现代化研究的不断深入 ,名优产品的质量标准升级 ,中药品种的延期保护 ,以及中药产品的国际化 ,都需要以科学的方法制订质量标准 ,以阐明其药效的物质基础。但由于中药制剂的化学成分复杂 ,有效成分难以确定 ,仅单方制剂也是多种成分组成的混合物 ,因此要求更严格和更先进的分离分析手段进行鉴别和含量测定。近年来 ,随着各种先进仪器的引进和应用 ,现代仪器分析技术在中药质量分析中大量被采用 ,为保证药品质量发挥了一定作用。其中高效微量现代分离分析技术使中药及天然药物有效成分的分离分析的速度和精度也明显提高 ,如薄层色谱、气相色谱、高效毛细管色谱等已得到普遍应用。而超临界色谱、高效逆流色谱、高效毛细管电泳、色谱 质谱联用技术等现代分离分析技术也开始在中药研究中得到广泛的应用 ,现将这些现代分离分析技术与方法综述如下。1 超临界流体色谱法超临界流体色谱法 (supercriticalfluidchromatography ,SFC)是利用超临界流体为流动相 ,具有穿透力强 ,提取率高 ,不破坏样品 ,不需要回收溶剂的分离分析技术。超临界流体是指物质在高于其临界温度和临界压力时的一种物态 ,既不是气体 ,也不是液体 ,但兼有气体的低黏度、液体的高密度以及介于气、液之间的扩散系数等特征 ,所以既可分析气相色谱 (gaschromatography ,GC)不适应的高沸点、低挥发、热不稳定的样品 ,又比高效液相色谱 (highperformanceliquidchromatography ,HPLC)有更快的分析速度和更高的柱效率。超临界流体通常有CO2 、N2 、N2 O、C2 H4 、CHF3等。其中最常用的是CO2 ,因其具有临界条件好、无毒、安全、对生态环境污染最小等优点。SFC已广泛用于中草药及天然药产品的提取 ,并与气相色谱、红外、质谱等联用形成较为有效的分离分析技术。吴燕飞等<1> 利用超临界CO2 技术二级分离及气质联用对草果挥发性成分研究 ,鉴定出 2 3种成分 ,其中 12种成分首次从该植物中得到。辉国均等<2 > 用超临界CO2 萃取紫苏子脂肪油 ,甲基化后经气质联用分析鉴定出 12种成分 ,其中 8种成分为首次得到。此外 ,针对SFC分离强极性和离子型化合物时洗脱时间长及色谱峰拖尾状况 ,发展到离子对SFC ,该项技术是SFC的一个有效补充 ,扩展了其分析对象的范围。离子对SFC包括应用离子对SFC、反相胶束SFC和选用其他溶剂化能力强的流动相如氨气、氧化亚氮等。离子对SFC已成为一种广泛采用的色谱分离方法 ,能同时分离离子型化合物和中性化合物 ,柱效、回收率和灵敏度比较高<3> 。Keiichi等<4 > 采用超临界流体和质谱联用技术分析了中药中小檗碱和巴马汀 ,该系统从而扩展了分析中药生物碱的手段 ,对样品可以进行快速有效的预处理和分离分析。SFC在药物分析方面的应用日益普遍 ,离子对色谱技术可弥补SFC的不足。此外 ,随着超临界流体萃取法及SFC (supercriticalfluidextraction SFC ,SFE/SFC)联用技术的飞速发展 ,离子对超临界流体萃取及离子对SFC也必定会逐步得到推广应用 ,以提高样品回收率及分析灵敏度 ,在中药分离分析方面显示出广阔的应用前景。2 高速逆流色谱技术高速逆流色谱技术 (highspeedcounter currentchromatography ,HSCCC)是 2 0世纪 80年代由美国Y .Ito博士发明的一种新的逆流色谱技术。它是基于液 液分配原理 ,利用螺旋管的方向性与高速行量式运动相结合 ,产生一种独特的动力学现象 ,使两相溶剂在螺旋管中实现高效地接触、混合、分配和传递具有分离效率高、超载能力强、溶剂用量少 ,无气相色谱中固体载体的吸附现象 ,应用范围广 ,特别适用于极性化合物的分离。HSCCC技术已成功地用于天然化合物、合成产物及生物样品的分离和纯化 ,据文献报道已在生物碱、黄酮、萜类、木脂素、香豆素等成分的研究中获得成功。佘佳红等<5> 提出用HSCCC分离分析白果内酯的简便方法。蔡定国等<6 > 先后报道了应用HSCCC技术 ,从银杏叶提取物中分离纯化得到 3种主要苷元 (槲皮素、山奈素、异鼠李素 )。佘佳红等<7>发现HSCCC具有对样品的分离效率高、产品纯度高、无吸附和无污染等优点 ,使其将成为制备银杏黄酮苷元以及各银杏内酯和白果内酯对照品的理想手段。目前用HSCCC技术提取分离银杏叶中黄酮苷及总内酯成分 ,已引起各国有关专家的重视。3 高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法 (highperformancecapillaryelectrophoresis ,HPCE)产生于 2 0世纪 80年代后期 ,是以毛细管为分离通道 ,以高压直流电压为驱动力的一类新型电泳技术。与常用的HPLC相比 ,具有分析时间短、分离效率高、适应性广、检测限低、进样量少、溶剂消耗少、自动化程度高和运转费用低等优点 ,所以已成为目前色谱领域中发展较快的 1个分支 ,并且在生命科学、生物技术 ,医药等领域显示了极其重要的应用前景。HPCE有多种分析模式 ,毛细管区带电泳为基本操作模式 ,另外还有毛细管胶束电动色谱、毛细管等速电泳、毛细管等电聚焦色谱、毛细管凝胶电泳、毛细管电色谱、非水毛细管电泳等。这些新型分离分析技术 ,已经开始在中药研究领域中得到应用 ,如采用毛细管区带电泳和毛细管胶束电动色谱模式对生物碱、黄酮类、香豆素、有机酸和各种苷类成分进行分离分析。胡平等<8> 用 2种毛细管电泳模式对菟丝子的不同种属进行鉴别 ,用毛细管区带电泳分离分析酸溶、碱溶蛋白 ,发现南菟丝子、北菟丝子和日本菟丝子的蛋白组分有明显不同 ,可有效区分 ,且分辨率比凝胶电泳法大为提高 ,并用毛细管胶束电动色谱模式对 3种菟丝子中各种黄酮成分做了定性定量测定。此外 ,HPCE与其他进样技术 ,如流动注射分析联用 ,不但可使测定精度提高 ,而且能完成连续自动进样及在线分析 ,适用于大批量样品的测定。采用毛细管电泳 质谱 (capillaryelectrophoresis massspetrometer,CE MS )、毛细管电泳 核磁 (capillaryelectrophoresis nuclearmagneticresonanace ,CE NMR)及毛细管电泳 质谱 质谱 (capillaryelectrophoresis massspetrometer massspetrometer,CE MS MS)等联用技术 ,充分利用HPCE的高分离效率和MS或NMR的高灵敏度与定性鉴定能力 ,可快速完成众多复杂成分的分离与结构鉴定 ,在中药及其复方制剂化学成分的分析中尤为重要。4 气相色谱与质谱联用技术气相色谱与质谱联用 (gaschromatography massspectrometry ,GC MS)技术已属于较为成熟的技术 ,但其应用面较窄 ,在中药研究中主要应用于中药挥发性成分的分离、鉴别。王炎等<9> 运用GC MS技术对北五味子的种子水蒸汽蒸馏所得的油状物 ,并结合计算机检索对之化学成分进行分离和鉴定。魏刚等<10 > 采用GC MS对侧柏叶药材及鲜品挥发油进行分析。谢君等<11> 对党参挥发油及脂溶性物质经水蒸气蒸馏提取后 ,经GC分离 ,再用GC MS进行鉴定 ,分离出 2 6 8种化合物 ,利用加标定性 ,GC MS联用和计算机数据库检索鉴定出 6 7种物质。李绪文等<12 > 用GC MS分离测定了东北天南星根乙醚提取物中脂肪油成分及相对含量 ,并鉴定了 16种脂肪酸成分。林翠悟等<13> 用毛叶木姜子叶的水蒸汽蒸馏所得的油状物 ,通过GC MS分析 ,结合计算机检索技术对其化学成分进行分离和鉴定 ,应用色谱峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量 ,分离和鉴定了 4 1种成分 ,占挥发油总量的 91.4 6 %。此外 ,由于GC实现了色谱技术的快速和仪器化 ,许多含挥发性组分的芳香中药都应用GC进行了研究 ,在制剂中GC还用于这类成分的定量分析。近年来 ,高分辨率毛细管GC技术的发展特别是与MS的联用检测 ,使GC在中药质量研究中进入了更高的层次 ,但由于GC仅适用于那些沸点较低、具有挥发性的化学成分 ,限制了GC的应用<14 > 。5 液相色谱与质谱联用技术与GC MS相比 ,液相色谱与质谱联用 (liquidchromatography massspectrometry ,LC MS) ,尤其是HPLC MS技术在天然药物化学研究中具有更广泛的应用前景 ,它可在短时间内 (通常 <1h)给出植物粗提物或某一流分中各成分的质谱图。该方法结合了LC的强分离能力与MS高灵敏度和强鉴别能力 ,可对成分复杂的样品直接进行分离、分析 ,目前HPLC/MS已成为生命科学、医药和临床等领域最常用的工具之一 ,可望成为中药研究中最具有潜力的分离分析手段。李顺意等<15> 采用RP HPLC ESI/MS MS对竹节香附皂苷提取物的化学成分进行分析 ,通过进一步分析可以同时分离并鉴定出竹节香附中的竹节香附皂苷R2 、R3、R6 、R7、R8和R9等 6种有效成分 ,同时也发现原来没有报道的成分。施超欧等<16 >利用LC MS对丹参注射液进行分析 ,建立了丹参注射液指纹图谱 ,同时确定了注射液中几个强峰的组分及其相对分子质量。随着大气压化学电离 ,特别是电喷雾技术方法的研究出现 ,HPLC/MS得到了突破性发展。其中 ,热喷雾LC MS被广泛应用于其他多种植物成分的测定 ,如黄酮类 (包括黄酮
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