何首乌为蓼科植物何首乌Polygonummultiflo rumThunb.的干燥块根。其炮制方法起源于唐代<1>。历代本草中记载其炮制方法有所不 同,主要体现在原药材的净制方法、加热方式、辅料的种类等。《中国药典》<2>和《全国中药 炮制规范》<3>中,何首乌的炮制方法为黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸。经对全国20个省市的炮 制规范总结,另有黑豆汁高压蒸<4>、黑豆同煮<5>、黑豆汁黄酒蒸<6>等。炮制时间相差 很大,从3h至40h不等。何首乌具有解毒、消痈、润肠通便之功效。经炮制后为制何首乌,具 有补肝肾,益精血,乌须发等功效<2>。何首乌所含二苯乙烯类成分具有保肝作用<7>,在何 首乌中的含量较高。结合蒽醌具泻下作用,何首乌炮制后药性改变的部分原因即为结合蒽醌转变为 无泻下作用的游离蒽醌<8>。炮制后毒性的降低可能为鞣质含量的变化<9>。尽管对炮制前后 何首乌中成分的含量变化有一些报道,但对不同工艺以及炮制时间的影响缺乏系统的研究,且某些 报道的结论相反。目前对炮制工艺缺乏规范统一的工艺技术参数。因此,系统研究不同炮制工艺以 及炮制时间对何首乌中成分含量的影响,对于确定最佳炮制工艺以保证何首乌饮片的质量具有重要 意义。1仪器、材料与试剂超声波清洗器(上海超声波仪器厂);HP1100高效液相色谱仪G 1322A脱气机、G1311A四元泵、G1316A恒温箱、G1314AVWD检测器、H P化学工作站;实验室试验用何首乌药材产自广东省德庆县德城镇,经中国中医研究院中药研究所 谢宗万研究员鉴定为蓼科植物何首乌P.multiflorum的干燥块根,实验样品为自制生 饮片和经黑豆汁蒸、黑豆汁炖、清蒸<2>、黑豆汁高压蒸<4>、黑豆汁屉上蒸(传统炮制方法 )的饮片。中试药材来自广东、贵州、掌南和四川,生片和制片为在饮片厂生产饮片。2,3,5 ,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷,批号0844200003,供含量 测定用)、大黄素(批号0756200110,供含量测定用)、大黄素甲醚(批号75820 000S,供鉴别用),由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯,皮粉为分析纯,水为超 纯水。2二苯乙烯苷的含量测定苯乙烯苷对照品,精密称定,于棕色量瓶中,用甲醇配制成每1m L含0.03mg的对照品溶液。分别吸取1,3,5,7,9μL,注入液相色谱仪,按上述色 谱条件测定峰面积,以测得的峰面积积分值为纵坐标,进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线,计 算回归方程,Y=-8.56+3004.7X,r=0.9999。表明二苯乙烯苷在0.03 ～0.27μg具有良好的线性关系。2.3供试品溶液的制备按药典法进行<3>。取各何首乌 饮片粗粉(过4号筛)0.1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入50%乙醇25mL,称定重 量。加热回流30min,放冷,再称重,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,适当稀释,上清 液用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液得供试品溶液。2.4精密度试验精密吸取同一供试品 溶液重复进样5次,二苯乙烯苷峰面积积分值的RSD为1.2%。2.5重复性试验精密称取同 一样品5份,按供试品溶液处理,进行含量测定,测得的二苯乙烯苷含量的RSD为1.8%。2 .6回收率试验精密称取同一样品5份,分别精密加入二苯乙烯苷对照品,按供试品溶液处理,进 行含量测定,计算回收率为99.6%,RSD为2.5%。2.7供试品含量测定精密吸取供试 品溶液10μL注入液相色谱仪,测定峰面积,计算样品中二苯乙烯苷含量。HPLC图谱见图1 。不同炮制方法炮制12h及32h后,二苯乙烯苷含量测定结果见表1。采用豆汁炖不同时间, 饮片中二苯乙烯苷的含量测定结果见表2。10个批次何首乌饮片采用黑豆汁炖32h后,饮片中二苯乙烯苷的含量测定结果见表3。图1何首乌中二苯乙烯苷HPLC图A.对照品;B.供试品;1.二苯乙烯苷3蒽醌含量测定3.1色谱条件WatersNovapakC18(3.9mm×150mm,5μm)色谱柱,流动相甲醇0.1%磷酸(77∶23 );表1不同炮制工艺二苯乙烯苷含量(n=2)%饮片类型炮制12h炮制32h黑豆汁蒸片2 .120.951黑豆汁炖片2.320.988黑清蒸片1.860.623黑豆汁高压蒸片2 .88黑豆汁屉上蒸片1.470.455注:炮制前生片中二苯乙烯苷含量为3.23%表2豆 汁炖不同时间二苯乙烯苷含量(n=2)炮制时间/h含量/%03.23122.32241. 50360.876480.550表3中试10批次何首乌生片与黑豆汁炖32h片中二苯乙烯 苷含量(n=2)%来源生片黑豆汁炖32h片广东14.422.42广东24.472.60 广东34.032.64云南3.643.02四川12.941.84四川23.351.67 四川32.301.84贵州13.072.10贵州22.351.81贵州32.882.3 8流速1.0mL·min-1;检测波长254nm;柱温40℃。3.2对照品溶液的制备和 线性关系的考察精密称取大黄素、大黄素甲醚对照品各2mg,分别置10mL量瓶中,用甲醇溶 解并稀释至刻度,摇匀;分别精密量取大黄素溶液2mL和大黄素甲醚溶液0.8mL于10mL 量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1mL含大黄素、大黄素甲醚40,16μg的 溶液,即得。分别吸取3,5,7,9,11μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积 ,以测得的峰面积积分值为纵坐标,进样量为横坐标(μg)绘制标准曲线,计算回归方程,大黄 素:Y=1.78+3244.20X,r=0.9998,表明大黄素在0.12～0.44μ g具有良好的线性关系;大黄素甲醚:Y=9.75+2792.14X,r=0.9998,表 明大黄素甲醚在0.048～0.176μg具有良好的线性关系。3.3供试品溶液的制备参考 文献方法<10>并作适当修改。取各饮片粉末0.5g(过4号筛),精密称定,精密加入75 %甲醇25mL,称定重量,回流提取30min,称重,75%甲醇补足减失的重量,滤纸滤过,·733·第30卷第5期2005年3月中国中药杂志ChinaJournalofChineseMateriaMedicaVol.30,Issue5March,2005取续滤液。续滤液用0.45μm膜过滤,作为 游离大黄素和大黄素甲醚定量用供试品溶液。另外,精密吸取续滤液5mL于圆底烧瓶中,蒸干。 残渣加入3mol·L-1硫酸溶液6mL,超声2min使溶解,加入氯仿20mL,水浴回流 水解10min,冷却后,分取氯仿层,水层再用氯仿提取3次,每次10mL,合并氯仿层,蒸 干。残渣中精密加入甲醇5mL,微热超声溶解,0.45μm膜过滤,续滤液即为总大黄素和大 黄素甲醚定量用供试品溶液。3.4精密度试验精密吸取同一供试品溶液重复进样5次,大黄素和 大黄素甲醚峰面积积分值的RSD分别为1.4%,1.6%。3.5重复性试验精密称取同一样 品5份,按供试品溶液处理,进行含量测定,5次测得的游离大黄素的RSD0.95%,游离大 黄素甲醚的RSD1.6%;总大黄素RSD为2.1%,总大黄素甲醚RSD3.2%。3.6 回收率试验精密称取同一样品5份,分别精密加入大黄素、大黄素甲醚对照品,按供试品溶液处理 ,进行含量测定,根据测定值计算游离大黄素回收率为101.4%,RSD1.4%,游离大黄 素甲醚回收率为100.4%,RSD1.6%;总大黄素回收率为98.2%,RSD3.2% ,总大黄素甲醚回收率为96.1%,RSD3.1%。3.7供试品溶液中大黄素、大黄素甲醚 的含量测定精密吸取2种溶液10～20μL注入高效液相色谱仪,测定峰面积,计算含量,得到 游离大黄素、游离大黄素甲醚以及总大黄素、总大黄素甲醚含量。结合大黄素、结合大黄素甲醚的 含量为两者的差值。即结合大黄素=总大黄素-游离大黄素;结合大黄素甲醚=总大黄素甲醚-游 离大黄素甲醚。HPLC图谱见图2。不同炮制工艺炮制后各饮片中蒽醌含量测定结果见表4。采 用豆汁炖不同时间饮片中蒽醌的含量见表5。10个批次何首乌饮片采用黑豆汁炖32h后,饮片 中蒽醌的含量测定结果见表6。4鞣质含量测定表4不同炮制工艺蒽醌含量(n=3)mg·g- 1饮片类型游离大黄素游离大黄素甲醚总大黄素总大黄素甲醚结合大黄素结合大黄素甲醚生片0. 2700.1691.610.6641.341.82豆汁蒸32h1.000.5241.1 30.6051.270.208豆汁炖32h1.000.5111.100.6170.09 240.198清蒸32h0.9830.4891.120.5700.1390.219豆汁 高压蒸12h1.100.4981.130.6090.03040.141豆汁屉上蒸32h 0.7620.4090.9380.5010.1750.268表5豆汁炖不同时间蒽醌含量 (n=3)mg·g-1炮制时间/h游离大黄素游离大黄素甲醚总大黄素总大黄素甲醚结合大黄 素结合大黄素甲醚00.2700.1691.620.6641.340.495120.85 90.4501.260.6270.4010.178240.8870.4741.150. 6140.2650.139360.9590.4901.040.5900.0850.09 95480.8600.4540.9380.5380.0780.0841表6中试10批次 何首乌生片与黑豆汁炖32h片中蒽醌含量(n=2)mg·g-1来源生片总大黄素黑豆汁炖3 2h片总大黄素生片总大黄素甲醚黑豆汁炖32h片总大黄素甲醚广东14.003.501.1 91.13广东23.483.301.211.13广东33.543.441.261.19云南5.183.291.041.06四川12.102.060.8360.670四川22.022
More abstracts about the 不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响