近来的研究表明,脂质体作为药物载体有多方面的特点,特别是在提高药物的生物利用度、降低药物的毒副作用以及提高对靶器官的选择性等方面,引起了人们的高度重视<1> 。
丹参酮(tanshinone)是中药丹参中的脂溶性有效成分,不仅具有天然抗氧化性、心血管药理作用以及抗菌消炎作用,还具有明显的抗肿瘤作用<2 > 。然而,丹参酮在水中溶解度低。动物实验表明,丹参酮固体给药时吸收效果差<3 > 。为了提高丹参酮的生物利用度,笔者采用脂质体载药系统技术制备了丹参酮脂质体给药系统。本文 主要探讨保存条件对丹参酮脂质体粒径范围的影响。材料与仪器1 试剂材料 卵磷脂(北京奥博星生物技术责任有限公司);丹参酮;胆固醇(广州化学试剂玻璃仪器批发部) ;氯仿(分析纯,上海三浦化工有限公司) ;维生素E ;蔗糖(分析纯) ;甲醇(分析纯,广州新成精细化工厂) ;PVP(聚乙烯吡咯烷酮,广东汕头西陇化工厂,进口分装)。2 实验仪器 旋转蒸发器,水浴恒温箱,循环水式真空泵,磁力搅拌器,水浴超声仪,透射电镜(型号HT TACHIH 6 0 0 ,日本日立公司) ,真空冷冻干燥机(型号Benchtop3 3,美国Virtis公司)。方法1
制备工艺 将精密称取的卵磷脂0 5g,胆固醇0 2 5g ,维生素E 10 0mg ,丹参酮10 0mg共溶于氯仿/甲醇(2∶1)组成的6ml混合溶液中,置于旋转蒸发器上以6 0r/min的速度旋转使溶剂挥发,水浴温度控制在30℃左右,并抽 真空。约1h后,形成薄膜,继续抽真空0 5h。用含有2gPVP ,2g蔗糖,pH =7 3的10 0ml磷酸盐缓冲溶液溶解薄膜,加入10 0mg维生素E ,在室温下充氮气浸泡3h。然后用磁力搅拌器搅拌2 5min ,再在常温下进行水浴超声2 5min ,温度控制在30℃左右。最后分装于西林瓶中,充氮气于2 5℃、4℃、 18℃、80℃低温保存。另取一些样品作冷冻干燥保存:样品于80℃预冻一个晚上,然后在真空0 0 2 5～0 0 35millitorr,温度 4 9℃～ 5 2℃条件下冷冻干燥36～4 8h ,待样品干燥后密封,置干燥器中,分别放在 4℃、 18℃冰箱中保存。2 脂质体形态的观察 样品采用1%磷钨酸染色,5 0℃烤箱烘干,透射电镜下进行观察、摄影并计算粒径范围。电镜下不同保存条件的脂质体差异较大:保存于2 5℃、4℃的脂质体混悬液经过2 4h后发生分层,沉淀等变性;保存于18℃、80℃者解冻后呈均匀红色(丹参酮颜色) ,电镜下可观察到圆球状脂质体;冷冻干燥者用pH =7 3的磷酸盐缓冲(PBS)溶液溶解后观察到脂质体基本被破坏而呈现长条状、杆状物。结果电镜下不同保存条件的脂质体差异较大:保存于4℃的脂质体混悬液经过2 4h后发生分层,沉淀:保存于 18℃、80℃者解冻后呈均匀红色,电镜下可观察到脂质体;冷冻干燥者用pH =7 3的磷酸盐缓冲溶液溶解后观察到长条状、杆状物。结果见表1。表1 不同贮存温度条件下丹参酮脂质体形态贮存温度肉眼观察电镜观察粒径范围(mm)2 5℃分层,沉淀混浊脂质体融合,不规则,大小不均—4℃分层,沉淀脂质体融合,不规则,大小不均—18℃均匀红色脂质体大多呈圆形或球形,粒径较小,偶见粒径较大者3 45 2 3±2 5 0 80℃均匀红色脂质体大多呈圆形或球形,大部分轮廓光滑、形态较稳定,大小较均匀,粒径较大93 3 3 3±168 71冷冻干燥后置4℃ PBS溶液溶解后呈不均匀红色,混浊有较多长条状、杆状物,偶见圆形脂 质体—冷冻干燥后置-18℃PBS溶液溶解后呈不均匀红色,混浊有较多长条状、杆状物,偶见 圆形脂质体讨论本实验中加入胆固醇和维生素E都有抗氧化的作用,减少了成品变质的可能性。而 低温下保存可能对成品结构产生破坏,所以加入了蔗糖作为防冻剂。采用甲醇和氯仿的混合溶液可 以提高溶质的溶解度,吐温是作为表面活性剂。PVP不仅可对丹参酮起增溶分散作用,而且由于 它是高分子物质,在液态时黏度大,包在脂质体中间的水膜中会使双分子层的流动性降低,防止低分子药物渗出脂质体。在本实验中,贮存温度对脂质体的稳定性影响较大。有文献报道<4>,冷冻干燥法是目前制备储存脂质体的最佳方法。但在冷冻过程形成的冰晶使脂质体聚集融合,在冷 冻和解冻的过程中,膜内外冰晶形成速度不同引起渗透压差,造成脂质体裂解,所以在冷冻干燥过程中,应加入冷冻保护剂以减少破坏。所以本实验加入了蔗糖作为防冻剂。丹参酮脂质体于-18℃～- 80℃低温保存者形态较为稳定;作冷冻干燥保存者脂质体基本被破坏而呈现长条状、杆状物。由此 推测冷冻干燥过程中压力的变化可能是影响脂质体稳定性的因素之一。保存条件对丹参酮脂质体的 粒径影响较大不同的保存条件对丹参酮脂质体粒径的影响@莫穗林$中山大学附属第一医院!
广州510080
@陈玉玲$中山大学附属第一医院!广州510080
@梁天文$中山大学中西医结合研究所!广州510089
@吴伟康$中山大学中西医结合研究所!广州510089
@罗汉川$中山大学中西医结合研究所!广州510089
@吴天浪$中山大学基础医学院分子医学研究中心电镜室!广州510089
@刘长秀$中山大学基础医学院微生物教研室!广州510089丹参酮;;
纳米;;
脂质体;;制备工艺1 陈祥,闫丽霞.脂质体药剂及其临床应用.天津药学,2000,12(3):12
2 储茂泉,古宏晨,刘国杰.丹参酮脂质体的制备及其稳定性.中国医药工业杂志,2001,32(9):400
3 梁勇,羊裔明,袁淑兰.丹参酮药理作用与临床应用研究进展.中草药,2000,31(4):304
4 钱名望,杨保津,顾文华,等.丹参酮有效成分的研究.化学学报,1978,36(3):1 99广东省中医药管理局立项资助课题捌湮榷ㄐ?中国医药工业杂志,2001,32(9):400
3 梁勇,羊裔明,袁淑兰.丹参酮药理作用与临床应用研究进展.中草药,2000,31(4):304
4 钱名望,杨保津,顾文华,等.丹参酮有效成分的研究.化学学报,1978,36(3):199广东省中医药管理局立项资助课题
More abstracts about the 不同的保存条件对丹参酮脂质体粒径的影响