心肌细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中所起作用越来越引起人们的重视。心肌缺血和再 灌注时,细胞凋亡发生的确切机制还不清楚,可能与细胞在受到刺激后产生大量氧自由基、细胞内 钙超载、线粒体损伤、炎性细胞浸润和基因调控有关〔1,2〕。近年研究表明,不少中药单体、 有效部位、复方、成药及针灸均有抗细胞凋亡的作用,综述如下。1单味中药或其成分对MIRI 中细胞凋亡的保护作用1.1人参和人参皂甙:刘晓春等〔3〕通过结扎大鼠左冠状动脉(冠脉) 制模,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)观察到MIRI时心肌细胞凋亡数显 著增加,给予人参治疗可明显抑制缺血再灌注时所诱导的心肌细胞凋亡发生。刘正湘等〔4〕采用 同样方法制模,用免疫组化法检测Bcl2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达,观察人参 皂甙Re抗急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及对凋亡相关基因蛋白的表达,其作用机制可能是抑制了 促凋亡基因Bax、Bad和Fas的表达,从而使Bcl2/Bax、Bcl2/Bad、Bc l2/Fas比值增大。1.2丹参:张代富等〔5〕结扎大鼠左冠脉制备MIRI模型,采用地 高辛随机引物法及免疫组化法研究,发现心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡加剧,Bax和Bcl2 参与调控缺血再灌注时心肌细胞凋亡,丹参可抑制凋亡加速基因Bax的表达。王晓霞等〔6〕实 验也观察到丹参注射液通过抑制心肌细胞凋亡,下调Bax基因蛋白表达,上调Bcl2基因蛋白 表达,对MIRI具有保护作用。1.3黄芪:阮长武等〔7〕用结扎大鼠左冠脉的方法制备MI RI模型,以地高辛随机引物法及免疫组化法检测,观察到心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡加剧, Bax、Bcl2参与了缺血再灌注时心肌细胞凋亡调控,黄芪可抑制凋亡加速基因Bax的表达 。冯津萍等〔8〕通过观察不同心肌梗死面积、心肌细胞DNA电泳及凋亡细胞的形态,结果显示 ,再灌注组和黄芪治疗组的梗死面积小于单纯缺血组;DNA电泳发现再灌注组呈凋亡的典型表现 ,单纯缺血组表现为细胞坏死,黄芪治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血再灌注组明显减少; TUNEL染色发现缺血组有散在阳性细胞;再灌注组有大量的阳性标记,且积聚成团,黄芪治疗 组较再灌注组明显减少。1.4川芎嗪:段红等〔9〕采用TUNEL法和透射电镜检测MIRI 过程中不同时间点心肌细胞调亡的动态变化及川芎嗪对大鼠MIRI细胞凋亡以及病理组织学改变 的影响。结果显示,缺血10min、再灌注60min即可出现心肌细胞凋亡,且随再灌注时间 的延长,缺血心肌中细胞凋亡数目逐渐增多,心肌组织病理改变亦加重;川芎嗪可使损伤心肌凋亡 细胞减少,病理组织学改变减轻。1.5葛根素:俞坚武等〔10〕采用免疫组化法检测儿茶酚胺 诱导心肌损伤大鼠,心肌细胞凋亡相关基因Fas和Bcl2的蛋白表达及葛根素干预作用,观察 到心肌损伤组Fas蛋白和Bcl2蛋白表达等级均上调;葛根素干预组Fas蛋白表达等级下调 。刘琦等〔11〕采用TUNEL观察MIRI与心肌细胞凋亡的关系,并加用葛根素进行干预。 结果在缺血左室壁可见有大量心肌凋亡细胞出现,在缺血前给予葛根素治疗者未发现有细胞凋亡减 少,而再灌注前给药则可明显减少再灌注引起的细胞凋亡。1.6倒卵叶五加总皂甙:马世玉等〔 12〕采用TUNEL及免疫组化法观察大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl2和Bax的蛋 白表达。结果倒卵叶五加总皂甙组的心肌细胞凋亡指数显著减少,Bax蛋白表达明显减少,而心 肌Bcl2蛋白的表达显著增加,Bax和Bcl2的比值也随之下降。1.7牛磺酸:张晓敏等 〔13〕采用原代培养的乳鼠心肌细胞模型、双染色流式细胞术和荧光染色镜检判断细胞凋亡,同 时测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,结果显示牛磺酸能使心肌细胞LDH漏出减少,对心 肌损伤有保护作用,但对心肌细胞凋亡无抑制作用。1.8金丝桃苷(Hyp):李庆林等〔14 ,15〕采用TUNEL和流式细胞术,观察Hyp对大鼠及乳鼠MIRI的保护作用及其机制。 结果显示Hyp可抑制大鼠血清肌酸磷酸激酶(CPK)的升高和心肌组织中丙二醛(MDA)、 一氧化氮(NO)形成,提高超氧化物歧化酶(SOD)活力,减轻大鼠MIRI和心肌细胞凋亡 ;对培养的乳大鼠心肌细胞缺氧6h再给氧24h引起的细胞凋亡,Hyp可减少凋亡细胞的形成 。2复方中药对MIRI中细胞凋亡的保护作用2.1复方丹参滴丸:赵明中等〔16〕采用TU NEL法及免疫组化法检测心肌凋亡细胞及凋亡基因蛋白表达的变化,观察到复方丹参滴丸可通过 抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡、下调Fas基因的蛋白表达与上调Bcl2基因的蛋白表达以保 护MIRI。2.2通心络胶囊:赵明中等〔17〕采用免疫组化法和TUNEL法观察通心络胶 囊对缺血再灌注心肌细胞凋亡以及相关基因蛋白表达的影响。结果大鼠MIRI后心肌细胞凋亡明 显增加,心肌细胞Bcl2与Bax蛋白表达也增高;通心络胶囊可以减少心肌细胞的凋亡,并且 下调Bax蛋白表达,一定程度上调Bcl2蛋白表达。2.3参脉注射液:高承贤等〔18〕用 结扎冠脉左前降支后再通方法复制老年大鼠MIRI模型,DNA电泳发现心肌缺血再灌注组呈凋 亡的典型表现,参脉注射液治疗组梯形条带中DNA含量较再灌注组明显减少;TUNEL染色发 现再灌注组有大量阳性标记,且积聚成团,参脉注射液治疗组较再灌注组明显减少。表明参脉注射 液可抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡发生,并具有量效关系。2.4补阳还五汤:佟丽等〔1 9〕观察含补阳还五汤大鼠血清对缺氧再给氧后新生乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,采用钙结合蛋 白V碘化丙啶(AnnexinVPI)双标记法检测细胞凋亡,以紫外分光光度法测定心肌LD H水平,采用改良Yu方法测定NO浓度,用Ohkawa法测定硫代巴比妥酸(TBARS)反 应物质的含量。结果补阳还五汤药物血清能显著抑制心肌细胞凋亡及LDH的释放,降低培养细胞 上清液中NO和TBARS水平,其效应呈剂量依赖关系。2.5益气通络丹:沈剑刚等〔20〕 采用上述同样的实验方法,显示益气通络丹和补阳还五汤有相似的作用。2.6温心胶囊:张腾等 〔21〕采用盐酸异丙肾上腺素连续多点皮下注射制备大鼠心肌缺血模型,运用透射电镜技术和免 疫组化的方法,实验显示心肌缺血损伤可明显诱导大鼠心肌细胞发生凋亡,Fas基因蛋白表达显 著增强,Bcl2基因蛋白表达轻度增强,温心胶囊可显著下调Fas基因蛋白表达,上调Bcl 2基因蛋白表达,明显抑制和阻断心肌细胞凋亡。2.7血府逐瘀汤:丁志山等〔22〕复制老年 大鼠心MIRI模型,实验显示,血府逐瘀汤治疗组的梗死面积小于再灌注组,DNA电泳发现再 灌注组呈凋亡的典型表现,血府逐瘀汤治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血再灌注组明显减少 ;TUNEL染色发现再灌注组有大量阳性标记,且积聚成团,血府逐瘀汤治疗组较再灌注组明显 减少。2.8益心胶囊:张春芳等〔23〕用TUNEL法检测细胞凋亡,观察益心胶囊对家兔急 性心肌缺血模型细胞凋亡的影响,表明益心胶囊能抑制心肌细胞凋亡,对缺血损伤心肌起一定的保 护作用。2.9心痛灵滴丸:谭元生等〔24〕建立冠脉粥样硬化家兔在体MIRI模型,采用T UNEL法和免疫组化法检测凋亡细胞,观察心痛灵滴丸预适应对兔MIRI心肌细胞凋亡及相关 基因蛋白表达的影响,结果缺血再灌注时Bcl2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强,心痛灵滴 丸预适应能使Bax水平吸光度值(A值)明显下降,Bcl2A值上升。3针灸对MIRI细胞 凋亡的保护作用田岳凤等〔25,26〕用电针分别针刺家兔左、右侧内关穴20min和24h 后,结扎左冠脉前降支,40min后恢复灌流,再灌注1h。结果显示,针刺内关穴预防保护组 与模型组相比较,心肌组织受损程度轻微,TUNEL法检测未见凋亡细胞;电针大鼠心包经穴位 20min后,结扎左冠脉前降支40min,再电针穴位20min,恢复灌流60min,结 果模型组出现典型的细胞凋亡峰,凋亡率明显升高,针刺心包经穴组的凋亡率明显降低。表明针刺家兔内关穴及手厥阴经穴能有效地抑制心肌细胞的凋亡,从而减轻细胞凋亡导致的心肌损伤。细胞凋亡与心肌缺血-再灌注损伤及中医药研究@张艳玲$山东中医药大学!山东济南250014
@周苏宁$山东中医药大学!山东济南250014缺血-再灌注损伤,心肌;;细胞凋亡;;中医 药〔1〕CohenNH,WiseRM,WechslerAS,etal.Electivecardiacarrestwithahyperpolarizingadenosinetriphosphate sensitivepotassiumchannelopener〔J〕.JThoracCardiovascSurg,1993,106:317328.
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