茵陈Herba Artem isiaescopariae属利水渗湿药,是菊科植物滨蒿Artem isia scoparia W aidst.et K itaib.或茵陈蒿Artem isia capillarisThunb.的干燥地上部分<1>。射干抗病毒注射液由射干、金银花、佩 兰、茵陈、柴胡、蒲公英、板蓝根、大青叶等8味药材组方,经现代工艺精制而成,是疗效显著的 抗病毒及抗菌消炎药。绿原酸(CGA)和咖啡酸(CFA)是射干抗病毒注射液及茵陈、金银花 等药材中的有效成分<2-4>,具有抗病毒、抗菌、利胆、止血等药理作用<2>。笔者采用反 相高效液相色谱法同时测定了茵陈及射干抗病毒注射液中CGA和CFA的含量,可为茵陈及射干 抗病毒注射液的质量控制提供有益的参考。1仪器与试药仪器:Agilent1100型液相色谱仪(配有二极管阵列检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器);ChemStation工作站(Agilent科技有限公司)。试药:CGA,CFA对照品(供含量测 定用,批号分别为0753-200111,885-200001,中国药品生物制品检定所) ;茵陈药材<经笔者鉴定,均为《中国药典(一部)》收载品种>;射干抗病毒注射液(市售,西 安高科陕西金方药业公司和陕西金麒麟药业有限公司生产)。甲醇(色谱纯,山东禹王实业总公司 );冰醋酸(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心);其他试剂均为分析纯,所用水为去离子水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:KromasilODS柱(250m m×4.6m m,5μm);流动相:1%醋酸水溶液-甲醇(80∶20);流速:1.0m L/m in;柱温:30℃;进样量:5μL;紫外检测波长:326nm,以DAD同时记录UV200 ～400nm的紫外吸收光谱。2.2对照品溶液制备CGA对照品贮备液Ⅰ:精密称取绿原酸对照品适量,用20%的甲醇水溶液溶解并稀释至浓度为1120μg/mL。CFA对照品贮备液Ⅱ:精密称取咖啡酸对照品适量,用20%的甲醇水溶液溶解并稀释至浓度为450μg/m L。药物鉴定A.CGA对照品溶液B.CFA对照品溶液C.茵陈药材溶液D.射干抗病毒注射液 E.阴性对照液图1高效液相色谱图2.3供试品溶液制备药材供试品溶液:精密称取干燥药材约 5g,用水回流提取2次,合并滤液,将滤液减压浓缩,加95%的乙醇适量,冷处避光放置24h,滤除沉淀,减压回收乙醇,再用水稀释并定容至50mL。高效液相色谱分析前用0.45μm滤膜过滤。注射液供试品溶液:精密量取射干抗病毒注射液2.0m L,用水稀释至10m L,摇匀,进样前用0.45μm滤膜过滤。阴性对照液:精密称取处方中不含CGA和CFA的射 干、佩兰、板蓝根和大青叶干燥药材适量,照药材供试品溶液制备方法制备阴性对照液。2.4系统适用性及方法专属性考察取贮备液Ⅰ和Ⅱ适量,分别用20%甲醇溶液稀释成浓度为84μg/mL的CGA溶液和浓度为150μg/m L的CFA溶液,照上述色谱条件分别进样分析,记录色谱图;另取药材供试品溶液、注射液供试品 溶液及阴性对照液在同样色谱条件下进样分析,记录色谱图,见图1。由图1可见,保留时间14.1,18.9min的色谱峰分别为CGA,CFA;在药材与制剂色谱图中,CG A,CFG峰与相邻峰的分离度均大于1.5,理论板数均大于2000。可见,供试品溶液中CG A与CFA色谱峰对应的紫外吸收光谱与CGA与CFA对照品的紫外吸收光谱一致,阴性对照液 在两供试品溶液中CGA,CFA色谱峰位置处无其他组分干扰。2.5线性关系考察分别取贮备 液Ⅰ和贮备液Ⅱ,用20%甲醇溶液稀释成5个浓度,分别按照上述色谱条件进样分析2次。以平均峰面积对浓度(μg/mL)回归,得CGA的线性方程A=8.71C+0.0040,r=1.0000,线性范围为11.2～1120μg/m L);CFA的线性方程A=10.46C-2.95,r=0.9999,线性范围为4.5～450μg/m L。测得CGA,CFA的检测限(S/N=3)分别为0.0112,0.0060μg/m L,其定量限(S/N=10)分别为0.0403,0.0240μg/m L。2.6精密度试验取浓度280μg/m L的CGA对照品溶液和150μg/m L的CFA对照品溶液分别连续进样6次,记录色谱图,结果CGA,CFA峰面积的RSD分别为 0.78%(n=6)和0.57%(n=6),表明进样精密度良好。2.7稳定性试验取浓度为280μg/mL的CGA对照品溶液和150μg/m L的CFA对照品溶液,分别在样品制备后避光放置,0,1,2,6,24,48h,进样测定, 记录色谱图,结果CGA与CFA峰面积的RSD分别为0.98%和0.62%,证明两对照品 溶液避光放置48h仍稳定。2.8重现性试验取同一批药材6份,精密称定,照2.3项下药材 供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样分析。结果CGA与CFA峰面积的RSD分别为0. 83%和0.66%,表明方法重现性良好。将以同一批号注射剂制备的6份供试品溶液进样,测 得的重现性亦良好。2.9回收率试验精密称取已知CGA与CFA含量的茵陈药材共5份,每份3g。分别加入浓度为280μg/mL的CGA对照品溶液和45μg/m L的CFA对照品溶液各5m L,照2.3项下药材供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样分析。结果CGA与CFA的平均 回收率分别为99.3%(RSD=1.01%,n=5)和98.8%(RSD=0.97%, n=5)。另取射干抗病毒注射液(陕西金麒麟药业有限公司,批号为03062201),分别 精密加入已知含量的CGA与CFA对照品溶液,则得其回收率均在99.5%～100.1%之 间,且精密度良好。2.10样品含量测定测定了8批茵陈药材以及6批射干抗病毒注射液中的C GA与CFA的含量,结果见表1和表2。结果显示,不同产地药材与制剂、相同产地不同批号的 药材与制剂中CGA与CFA的含量相差很大。3讨论采用水提醇沉的方法制备供试品溶液,主要 是考虑到CGA和CFA的水溶性好,而且茵陈多以水煎煮的方式用药。选择紫外检测波长时,曾 试过254,265,326nm等波长,结果发现在326nm波长下的其他组分吸收强度小, 待测两组分的吸收强度又都比较大,因此选择了326nm作为测定波长。CGA和CFA有抗病 毒和广泛的抗菌消炎作用,不但存在于茵陈中,在射干抗病毒注射液处方成分金银花、蒲公英等药 材中也存在。采用本法的色谱条件分析金银花、蒲公英的水提醇沉样品溶液,也可获得分离度良好 的两组分峰;而且测定结果显示,不同产地、不同批号的茵陈药材及制剂中CGA与CFA的含量 差异很大,因此在制剂生产投料时控制各药材中CGA和CFA含量,对保证制剂质量的稳定一致 具有重要意义。本方法准确、灵敏、可靠,适用于茵陈及射干抗病毒注射液中有效成分CGA和CFA含量的控制。表1茵陈药材中CGA和CFA的含量(mg/g)产地河南甘肃陕西东北陕西宝鸡1陕西宝鸡2甘肃天水陕西铜川CGA5.712.010 .300.412.451.322.401.28CFA0.330.900.161.191 .952.122.280.81表2射干抗病毒注射液中CGA和CFA的含量生产厂家批号含量(μg/mL)金方药业金方药业金方药业金麒麟药业金麒麟药业金麒麟药业021231030121030 130030622010306230103062401CGA109.886.183.7 58.063.564.0CFA23.917.216.724.822.522.8茵陈及射干抗病毒注射液中绿原酸和咖啡酸的含量测定@邓湘昱$沈阳药科大学药学院!辽宁沈阳110016
@孙国祥$沈阳药科大学药学院!辽宁沈阳110016
@刘霄$西安高科陕西金方药业有限公司!陕西崎山721500反相高效液相色谱法;;茵陈;; 射干抗病毒注射液;;绿原酸;;咖啡酸目的:建立茵陈及射干抗病毒注射液中绿原酸和咖啡酸的 反相高效液相色谱分析方法。方法:使用KromasilODS柱(250mm×4.6mm, 5μm),1%醋酸水-甲醇(80∶20)为流动相,柱温为30℃,流速为1mL/min, 波长为326nm。结果:绿原酸在11.2～1120μg/mL,咖啡酸在4.5～450μ g/mL范围内线性关系良好,平均回收率在98.8%～100.1%之间。结论:该法准确、 灵敏,可用于茵陈药材及射干抗病毒注射液中绿原酸和咖啡酸的含量测定。<1>国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)
.北京:化学工业出版社,2000:192.
<2>褚明艳,胡一桥,谭仁祥.茵陈蒿的化学及药理学研究进展.中草药,1998,29(8):564-566.
<3>苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术.北京:人民卫生出版社,2000:674.
<4>赵守训,杭秉倩.蒲公英的化学成分和药理作用.中国野生植物资源,2001,20 (3):1-3.采用水提醇沉的方法制备供试品溶液,主要是考虑到CGA和CFA的水溶性好 ,而且茵陈多以水煎煮的方式用药。选择紫外检测波长时,曾试过254,265,326nm等 波长,结果发现在326nm波长下的其他组分吸收强度小,待测两组分的吸收强度又都比较大, 因此选择了326nm作为测定波长。CGA和CFA有抗病毒和广泛的抗菌消炎作用,不但存在 于茵陈中,在射干抗病毒注射液处方成分金银花、蒲公英等药材中也存在。采用本法的色谱条件分 析金银花、蒲公英的水提醇沉样品溶液,也可获得分离度良好的两组分峰;而且测定结果显示,不同产地、不同批号的茵陈药材及制剂中CG
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