0引言壳聚糖是一种天然高分子生物材料,它具有抗炎、增粘、抗纤维增生等药理作用<1>,同时 具有无毒、成膜性好、可生物降解、相容性好等优点。在眼科领域,将其制备成医用粘弹剂,人工 泪液、眼用药物长效缓释制剂等<2,3>。为了提高抗青光眼滤过手术的成功率,开拓新型抗纤 维组织增生的药物及应用方法,我们将丁酰化壳聚糖与丝裂霉素结合,然后植入兔眼巩膜瓣下,进 行实际释放性能的测定,为其应用奠定基础。1材料和方法1.1材料注射用丝裂霉素2mg/瓶 (进口药品注册证号:H20020163);丁酰化壳聚糖膜粘均Mr为90万,(中国科学院 兰州化学物理研究所提供);丝裂霉素标准品购于美国Sigma公司,色谱纯甲醇购自天津四友 公司,使用二次重蒸馏水配置溶液及流动相。其他试剂均为分析纯。Millennium色谱工 作站(Waters公司,美国)和六通进样阀(Rheo-dyne公司,美国)。Water s液相色谱系统包括600E泵,996紫外二极管检测器,分析柱为RAM4.6mm×150 mm,5μm,柱前带滤过器。流动相为甲醇水=10:90(V/V)流速0.8mL/min 。在364nm处检测,在线氦气脱气30mL/min进样量20μL,柱温为室温;新西兰白 兔体质量2～3kg,健康双眼球无异常,共12只,卫生部兰州生物制品研究所提供。1.2方 法将壳聚糖1g溶于10mL/L乙酸溶液50mL中,全溶后过滤,在玻璃上自然成膜,干燥后 浸入1mol/LNaOH溶夜中24h后,再用蒸馏水冲洗至中性,然后浸入到甲醇/丁酸酐( 1:1)溶剂中反应一定时间后取出,蒸馏水冲洗至中性,得丁酰化壳聚糖膜。取一定大小透明的 丁酰化壳聚糖膜浸入到含一定量的丝裂霉素生理盐水中,搅拌一定时间取出,干燥,得淡紫色丁酰 化壳聚糖丝裂霉素药膜备用。精确称取MMC,用水配制成浓度为0.04,0.08,0.12 ,0.16,0.2mg/L标准溶液分别进样,以峰高(X)值为横坐标,对应的浓度(Y)值为纵坐标,线性回归,绘制标准曲线,浓度与峰高成良好的线性关系,Y=3.251×10-3X +7.466r =0.9912,最低检测浓度为10μg/L。12只兔,24眼,10g/L地卡因表麻后,测 眼压(Schiotz眼压计测量),全身麻醉:氯胺酮+氯丙嗪各等量,0.6～0.8mL/ kg,im:眼部常规准备,制做结膜瓣及1/2厚度的板层巩膜瓣,切除小梁组织,周边虹膜切 除,12只兔子的右眼(12眼)均行药膜植入:将制备好的丁酰化壳聚糖丝裂霉素药膜4mm× 6mm植入巩膜床,前端距周边虹膜约1mm,覆盖巩膜瓣,其两端固定缝合,结膜瓣复位后连续 缝合。
对照组12只左眼均在Tenon囊与巩膜表层之间放置MMC棉片4mm×6mm(MM C0.25g/L)5min后去除,30mL9g/LNaCl冲洗,再行制作板层巩膜瓣,其 余步骤同右眼,术毕,双眼球结膜下注射庆大霉素4000U,地塞米松1mg,术后滴1g/L 氟美酮滴眼液3次/d,5g/L氯霉素滴眼液3次/d,1wk。分别于植入药膜后及放置MM C棉片冲洗后0.25,0.5,1,2,3,6,24h行兔眼前房穿刺术抽取房水100～2 00μL,经离心,超声清洗机脱气,进样20μL进行检测。2结果植入药膜组0.25,0. 5,1,2h房水中可检测出MMC浓度22.5～130.3μg/L,其余时间(3,6,2 4h)取样的房水中均未能检测到MMC。巩膜表面放置MMC棉片组仅0.25,0.5h可检 测到MMC,其他时间的房水取样中均未能检测到MMC。上述2组,单因素方差分析,MMC含 量具有非常显著性意义(P<0.001)。3讨论丝裂霉素为一种抗肿瘤抗生素,它能与DNA 的双链交叉联结,抑制DNA复制,也能使DNA断裂<4>,用于眼科抗青光眼的小梁切除术中 ,可以抑制巩膜瓣与筋膜囊(Tenon)组织的过度纤维化,减少瘢痕组织形成保持房水引流滤 过道的通畅,提高手术成功率。但由于MMC的毒性作用,传统方法是将吸附MMC的棉片或海棉 (MMC0.2～0.4g/L)置于小梁切除术中巩膜瓣表面或瓣下,2～5min后去除,生 理盐水冲洗。我们通过将改性后的壳聚糖膜植入兔眼小梁切除术的板层的巩膜瓣下进行观察,发现 其对兔眼组织无毒性损害,成膜性良好,可以生物降解,组织相溶性好<5>。在此基础上,将丁 酰化壳聚糖膜结合MMC制成药膜后植入巩膜瓣下,检测MMC的释放浓度,发现实验组明显高于 对照组。Mietz等<6>在一项兔眼表应用MMC后的眼组织浓度的研究中发现:MMC的浓 度在眼的不同组织中含量不同,巩膜含量>玻璃体含量>房水含量。Rump等<7>的研究显示 ,人眼小梁切除术中局部应用MMC,10min抽取房水,检测MMC的浓度,均低于10μg /L,而本实验的药膜15min后的浓度为130.3±53.9μg/L,这说明该膜具有一 定的缓释性能。房水中含有蛋白质,免疫球蛋白,电解质和多种酶类,植入的改性壳聚糖膜刺激炎 性细胞产生大量的溶菌酶,使膜降解的同时亦使MMC易于分解代谢<8>。兔眼房水循环代谢较 快,在实验中我们注意到:手术中房水流出,前房消失,在施行巩膜瓣复位缝合及关闭结膜瓣后1 5～30min,大多数兔眼前房迅速形成(88%)房水产生量0.1～0.2mL,除一部分 药物浸透入周围组织巩膜、玻璃体、Tneon囊、说明兔眼房水循环代谢旺盛,故植入药膜后3 ,6,24h房水中则未能检测到MMC浓度。通过分析,我们还认为,除上述各种因素影响检测 结果,检测方法的灵敏度,精确度亦影响检测结果。壳聚糖膜的分子量、联接孔隙、药物的半衰期 (MMC的体内半衰期为50min<9>)亦与药膜的释放性能有关。应用传统方法在兔眼表一 次性使用MMC与制备丁酰化壳聚糖MMC药膜,房水中测得到MMC浓度,电话:029-82 245172电子信箱:IJO.2000@163.com具有显著性意义,因此,本实验结果 表明MMC具有一定的缓释作用,但还需深入研究,不断地完善药膜缓释及控释作用,使其浓度既 无毒副作用,又能有效遏制小梁切除术后滤过通道成纤维细胞的增殖,提高抗青光眼滤过手术的成功率。兔眼房水中丁酰化壳聚糖丝裂霉素药膜的释放性能@韦萍!(730050)$中国甘肃省兰州市第一人民医院眼科
@张强!(730050)中国甘肃省兰州市$兰州军区兰州总医院药理基地
@汪琴!(730000)中国甘肃省兰州市$中国科学院兰州化学物理研究所
@马俊!(730050)中国甘肃省兰州市$兰州军区兰州总医院药理基地
@王爱勤!(730000)中国甘肃省兰州市$中国科学院兰州化学物理研究所
@李晓林!(730050)$中国甘肃省兰州市第一人民医院眼科丁酰化壳聚糖膜;;
丝裂霉素; ;
房水;;释放目的:研究丁酰化壳聚糖丝裂霉素药膜在兔眼房水中的释放性能。方法:应用高效 液相色谱法分别在0.25,0.5,1,2,3,6,24h行前房穿刺术,抽取房水测定植入 兔眼巩膜瓣下的丁酰化壳聚糖丝裂霉素药膜中MMC在房水中的含量。设对照组,为另1眼巩膜表 面放置MMC棉片(MMC0.25g/L)5min,NS冲洗。结果:植入药膜组0.25, 0.5,1,2h后的房水中可检测出MMC,含量22.5～130.3μg/L(最低检测浓 度10μg/L)对照组仅在0.25,0.5h的房水中检测到MMC。结论:丁酰化壳聚糖丝 裂霉素药膜植入兔眼小梁切除术的巩膜瓣下具有一定的缓释作用。1王爱勤,肖玉芳,曹农,贾宝全,薛佐良.壳聚糖的改性和应用研究
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