近年来,由于抗生素、糖皮质激素及免疫抑制剂的广泛应用,加之肿瘤、白血病、糖尿病、免疫缺陷 性疾病的日渐增多导致人机体免疫力下降,使得诱发深部真菌感染的机率亦呈逐年上升趋势,其中 以白色念珠菌为病原菌的感染率最高川。目前抗深部白色念珠菌感染的首选药物为氟康哇,但研究 证明其在免疫功能低下时,疗效不理想<“}。故近年来在抗真菌治疗时加人提高机体免疫功能的药物已成为主要研究方向。竹叶石膏汤出自张仲景之《伤寒论》,本为“虚赢少气,气逆欲吐”所设,用于治疗热病后期气津两 伤之证。本文观察了该方对小鼠深部念珠菌病的治疗作用,现报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1药物竹叶石膏汤由竹叶巧g,生石膏309,人参59,麦冬159,制半夏99,炙甘草39,粳米巧g制成煎剂(剂量参照5版方剂学)。上药分3次煎煮,经 过滤、离心后取上清,再浓缩至含生药Zk留L存于4℃冰箱内备用,用前复温25℃-30℃; 氟康哇溶液取氟康哇胶囊(海南曼克星制药厂生产,批号:030良)1)中白色粉末用蒸馏水配 成66.7岁L、33.3岁L溶液,保存及使用方法同上;环磷酞胺(上海华联制药有限公司生 产,批号:030214)以生理盐水充分溶解后4℃冰箱内保存备用,用前复温25℃一30℃ 。1.1.2动物昆明种健康小鼠,5周龄,由辽宁中医学院实验动物中心提供(辽实合字第03 3),雌雄各半,用固体饲料喂养,实验前预养l周,体质量为18一229,实验期间统一饲养 。1.1.3供试菌株白色念珠菌(Cand如阮albica。,C.albica。)LTCM一FD仪刃1BUM一18248株由辽宁中医学院微生物免疫教研室提供。1.2方法1.2.1接种菌液的调 制将C.albica。接种于葡萄糖沙保氏培养基上,37℃恒温箱中培养24h后经生理盐水 洗涤3次制成悬液,再用血球记数板调整菌液至所需浓度。1.2.2生存保护实验将小鼠随机分 成免疫抑制组与非免疫抑制组,每组再分为4个组,分别命名为模型组、中药组、西药组、中西药 合用组。免疫广州中医药大学学报2(X万年第22卷抑制小鼠模型复制方法为腹腔1次性注射环磷酞胺(2001llg/kg)0.2mL,非免疫抑制小鼠则注射生理盐水0.2mL。注射环磷酞胺sd后,根据预实验结果,实验各组小鼠经尾静脉接种菌液0.2mL(非免疫抑制组菌液浓度为8 xl护/L;免疫抑制组为3xl护/L),接种3h后给药。中药组灌胃竹叶石膏汤煎剂0.3m L(30岁kg);西药组灌胃氟康哇溶液0.3mL(免疫抑制组剂量为Inl岁吨,非免疫抑 制组为0.5m岁kg)。中西药合用组灌胃如下:免疫抑制组给予竹叶石膏汤o.3mL(30岁kg)及氟康哩溶液0.3mL(lmg/kg);非免疫抑制组给予竹叶石膏汤0.3mL(30『kg)和氟康哇溶液0.3mL( o.sm岁kg)。中药与西药间隔lh给药;模型组给予等容积蒸馏水。均每天1次,从种菌之 日起连续观察3周,记录生存情况的变化。1.2.3肾脏内活菌数测定另取与上述同样数目小鼠 ,以同样方法分组造模给药7d后,取出各组小鼠双肾置于玻璃研磨器内,加人smL生理盐水研 碎制成ro倍稀释系列,取10-3稀释度溶液lmL,接种于无菌沙保氏培养基上,每个悬液培 养3块平皿,置于37℃温箱中培养48h后,肉眼观察平皿中菌落数,并按公式计算肾组织中菌 落数:n总活菌二N同一稀释度3块平皿中菌落平均数xn稀释倍数。.2.4统计方法各组间的 统计学差异用单因素方差分析,多样本均数间两两比较用q检验。2结果与分析2.1一般状况免 疫抑制组与非免疫抑制组小鼠在实验期间均未死亡。小鼠感染念珠菌后出现便稀、多饮、多尿、消 瘦、食欲不振、喜静倦卧、皮毛欠光华等症状,免疫抑制组小鼠症状表现较非免疫抑制组明显,并且出现较早,持续时间较长。2.2生存保护实验表1结果显示:竹叶石膏汤在治疗免疫功能低下状态小鼠模型时能有效提高小鼠生存时间,而对免疫 功能正常状态则无明显效果;单用西药及中西药合用均较单一应用竹叶石膏汤效果好;中西药合用较单用西药效果显著。2.3肾脏内活菌数测定表2结果显示:竹叶石膏汤在治疗免疫功能低下状态小鼠模型时能有效抑制念珠菌在肾脏的生长,而 对免疫功能正常状态小鼠则无明显效果;单用西药及中西药合用均较单一应用竹叶石膏汤效果好;中西药合用较单用西药效果显著。3讨论近年来真菌感染有明显上升趋势,主要与滥用 表1竹叶石*汤对小鼠生存时间的影响殆b妇IE堆烈of动仍想助娜扣以泊阅t加mm加survN日Iti帕(无士:)t/而nG阴伴非免疫抑制状态免疫抑制状态斑饱日ive st日IeInullun‘犯u00n,sive川川e2020加20模型组(n拟kl)中药组(ZSD)西药组(flu~le)中西药合用组(路D+nuc朋脚le)6 .40土1.叨6.印士1.4310.70土1.8913.40士2.91怪.△」己、二△△二7 .00土1 .639 .50士1.4313.10土2.的16.70士3.62.朴△△.,△△.口‘与模型组比较 (。nxxle一罗灿p)p<0.仍,**尸
。深部白色念珠菌感染患者可出现肺炎、支气管炎、肾盂肾炎、败血症等多系统疾病,临床证候表现多 样。氟康哇作为咪哩类第3代抗真菌药,因其具有毒副作用较低、水溶性好,可口服不受饮食限制等特点,被视为临床治疗深部白色念珠菌感染的首选药物困。近年来,诸多医家临床证明竹叶石膏汤用于治疗大病、久病后感染白色念珠菌者有较好疗效,辅助氟 康哇治疗效果更显。祖国医学认为疾病与人体正气盛衰密切相关,正所谓“正气存内邪不可干,邪 之所凑其气必虚”。在这一点上与现代医学对本病的认识一致。对于这种正虚而邪实的疾患,中医 主张标本兼施,补正与祛邪并重。竹叶石膏汤出自仲景之《伤寒论》397条“伤寒解后,虚赢少 气,气逆欲吐,竹叶石膏汤主之”,故竹叶石膏汤主治肺胃余热,气津两伤,痰阻气逆之证,除“ 虚赢少气,气逆欲吐”外,常伴有发热、心烦、口渴、舌红苔少、脉细数等症。方中竹叶甘寒清烦 热,石膏大寒清肺胃余热,两药协同,以清热除烦为主。人参益气生津,麦冬滋阴清热,配伍甘草 、粳米和胃气助中焦之运化,半夏和胃降逆化痰止呕,诸药相伍,津液生中气足,而虚热亦解。研 究表明人参具有调节大脑平衡、抗疲劳、提高免疫功能和应激能力,以及兴奋肾上腺皮质、增加心 功能、保肝等作用;麦冬有抗缺氧、调节免疫作用阔;石膏具有解热、镇静、消炎作用及免 疫促进作用<0>;竹叶有抗菌抗炎、解热利尿作用<’0>;甘草有皮质激素样抗炎、抗过敏作 用,对吞噬细胞呈双向调节作用,同时具有解痉、解毒、镇咳、祛痰、抗菌等作用【川。现代临床 将本方用于治疗乙型脑炎后期发热不退、麻疹并发肺炎、流行性出血热等的发热取得良好效果,对小儿夏季热效果尤佳【’2」。体外抗菌预试验显示:竹叶石膏汤无杀菌及抑菌作用,因此,该方对深部念珠菌病的治疗作用并非对 真菌的直接杀灭或抑制,而可能与增强机体免疫功能有关。本试验结果显示:竹叶石膏汤单用治疗 免疫功能正常的深部真菌感染疗效并不显著,但与氟康哩合用可增强氟康哇的疗效,而对免疫功能低下的深部念珠菌感染有效,可延长其生存时间,减少肾脏内活菌数。其具体机制有待进一步研究。人体对深部念珠菌病的保护性免疫是由体液免疫、细胞免疫共同参与的一种复杂反应,其中体液免疫 起主要作用〔’3〕。其反应机制主要与白介素、y干扰素、。肿瘤坏死因子、集落刺激因子、p 转化生长因子等细胞因子密切相关〔’4〕。由于系统性念珠菌病的发生多由于机体免疫功能低下 引起的,故临床常用具有调节免疫功能的生物应答调节剂(BRM)进行免疫治疗与免疫调节,但 该类药物价格昂贵,来源困难,并具有副作用,使用上受到一定的限制。而本研究表明中药方剂对 免疫相关疾病具有一定疗效,与西药合用有较好的协同作用,能调节其免疫功能〔’5〕,在临床 应用上有较好前景。竹叶石膏汤治疗深部念珠菌病的实验研究@太加斌$第二军医大学附属长海医院中医科!上海200433
@李琳$大连210医院理疗科!大连 116032
@高静东$第二军医大学附属长海医院中医科!上海 200433
@关庆增$辽宁中医学院经典教研室!沈阳 110032念珠菌病/中药疗法;;竹叶石膏汤/治疗应用;;疾病模型,动物;;小鼠<目的> 观察竹叶石膏汤对小鼠深部念珠菌病的治疗作用。<方法>昆明种小鼠160只,随机分成2组, 其中1组腹腔1次性注射环磷酰胺0.2mL(200mg/kg),复制免疫抑制状态小鼠模型 ,然后每组再分为念珠菌感染模型组、竹叶石膏汤组(中药组)、氟康唑组(西药组)和2药合用组(中西
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