中药白蔹 (Ampelopsisjaponica(Thunb)Makino)为葡萄科蛇葡萄属植物 ,以其块根入药 ,具有清热、解毒、散结、生肌、止痛等功效。临床报道白蔹用于治疗化脓性皮肤感染、细菌性痢疾等疾病 ,疗效显著<1-2 > 。现代研究表明 ,白蔹含有大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、没食子酸等多种抗细菌和抗真菌成分 ,与其临床应用相一致<3 > 。但对于白蔹临床抗感染的免疫活性机制尚未见报道。为了观察白蔹的免疫调节作用 ,我们就白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE(0 -醋酸萘酯酶 )阳性率、T淋巴细胞增殖能力及巨噬细胞吞噬功能的影响进行了初步研究 ,现报道如下 :1 材料与方法1 1 动物 昆明种小鼠 80只 ,体重 2 0± 2g,雌雄不分 ,由复旦大学医学院实验动物部提供。1 2 仪器与试剂 CO2 培养箱 (美国西蒙公司 )、酶标仪(美国 ) ;α—醋酸萘酯 (上海试剂一厂生产 ) :RPMI1 640培养液、小牛血清、ConA、MTT(美国sigma公司产品 ) ;六偶氮副品红溶液 :3 %硫乙醇酸钠溶液 ;Hank’s液 ;0 1 %中性红溶液。1 3 药物 白蔹醇提物系白蔹块根按常规方法用乙醇提取而得 ,将药物按给药剂量用蒸馏水配成三种不同浓度 :1g/ml、0 5g/ml、0 2 5g/ml,滤过除菌后置 4℃备用。1 4 动物分组及给药方法 随机将动物分为 :对照组 (2 0只 )、给药组 (60只 ) ,给药组再分为低剂量组、中剂量组、高剂量组 (各 2 0只 )。各给药组按每只小鼠每天 0 4ml药液灌胃 (三种浓度分别合生药 5e/kg,1 0g/kg,2 0g/kg) ,对照组灌以等量生理盐水。连续给药 7天后做免疫指标的检测。1 5 免疫细胞功能检测 对照组、各给药组分别取 1 0只小鼠 ,取血做淋巴细胞ANAE阳性率的测定 ;取血后立即处死 ,无菌操作下制备小鼠单个脾细胞悬液做T细胞增殖能力的测定 ;另取对照组、给药组小鼠各 1 0只 ,做腹腔巨噬细胞的吞噬功能测定。1 5 1 小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率的测定 参照文献方法<4> 。从小鼠眼球处取血 0 5ml,用密度梯度离心法分离淋巴细胞 ,以淋巴细胞液涂片 ,进行ANAE常规染色 ,在油镜下计数 1 0 0 -2 0 0个淋巴细胞 ,胞浆边缘及胞浆内有一个至数个棕红色颗粒或斑块为ANAE阳性淋巴细胞 ,计算出ANAE阳性细胞百分率。1 5 2 T淋巴细胞增殖能力的测定 参照文献方法<5> 。以ConA刺激 ,用MTT法测定T淋巴细胞的增殖能力。将小鼠单个脾细胞悬液浓度调整为 5× 1 0 6/ml,检测各组小鼠T淋巴细胞的增殖能力 (OD值 )。1 5 3 中性红比色法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能 参照文献方法<5> 。在给药结束前 4天 ,分别给小鼠腹腔注射 3 %硫乙醇酸钠溶液 3ml。处死后于腹腔注射 1 0 %牛血清培养液 5ml,收集腹腔细胞悬液 ,离心洗涤 2次后调整细胞浓度为 2× 1 0 6/m1。检测各组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能 (OD值 )。2 结果白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、脾脏T淋巴细胞增殖能力及巨噬细胞吞噬功能的影响 ,见表1。 表 1 白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、T细胞增殖及巨噬细胞吞噬功能的影响 (X±s)分组剂量(g/kg)淋巴细胞ANAE阳性率(% ) (n)T淋巴细胞增殖能力(OD值 ) (n)巨噬细胞吞噬强度(OD值 ) (n)对照组 5 7 80± 5 5 5 (10 ) 0 2 2 3 4± 0 0 3 40 (10 ) 0 3 12 6± 0 0 2 2 9 (9)低剂量组 5 61 62± 3 84 (10 ) 0 2 65 0± 0 0 2 74 (10 ) 0 3 3 19± 0 0 2 47 (10 )中剂量组 10 66 3 2± 1 2 1 (10 ) 0 2 772± 0 0 413 (9) 0 3 5 18± 0 3 18 (8)高剂量组 2 0 71 73± 2 19 △(10 ) 0 3 12 2± 0 0 3 46 △(9) 0 3 90 1± 0 0 3 4 △(10 ) 与对照组比较P >0 0 5 ; 与对照组比较P <0 0 5 ; 与对照组比较P <0 0 1; △与低剂量组比较P <0 0 1。2 1 外周血淋巴细胞ANAE阳性率的测定结果表明 ,白蔹醇提物剂量为 1 0g/kg ,2 0g/kg时 ,小鼠淋巴细胞ANAE阳性率明显高于对照组 (P <0 0 1 )。2 2 T淋巴细胞增殖能力的结果表明 ,白蔹醇提物 3个剂量组均可增强小鼠T淋巴细胞的增殖能力 (P <0 0 1 ) ,高剂量组 (2 0g/kg)作用最强。2 3 腹腔巨噬细胞吞噬功能的结果表明 ,白蔹醇提物剂量为 1 0g/kg,2 0g/kg时 ,小鼠巨噬细胞吞噬功能明显增强(P<0 0 5或P <0 0 1 ) ,高剂量组 (2 0g/kg)作用最明显。3 讨论白蔹具有清热、解毒、散结、生肌、止痛等功效 ,临床用于治疗化脓性皮肤感染、细菌性痢疾等病<1,2 > 。现代研究表明 ,白蔹含有大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、富马酸、没食子酸等多种具有抗细菌和抗真菌作用的药理成分 ,与其临床应用相一致<3 > 。我们通过动物实验 ,观察了三种不同剂量的白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、T细胞增殖能力及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果显示 ,白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、T细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能均有促进作用 ,并随剂量增加而作用增强 ,量效呈正相关。在抗感染免疫中 ,巨噬细胞发挥着吞噬、杀菌、清除炎症产物和修复组织等重要作用 ,T淋巴细胞不仅可直接杀伤靶细胞 ,也可通过释放淋巴因子间接发挥抗感染免疫效应。一般认为 ,ANAE(a-醋酸萘酯酶 )相对地为T淋巴细胞所特有 ,并与T细胞发挥杀伤靶细胞的作用有关 ,其活性的变化可反映T细胞的功能状态 ,能很大程度上代表机体的细胞免疫水平<6> 。本实验结果提示 ,白蔹醇提物可增强小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能 ,这表明白蔹的抗菌作用还与其免疫活性有关 ,其临床应用于抗感染治疗可能具有直接抗菌和调节机体免疫功能双重机制。本实验仅就白蔹的免疫活性做了初步探索 ,关于该药的免疫活性成分及其免疫调节作用的分子机制还有待进一步研究。白蔹醇提物免疫活性的初步研究@俞琦$贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室!贵州贵阳550002
@蔡琨$贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室!贵州贵阳550002
@田维毅$贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室!贵州贵阳550002白蔹/醇提物;;免 疫活性;;动物实验/鼠目的:研究白蔹醇提物对小鼠免疫功能的影响,探讨白蔹抗感染的免疫活性机制。方法:用白蔹醇提物5g/kg,10g/kg,2 0g/kg对小鼠进行灌胃给药7天后,分别测定对照组和给药组小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性 率、脾淋巴细胞增殖能力、腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果:白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、脾淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能均有促进作用(P<0 . 0 5或P <0. 0 1 ) ,并随剂量增加而作用增强,量效呈正相关。结论:白蔹醇提物对小鼠免疫功能有增强作用,推断与 其可临床应用于抗感染治疗有关。<1> 胡国臣,等中药现代临床应用手册
北京:学苑出版社,1993:420
<2> 宁俊华单味白蔹治疗急、慢性菌痢疗效观中西医结合杂志,1986,6(8):500
<3> 邹济高,金蓉鸾,何宏贤白蔹化学成分研究中药材2000,23(2):91
<4> 付嘉,熊斌,等白茅根对小鼠细胞免疫功能影响黑龙江医药科学,2000,23(2):17
<5> 田维毅,马春玲,孙向彬合欢皮醇提物的免疫活性研究贵阳中医学院学报,1999,21(增刊):364
<6> 黄威权,谢锦添,王玉萍,等人淋巴细胞ANAE阳性率和反应模型的观察解剖学杂志,1985,8(1):1贵阳中医学院 2 0 0 4年青年基金资助课题释放淋巴因子间接发挥抗感染免疫效应。一般认为 ,ANAE(a-醋酸萘酯酶 )相对地为T淋巴细胞所特有 ,并与T细胞发挥杀伤靶细胞的作用有关 ,其活性的变化可反映T细胞的功能状态 ,能很大程度上代表机体的细胞免疫水平<6> 。本实验结果提示 ,白蔹醇提物可增强小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能 ,这表明白蔹的抗菌作用还与其免疫活性有关 ,其临床应用于抗感染治疗可能具有直接抗菌和调节机体免疫功能双重机制。本实验仅就白蔹的免疫活性做了初步探索 ,关于该药的免疫活性成分及其免疫调节作用的分子机制还有待进一步研究。白蔹醇提物免疫活性的初步研究@俞琦$贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室!贵州贵阳550002
@蔡琨$贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室!贵州贵阳550002
@田维毅$贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室!贵州贵阳550002白蔹/醇提物;;免 疫活性;;动物实验/鼠目的:研究白蔹醇提物对小鼠免疫功能的影响,探讨白蔹抗感染的免疫活性机制。方法:用白蔹醇提物5g/kg,10g/kg,2 0g/kg对小鼠进行灌胃给药7天后,分别测定对照组
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