骨碎补是较常用中药,具有补肾强骨,活血续伤止痛之功效。用于肾虚腰痛,耳鸣耳聋,牙齿松动,跌扑闪挫,筋骨折伤等症 <1>。骨碎补活性成分为柚皮苷,系二氢黄酮类化合物 <2, 3>,而烫制骨碎补能明显提高二氢黄酮苷溶出率 <4>。为考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响,采用聚酰胺层析 -紫外分光光度法测定骨碎补不同炮制品 (生品骨碎补、砂烫骨碎补、恒温烘烤骨碎补、微波炮制骨碎补)中总黄酮的含量;以浸提法测定浸 出物的含量,探讨不同炮制品有效成分含量变化和不同炮制方法的效果,为骨碎补炮制方法提供依据。1 试验材料1.1 药品骨碎补购自长沙药材公司,经鉴定为水龙骨科槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.SM.干燥根茎。柚皮苷对照品购于湖南药品检定所。1. 2 样品的制备生品:按《中国药典》2000版一部 <1>方法制备。砂烫骨碎补:按《中国药典》2000版一部 <1>方法制备。取净骨碎补片 103. 73g,照烫法 (附录ⅡD)用砂烫至鼓起,撞去毛,得炮制品 98. 05g,失重率为5. 48%。恒温烘烤制品 <5>:将净制的骨碎补 104. 15g平铺约 1cm,置于180°C恒温烘烤箱中,烘烤 10min后去毛,得炮制品 101. 75g,失重率为 2. 31%。微波炮制品:按经验标准优选条件,将骨碎补段101. 56g置于输出功率为 750W的微波炉中,铺叠成 1cm厚,中火烘烤 2min,取出,冷却后去毛,得96. 23g,失重率为 5. 25%。1. 3 仪器UV75GD紫外分光光度计 (上海第三分析仪器厂);分析柱: 1. 5cm×20cm;分析天平 (DT-100P型)。所用试剂均为分析纯。2 试验方法与结果2. 1 水溶性浸出物含量的测定 <1>分别称取 1. 2项中所制得的一定量的 (冷浸法约 4g,热浸法约 2g)各炮制品粉末 4份 (过 20目 )按照《中国药典》2000年版 (附录ⅩA浸出物测定法)项下进行。测定结果表明:与生品骨碎补相比,各炮制品的水浸出物含量 均有所提高;而热浸法又高于冷浸法。这两种浸提法所测得各炮制品中浸出物含量由高到低的顺序依次为:微波炮制品>砂烫品>恒温烘烤品>生品,见表 1。表 1 骨碎补不同炮制品中水浸出物含量测定结果浸提方法样品(g) 样品失重率(% ) 样品重(g)浸出物含量 (% ) 平均值(% )实测值失重后折算值实测值失重后折算值RSD(% )3. 996 3 17. 216 0冷生品 / 4. 012 7 18. 466 0 / 18. 184 5 / 4. 744. 008 7 18. 871 53. 959 2 18. 627 5 18. 197 2恒温烘烤品 2. 31 3. 909 5 18. 056 0 17. 638 9 18. 709 3 18. 277 4 3. 733. 958 7 19. 444 5 18. 995浸 3. 979 5 19. 902 0 18. 811 4砂烫品 5. 48 4. 021 2 19. 770 0 18. 686 6 19. 681 0 18. 602 5 1. 403. 998 2 19. 371 0 18. 309 54. 003 2 20. 746 0 19. 656 8微波炮制品 5. 25 4. 007 9 20. 797 0 19. 705 2 20. 959 4 19. 859 0 1. 56法 4. 024 4 21. 335 2 20. 215 12. 136 2 45. 239 2热生品 / 2. 125 9 45. 251 6 / 45. 297 1 / 0. 202. 301 0 45. 400 42. 507 0 45. 603 6 44. 550 2恒温烘烤品 2. 31 2. 099 6 45. 589 6 44. 536 5 45. 557 6 44. 505 2 0. 15浸 2. 123 2 45. 479 6 44. 429 02. 183 1 47. 620 4 45. 010 8砂烫品 5. 48 2. 118 5 47. 732 0 45. 116 3 47. 800 3 45. 180 8 0. 462. 103 9 48. 048 4 45. 415 32. 228 7 48. 326 0 45. 788 9法微波炮制品 5. 25 2. 222 8 48. 779 6 46. 218 7 48. 648 5 46. 094 5 0. 582. 011 5 48. 840 0 46. 275 92. 2 总黄酮的含量测定 <4>2. 2. 1 标准曲线的制备精密称取经干燥至恒重的柚皮苷对照品 10mg置 25mL量瓶中,甲醇定容至刻度作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液 2. 0mL置于 50mL的量瓶中,甲醇定容至刻度,再分别精密吸取 2. 0, 4. 0, 6. 0,8. 0, 10. 0mL置 10mL的量瓶中,以甲醇为空白,在282nm波长处测定吸收度,以吸收度(A)为纵坐标,浓度 (C)为横坐标,经计算得回归方程为A=0. 037 2C-0. 028 1,r=0. 999 8,线性范围为 3. 2 ~16. 0μg·mL-1。2. 2. 2 样品溶液的制备及总黄酮含量的测定精称 4份骨碎补各炮制品干燥粉末 1 g(经80°C干燥 4h,过 20目筛 ),置索氏提取器中,分别用 50mL乙醚提取 1h,将乙醚提取液用水浴加热挥去乙醚,残渣用甲醇溶解。将此溶液置装有聚酰胺的层析柱中用甲醇洗脱,取洗脱液,以甲醇为空白,在 282nm波长处测定吸收度,结果骨碎补各炮制品中所测得的总黄酮含量由高到低的顺序依次为:微波炮制品>砂烫品>恒温烘烤品>生品,见表 2。表 2 骨碎补不同炮制品中总黄酮的含量测定结果样品样品失重率(% ) 样品重(g)含量 (% ) 平均值(% )实测值失重后折算值实测值失重后折算值RSD(% )1. 0641 1. 5460生品 / 1. 0819 1. 5820 / 1. 5657 / 1. 161. 0672 1. 56900. 9937 1. 6930 1. 6539恒温烘烤品 2. 31 1. 0407 1. 6990 1. 6598 1. 6953 1. 6562 0. 191. 0216 1. 6940 1. 65491. 3550 1. 8010 1. 7023砂烫品 5. 48 1. 0799 1. 8220 1. 7222 1. 8117 1. 7124 0. 581. 1395 1. 8120 1. 71271. 1607 1. 8200 1. 7245微波炮制品 5. 25 1. 0895 1. 9050 1. 8050 1. 85
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