间无显著性差异(P>0.05)。2.2何首乌总苷对ApoE-蛐-小鼠血清抗氧化能力的影响 何首乌总苷高剂量组、低剂量组及阳性药物组能够增加ApoE-蛐-小鼠的抗氧化能力,表现为 NO水平高于空白对照组(P<0.05);血浆总抗氧化能力显著高于空白对照组(P<0.0 1);而MDA的生成则显著低于空白对照组(P<0.01)。治疗组间无显著性差异(P>0 .05),见表23讨论中药何首乌是蓼科植物何首乌polygonummultifloru mThunb.的干燥块根。生用润肠、解疮毒,制用补肝肾、益精血、何首乌含蒽醌类衍生物、 二苯乙烯苷类化合物及磷脂等,何首乌总苷的主要成分为二苯乙烯苷。对二苯乙烯苷的研究多集中 于缺血性脑损伤、老年性痴呆等脑血管疾病方面眼1-4演,而对心血管疾病的研究则很少见。本 研究利用ApoE-蛐-小鼠在体观察何首乌总苷对主动脉动脉粥样硬化病变血脂及抗氧化能力的 影响,以期进一步探讨何首乌可能的抗As作用环节,为了解该中药在预防与治疗As病变中所起 的作用提供理论依据。1材料与方法1.1材料动物:ApoE基因缺陷(ApoE-蛐-)
小鼠 32只,雌性,8周龄,每只平均体重20g,购自北京大学医学部实验动物中心;何首乌总苷: 由河南驻马店产何首乌药材中可提取4%何首乌总苷,何首乌总苷(
何首乌)为干粉制剂,由北京 中医药大学中药教研室刘斌博士提供;试剂:血清总胆固醇、
甘油三酯、高密度脂蛋白试剂盒(北 京中生生物工程技术公司);总抗氧化能力、丙二醛、一氧化氮测定试剂盒(南京建成生物工程研 究所)。1.2动物分组8周龄雌性ApoE-蛐-小鼠32只随机分为4组,何首乌总苷高剂量 组(150mg蛐kg蛐d)、低剂量组(25mg蛐kg蛐d)、阿托伐他汀阳性药物组(5m g蛐kg蛐d)及空白对照组,每组8只。各组以相应药物灌胃,空白对照组灌等量生理盐水。给 药时间10周,普通饮食饲养。未发现本实验所给药物浓度对ApoE-蛐-小鼠正常生长有任何 不良影响。1.3血脂及抗氧化能力测定18周龄时处死,眼眶取血,分别采用氧化酶法测定血清 总胆固醇及甘油三酯;采用PTA-Mg++沉淀法测定高密度脂蛋白;采用比色法测定总抗氧化 能力及一氧化氮;用硫代巴比妥酸法测定丙二醛。1.4统计学处理应用SPSS10.0软件, 多组均数比较采用单因素方差分析(One-WayANOVA),两组均数之间比较用t检验, 结果以均数±标准差(x±s)表示。2结果2.1何首乌总苷对ApoE-蛐-小鼠血脂的影响 由表1可见,实验10周后,空白对照组血清TC、TG有明显升高,HDL-C则明显降低。何 首乌总苷高剂量组、低剂量组及阳性药物组血清TC、TG水平均显著低于空白治疗组治疗组与空 白对照组比较:觹觹P<0.01组别nTCTGHDL-C何首乌高剂量8649.25±72 .24觹觹126.63±48.10觹觹117.06±14.93觹觹何首乌低剂量8632 .63±55.12觹觹145.64±37.86觹觹113.50±23.27觹觹阳性药物 8497.44±140.77觹觹172.06±15.72觹觹126.70±12.78觹 觹空白对照8809.44±42.61253.25±42.6167.25±10.65表1 何首乌总苷对ApoE-蛐-小鼠血脂的影响(mg蛐dl)壮筋骨,是常用补益抗衰老药。研究 证实,何首乌有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降脂及抑制细胞凋亡等功效,多是作为调脂药用于防治 As。何首乌的主要成分为蒽醌衍生物、二苯乙烯苷类、磷脂类及Cu、Mn及Na等金属元素。 何首乌块根中的成分因产地不同及季节变化而不同眼9演。何首乌总苷的主要成分为二苯乙烯苷类 (2,3,5,4'-四羟基-二苯乙烯-β-D-葡萄糖苷)化合物,2000年药典将测定二 苯乙烯苷类化合物的含量作为何首乌及其制剂的质控标准眼1演。目前,对二苯乙烯苷药理活性的 研究较少,而本实验研究何首乌总苷的心血管保护作用,对阐明何首乌及其主要成分的中药复方的 功效机理有重要意义。载脂蛋白E(ApoE)是一些富含甘油三酯和胆固醇的脂蛋白颗粒表面的 成分,又作为配体,促使这些脂蛋白受识别和清除。1992年,科学家利用基因敲除技术,成功 地复制出apoE基因缺陷小鼠眼2熏3演。apoE基因缺陷(apoE-蛐-)小鼠由于其体 内清除脂蛋白速度减慢,在正常饮食喂养时即可形成自发性高脂血症,其胆固醇水平一般可达到4 00mg蛐dl-600mg蛐dl,甚至更高眼4演。这种高脂血症小鼠的脂纹病变及广泛的纤 维斑块损伤,与人类As病变的发生、发展过程及病变部位均十分相似,目前已成为探讨As发生 、发展机制及研究干预手段(转基因、细胞移植、饮食及药物等应用)的极佳动物模型。本实验选 择8周龄ApoE-蛐-小鼠,给予何首乌总苷药物干预10周。通过对ApoE-蛐-小鼠血脂 水平的测定,我们发现,空白对照组ApoE-蛐-小鼠血浆TC、TG明显升高,HDL-C明 显降低;何首乌总苷则可以显著降低血浆TC、TG(P<0.01),而明显升高HDL-C( P<0.01),其调脂作用与阳性药物阿托伐他汀相似,无显著性差异(P>0.05)。何首 乌总苷的主要成分为二苯乙烯苷是一种多羟基酚类化合物,其调节脂类代谢的可能机制是抑制脂肪 酶的活性作用,使脂肪分解与吸收减少,促进脂肪排泄与转化,降低游离脂肪酸(FFA)的水平 ,抑制cAMP形成,使甘油三酯酶活性降低,脂肪组织中脂解作用减慢,血中非酯化脂肪酸浓度 下降,使用于VLDL合成及分泌的胆固醇减少,降低TG;VLDL生成减少,水解相应增加, 使得HDL升高眼5演。TC、TG等被视为致As病变的危险因子,HDL-C则是As病变的 保护性因子,HDL-C能促进组织细胞内胆固醇的清除,对抗ox-LDL的毒性作用。因而, HDL-C浓度的升高可抑制As病变的形成。研究表明眼6演,对高胆固醇血症患者用含有何首 乌的方剂一定时间后,何首乌合剂治疗组较对照组血清中的TC、TG、LDL及ox-LDL等 含量明显降低。这些研究结果提示,何首乌总苷是较强的调脂药,但其调脂机制尚需进一步研究证 实。血管EC的损伤与功能的改变是As发生、发展的始动与中心环节,EC损伤与机体或局部组 织抗氧化能力降低和蛐或自由基产生增多有关。保护血管EC的功能是防治As的途径之一。NO 是由血管EC分泌的血管活性分子,即内皮依赖的血管舒张因子。NO能够舒张血管,抑制血小板 的聚集与粘附,抑制炎症细胞与EC的粘附,抑制VSMC增殖,是能阻止As发生、发展的内皮 保护因子。MDA是脂质过氧化物代谢产物,检测血浆MDA可反映机体内脂质过氧化程度,间接 地反映出细胞损伤的程度。此外,机体防御体系中还存在很多酶类和非酶类抗氧化物质,测定血浆 总抗氧化能力可反映机体抗氧化体系的容量和能力。本实验结果显示,何首乌总甙治疗组NO与总 抗氧化能力比空白对照明显增加(P<0.01),而MDA的生成明显减少,提示何首乌总苷能 够显著提高机体的抗氧化能力,其抗氧化能力与阳性药物阿托伐他汀相似,无显著性差异(P>0 .05)。刘厚淳眼7演等采用比色法检测从何首乌中提取的二苯乙烯类成分具有体外抗氧化作用 ,是一种较强的抗氧化剂。二苯乙烯苷对脑血管病变的药理研究提示,该类化合物能够保护超氧化 物歧化酶抑制脑组织单胺氧化酶及明显降低MDA含量眼1熏8熏9演,与我们的研究结果相一致 。但何首乌总苷抗氧化作用的机制与环节尚未彻底深入阐明,是否是通过转录后机制调节一氧化氮 合成酶(NOS)基因表达上调,提高NOS活性,增加NO合成,增强机体抗氧化能力,从而保 护血管内皮细胞的功能,还需进一步研究。总之,本研究结果表明,何首乌总苷可以明显降低Ap oE-蛐-小鼠的血浆TC、TG水平,升高HDL-C水平,具有改善脂质代谢的作用;何首乌 总苷可以增强ApoE-蛐-小鼠血浆NO及总抗氧化能力,减少MDA的生成,具有抗氧化作用 。因而,何首乌总苷能够从调脂及增强抗氧化能力两个方面防治实验性动脉粥样硬化病变。参考文 献眼1演叶翠飞,张兰,李斌,等.二苯乙烯苷对胆碱能损伤拟老年性痴呆大鼠学习记忆功能和兴 奋性的影响眼J演.中国康复理论与实践,2003,9:593.眼2演BreslowJL. MousemodelsofAtherisclerosis眼J演.Science,199 6,272押685.眼3演NakashimaY,PlumpAS,RainesEW,et al.Apoe-deficientmicedeveloplesionsofallpha sesofatherosclerosisthroughtoutthearterialt ree眼J演.ArteriosclerThromb,1994,14:133.眼4演Ta oFu,KozarskyKF,BorensztajnJ.Overexpressiono fSR-BIbyadenoviralvectorreversesthefibratei nducedhypercholes-治疗组与空白对照组比较:觹P<0.05;觹觹P<0 .01表2何首乌总苷对抗氧化作用的影响(mmol蛐L)组别nNOMDA总抗氧化能力何首 乌高剂量532.89±25.79觹觹12.83±2.25觹觹185.23±51.99觹 觹何首乌低剂量728.57±12.60觹12.63±3.21觹觹184.54±42.0 6觹觹阳性药物827.27±9.06觹11.62±3.28觹觹211.83±43.56觹觹空白对照83.50±2.3545.47±5.3473.69±38.28眼1演叶翠飞,张兰,李斌,等.二苯乙烯苷对胆碱能损伤拟老年性痴呆大鼠学习记忆功能和兴奋性的影响眼J演.中国康复理论与实践,2003,9:593.眼2演BreslowJL.Mousemo
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