射干抗病毒注射液为疗效显著的抗病毒及抗菌消炎药,用于上呼吸道感染,流行性腮腺炎、带状疱疹和急性病毒性肝炎等疾病,以及治疗流行性出血热早期病症 <1>。它由射干、金银花、柴胡、蒲公英、板蓝根、大青叶等药材制备而成。射干具有明显的抗炎 、解热、去痰、抗微生物等多种药理作用,为该方中的君药。射干的根及根茎中含有丰富的异黄酮类成分,其中的野鸢尾黄素(Irigenin, IRG,结构见Fig. 1)在组织培养中具有抗流感病毒,延缓柯萨奇病毒、埃可病毒引起的细胞病变和抗肺炎球菌活性等作用 <2>。本文按文献 <3>从射干根茎中分离出野鸢尾黄素(HPLC峰面积归一化含量均 >99. 4 ),经UV、IR光谱及MS鉴定并进行薄层、高效液相色谱对照试验 <4, 5>,均与文献值吻合。部颁标准仅用紫外双波长分光光度法测定制剂中绿原酸的含量 <1>,本文定量测定了君药中所含的重要活性成分,对射干抗病毒注射液的质量控制提供了重要参考。Fig. 1 ThemolecularstructuresofIRG1 仪器与试药LC 10P液相泵,LC 10UV检测器 (大连江申分离科学技术公司);数据由江中色谱工作站记录 (大连江申分离科学技术公司 );野鸢尾黄素对照品 (自制,纯度≥99. 4 ),射干抗病毒注射液由西安高科陕西金方药业公司提供,甲醇、乙腈 (色谱纯,山东禹王实业总公司),四氢呋喃、冰醋酸 (分析纯,沈阳化学试剂厂),其它试剂均为分析纯,所用水为去离子水。2 方法与结果2. 1 对照品溶液的配制 精密称取 7. 75mg野鸢尾黄素 (含量 99. 6 ),置于 25mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,得 308mg·L-1野鸢尾黄素对照品溶液。2. 2 样品溶液的制备 取 10支注射液混匀,精密量取 4. 0mL,置 100mL圆底烧瓶中,加水 10mL,氯仿 15mL,加热回流 1h,重复提取 2次,合并氯仿层,蒸干,再用甲醇溶解并定容至 25mL,摇匀作供试液。2. 3 射干阴性样品供试液的制备 按处方称取除射干外各种药材相当于注射液 20mL的量,按射干抗病毒注射液的生产工艺制备阴性样品液。精密量取 4. 0mL,按样品供试液制备方法操作,制备阴性样品供试液。2. 4 色谱条件 色谱柱:大连江申KromasilODS(5μm, 4. 6mm×200mm),甲醇 乙腈 水(50∶46∶4)以磷酸调pH3. 0为流动相,流速 0. 80mL·min-1,柱温 ( 30. 5±1 ) °C,检测波长 265nm,进样量 20μL。2. 5 系统适用性试验 分别吸取 11. 80mg·L-1野鸢尾黄素对照品溶液、样品液和阴性样品供试液均 20μL在HPLC仪上进样分析,记录色谱图见Fig. 2A、B、C,样品色谱图中 (Fig. 2B) 24. 630min是野鸢尾黄素,其理论塔板数大于 2 200,与前后相邻组分的分离度分别为 1. 56和 2. 10;在阴性样品色谱图中野鸢尾黄素峰位处无干扰,因此在本文的条件下可定量分析野鸢尾黄素含量。2. 6 线性关系 精密量取 470mg·L-1野鸢尾黄素对照品溶液适量,置 10mL量瓶中,用流动相定容至刻度,摇匀,制得 1. 41, 7. 06, 35. 3, 132. 0mg·L-1对照品溶液,分别精密吸取上述溶液用原液均20μL在HPLC仪上均进样分析 2次,记录色谱图,以平均峰面积对进样量C(μg)回归得线性方程:A=35 392 565C+3 841.8(r=0.999 9),测得野鸢尾黄素的检测限 (S/N=3)为 3. 2ng,定量限 (S/N=10)为 10. 6ng。2. 7 进样精密度试验 精密吸取 7. 05mg·L-1野鸢尾黄素对照品溶液 20μL,在高效液相色谱仪上连续进样 5次,记录色谱图,结果峰面积的RSD为1. 2 ,表明进样精密度合格。2. 8 对照品稳定性试验 在 0~18h内每隔 3h测定 7. 05mg·L-1野鸢尾黄素对照品溶液 1次,记录色谱图,结果野鸢尾黄素峰面积的RSD为 0. 72 ,表明在 18h内稳定。Fig. 2 Thechromatogramsof(A) irigeninstandard, (B) sample, (C) negativesample2. 9 回收率试验 取批号为 030121射干抗病毒注射液 40支,混匀,精密量取 4. 0mL;分别加入 470mg·L-1野鸢尾黄素对照品溶液如表 1所示量,置100mL圆底烧瓶中,加水 10mL,氯仿 15mL,加热回流 1h,重复提取 2次,合并氯仿层,蒸干,再用甲醇溶解并定容至 25mL,摇匀作供试液。吸取 20μL在HPLC仪上进样分析 2次,记录色谱图,以平均峰面积按标准曲线法计算供试液中野鸢尾黄素含量,将测得结果扣除原样品中IRG含量,计算平均回收率为 99. 7 (RSD为 0. 42 ),见表 1。2. 10 方法重复性试验 按样品供试液的制备方法配制(批号 021230)5份供试液,精密吸取 20μL在HPLC仪上进样分析 2次,记录色谱图,以平均峰面积按标准曲线法计算供试液中野鸢尾黄素含量, 5418次测定结果平均值为 72. 5 μg·支 -1,RSD为0. 64 ,表明方法重复性良好。2. 11 样品含量测定 按样品供试液制备方法制备5个批号的供试液,精密吸取 20μL在HPLC仪上进样分析 2次,记录色谱图,以平均峰面积按标准曲线法计算样品中野鸢尾黄素含量,重复试验 2次,结果见表 2。3 讨论由于本制剂由 8味中药制成,成分复杂,采用等度洗脱时分离困难,本文以四面体优化法对HPLC溶剂系统进行 了优化,获得了较理想的分离效果。试验时考察了用氯仿、醋酸乙酯、乙醚、正丁醇、石油醚等溶 剂回流提取样品,结果表明氯仿提取样品时所得色谱图较理想,其它组分对测定无干扰。本文操作 快捷、简便、结果准确,对射干抗病毒注射液的质量控制提供了有益的参考。Table1 Re coveriesofIRGNo.取样量(μg)加入值(μg)样品含量(μg)回收值(μg)回收率( )1 141. 4 65. 8 207. 1 65. 7 99. 82 141. 4 70. 5 212. 1 70. 7 100. 33 141. 4 65. 8 207. 2 65. 8 100. 04 141. 4 126. 9 267. 7 126. 3 99. 55 141. 4 131. 6 272. 0 130. 6 99. 26 141. 4 136. 3 277. 8 136. 4 100. 17 141. 4 188. 0 327. 5 186. 1 99. 08 141. 4 192. 7 333. 5 192. 1 99. 79 141. 4 197. 4 338. 6 197. 2 99. 9Table2 ThecontentsofIRGBatchIRG(μg/支)021230 72. 3(1. 9 )021231 69. 9(1. 4 )030121 70. 7(1. 1 )030125 73. 5(1. 6 )030128 75. 2(0. 9 )RP-HPLC测定射干抗病毒注射液中野鸢尾黄素@孙国祥$沈阳药科大学药学院!辽宁沈阳110016
@万月生$沈阳药科大学药学院!辽宁沈阳110016
@邓湘昱$沈阳药科大学药学院!辽宁沈阳110016反相高效液相色谱法;;射干抗病毒注射液 ;;野鸢尾黄素目的:建立射干抗病毒注射液(射干、金银花、柴胡,等)中野鸢尾黄素的反相高效液相色谱分析方法。方法:色谱柱:KromasilODS(5μm, 4. 6mm×200mm),水甲醇乙腈(50∶46, 4,v/v)以磷酸调pH 3. 0为流动相,流速0. 80mL·min-1,柱温(30. 5±1)°C,于265nm测定射干抗病毒注射液中野鸢尾黄素的含量。结果:野鸢尾黄素线性范围: 0. 028 2~9. 4μg(r=0. 999 9),野鸢尾黄素对照品的进样精密度RSD为1. 2 ,对照品溶液在18h内峰面积的RSD为0. 72 ,检测限(S/N=3)为3. 2ng,定量限(S/N=10)为10. 6ng,回收率为99. 7 。结论:该方
More abstracts about the RP-HPLC测定射干抗病毒注射液中野鸢尾黄素