溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)是一种原因不明的慢性非特异性炎症 性肠病。多年来,我们运用三黄丸治疗溃疡性结肠炎脾虚湿热证患者,取得了较好疗效。三黄丸可 显著改善UC病人的临床症状,且有一定的免疫调节作用。<1>本实验观察三黄丸汤剂对UC大 鼠结肠病变组织促炎因子TNF-α、
IL-6、IL-8的影响,从而探讨该方治疗UC的作用 机理。1材料与方法1.1材料1.1.1药物三黄丸由黄芪、黄芩、黄连、仙鹤草、当归、木香 等9味中药组成。将三黄丸诸药加水煎煮后浓缩为含生药浓度为1.0g/ml的溶液。柳氮磺胺 吡啶(SASP)(上海三维制药公司生产,250mg/片,批号:200208031)。将 SASP用研钵研细,用100目筛筛过,然后再研,配成25mg/ml的混悬液。1.1.2 试剂与仪器大鼠细胞因子检测试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供。可调高速匀浆器、离心机 、电热恒温水箱、酶联免疫检测仪。1.1.3动物健康SD大鼠56只,由湖南中医学院实验动 物中心提供(医动字第20—002号),清洁级环境饲养。1.2方法1.2.1动物分组取S D健康大鼠56只,体重260±30g,雌雄各半,按雌雄分别随机分4组,各组均为14只, 第4组为正常组,对第1、2、3组进行造模,分别为三黄丸组、SASP组、模型组。将该4组 大鼠分8笼,用混合配方饲料喂养,自由进食饮水。1.2.2模型制备应用2,4-二硝基氯苯 (DNCB)免疫加醋酸局部灌肠法建立大鼠UC模型。<2,3>将大鼠颈背部用100g/L Na2S脱毛后,以20g/LDNCB丙酮液0.25ml(5滴)脱毛局部外涂,每天1次, 共14天,第15天以直径3mm导尿管经肛门插入结肠8cm处,注入0.1%DNCB乙醇0 .25ml,在第16天同部位注入8%醋酸溶液2ml,准确计时10s后,再以5ml生理盐 水冲洗。再饲养两周,每天继续观察大鼠大便性状、饮食、毛发、活动期状态等,记录大鼠UC活 动期症状。第30天,每组随机抽取大鼠2只,处死后取其结肠,病理确认结肠出现充血、水肿、 炎细胞浸润、隐窝脓肿、杯状细胞减少、腺体破坏及小溃疡形成等变化,确认造模成功。1.2. 3给药方法自第32天起开始给药,三黄丸组用以上配制的汤剂10g/kg灌胃;SASP组用 SASP混悬液0.3g/kg灌胃;模型组、正常组均以蒸馏水10g/kg灌胃,以上均为每 天灌胃1次,共15天。1.2.4标本采集末次给药次日将4组大鼠分别处死,剖结肠标本,称 取病变组织,然后剪碎,再加入生理盐水,用匀浆器制成20%匀浆,5000r/min离心, 取上清液,置于-20℃冰箱冻存备用。1.2.5指标检测检测程序严格按试剂盒使用说明进行 ,采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测大鼠结肠组织TNF-α、IL-6、IL-8值。 1.2.6统计方法采用SPSS10.0软件对数据资料进行处理,数据均采用t检验、方差分 析(q检验)分析各均数。2结果与正常组比较,UC模型各组大鼠病变结肠组织因子IL-6、 IL-8、TNF-α均升高,差异有显著性意义(P<0.05)。与UC模型组比较,三黄丸 组、SASP组大鼠病变结肠组织IL-6、IL-8、TNF-α均明显降低,有显著性意义( P<0.01)。三黄丸组与SASP组比较,各因子差异无显著性意义(P>0.05)。(见 附表)附表三黄丸汤剂对UC模型大鼠病变结肠组织IL-6、IL-8、TNF-α含量的影响 (x±s)组别nIL-6(pg/ml)IL-8(pg/ml)
TNF-α(pg/ml)正 常组12106.6±10.335.9±10.126.1±3.6模型组12180.8±1 3.8△64.2±12.0△75.3±10.5△SASP组12135.6±10.5▲★ 45.3±10.3▲★43.5±6.3▲★三黄丸组12128.5±11.9▲★※42. 30±12.6▲★※38.5±5.5▲★※注:与正常组比较:▲P<0.05,△P<0. 01;与模型组比较,★P<0.01;与SASP组比较,※P>0.053讨论溃疡性结肠炎 以腹泻、排粘液脓血便伴腹痛、里急后重为主要表现。属祖国医学“大瘕泄”范畴。临床以脾虚湿 热证最为常见。中药三黄丸由黄芪、黄芩、黄连、仙鹤草、当归、木香等9味药物组成,其中黄芪 治脾虚之本,益气升清,托毒生肌;芩、连治湿热之标,苦寒清肠燥湿止痢;当归、木香活血行气 ,取其“行血则便脓自愈,调气则后重自除”之意。经长期临床验证,三黄丸能显著改善溃疡性结 肠炎患者的症状,对患者结肠镜检查粘膜充血水肿、溃疡、糜烂、隐窝脓肿、炎性息肉等有明显缓 解,且能显著改善UC患者血清IgG、IgA、IgM、C3及LTT等免疫学指标<1>。免 疫调节异常在炎症性肠病(IBD)的发病中占有重要地位<4>。UC的发病机理主要是结肠粘 膜局部免疫紊乱,伴全身免疫功能失调<5>。与UC关系密切的促炎因子主要有IL-1、IL -6、IL-8、IL-12、IL-17、TNF-α等,抗炎因子主要有IL-4、IL-1 0等,它们可同时或相继、直接或间接作用于靶细胞,形成细胞因子网络,在UC的组织破坏及炎 症反应中起着重要作用<6>。其促炎因子IL-6、IL-8、TNF-α上调,促炎与抗炎因 子平衡破坏,从而诱导和促进炎症发生。IL-6能诱导急性期蛋白质的合成,TNF-α则偏重 于组织的损伤,IL-8是一种很强的中性粒细胞趋化因子,能促进中性粒细胞的溶酶体及超氧阴 离子、白三烯及5-HA的释放,通过增加单核细胞黏附分子的表达,增强其游走能力<7>。而 IL-6、TNF-α等诱发的UC肠道炎症反应很大程度上是通过诱导产生以IL-8为代表的 趋化因子所介导的<8>。本实验结果显示,三黄丸汤剂能显著降低大鼠UC模型结肠组织促炎细 胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的含量,表明其能抑制促炎细胞因子的分泌,调节免疫反应,减少炎症介质的释放,从而控制肠道炎症反应,这可能是其治疗UC的机理之一。三黄丸对溃疡性结肠炎大鼠模型组织TNF-α、IL-6、IL-8的影响@唐利文$湖南中医学院!湖南长沙410007
@莫新民$湖南中医学院!湖南长沙410007三黄丸;;
溃疡性结肠炎;;促炎细胞因子目的: 观察三黄丸汤剂对大鼠溃疡性结肠炎(UC)病变结肠组织TNF-α、IL-6、IL-8的影 响,研究三黄丸治疗UC的机制。方法:采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)免疫加醋酸局部灌 肠法建立大鼠UC模型,ELISA法检测大鼠结肠组织TNF-α、IL-6、IL-8值。结 果:三黄丸汤剂能显著降低大鼠UC模型TNF-α、IL-6、IL-8含量。结论:三黄丸汤 剂能抑制结肠粘膜促炎因子的释放可能是其治疗UC的作用机制之一。<1>莫新民,唐利文.三黄丸治疗溃疡性结肠炎临床观察
.中国中医基础医学杂志,2003,9(7):67
<2>李杨.溃疡性结肠炎动物模型的建立方法.中药新药与临床药理,1999,(3):120
<3>江学良.复合法建立大鼠溃疡性结肠炎模型及其免疫和超微结构的变化.世界华人消化杂志,1999,7(5):381
<4>IndaramAV,etal.Mucosalcytokineproductioni nradiation-inducedproctosigmoiditiscomparedwithinflammatoryboweldisease.AMJGastroenterol,2002,95:1221
<5>欧阳钦.炎症性肠病的病因和发病机理.临床内科杂志,1998,15(2):59
<6>胡仁伟.细胞因子与炎症性肠病.国外医学·消化系疾病分册,1998,18(3):146
<7>李琪佳.细胞因子与溃疡性结肠炎.临床内科杂志,1997,14(6):297
<8>田七.电针治疗溃疡性结肠炎模型大鼠的作用机制.世界华人消化杂志,2002,1 0(8):916跎傺字⒔橹实氖头?从而控制肠道炎症反应,这可能是其治疗UC的机理之一。 三黄丸对溃疡性结肠炎大鼠模型组织TNF-α、IL-6、IL-8的影响@唐利文$湖南中医学院!湖南长沙410007
@莫新民$湖南中医学院!湖南长沙410007三黄丸;;溃疡性结肠炎;;促炎细胞因子目的: 观察三黄丸汤剂对大鼠溃疡性结肠炎(UC)病变结肠组织TNF-α、IL-6、IL-8的影 响,研究三黄丸治疗UC的机制。方法:采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)免疫加醋酸局部灌 肠法建立大鼠UC模型,ELISA法检测大鼠结肠组织TNF-α、IL-6、IL-8值。结 果:三黄丸汤剂能显著降低大鼠UC模型TNF-α、IL-6、IL-8含量。结论:三黄丸汤 剂能抑制结肠粘膜促炎因子的释放可能是其治疗UC的作用机制之一。<1>莫新民,唐利文.三黄丸治疗溃疡性结肠炎临床观察.中国中医基础医学杂志,2003,9(7):67
<2>李杨.溃疡性结肠炎动物模型的建立方法.中药新药与临床药理,1999,(3):120
<3>江学良.复合法建立大鼠溃疡性结肠炎模型及其免疫和超微结构的变化.世界华人消化杂志,1999,7(5):381
<4>IndaramAV,etal.Mucosalcytokineproductioni nradiation-inducedproctosigmoiditiscomparedwithinflammatoryboweldisease.AMJGastroenterol,2002,95:1221
<5>欧阳钦.炎症性肠病的病因和发病机理.临床内科杂志,1998,15(2):
More abstracts about the 三黄丸对溃疡性结肠炎大鼠模型组织TNF-α、IL-6、IL-8的影响