叶下珠 Phyllanthus urinaria L.为大戟科 Euphorbiaceae叶下珠属 Phyllanthus L .的全草 ,最早收载于《生草药性备要》中 ,具有平肝清热、利水解毒之效 ,用于治疗肠炎、痢疾、尿路感染、无名肿痛等 〔1、2〕。叶下珠属植物在全世界约有 6 0 0多个品种 ,我国有 6亚属、7组、33种、4变种 ,叶下珠属植物可为草本、灌木或乔木 ,广泛分布于热带、亚热带与温带〔3〕。印度学者 Thyagarajan报告苦味叶下珠 (Phyllanthus amarus L.)治疗乙肝病毒携带者 ,可使 5 9%患者的乙肝表面抗原 (HB-s Ag)转阴 〔4〕,引起了国内外很大的关注。近 10年来国内对资源丰富的叶下珠进行了化学成分、药理作用的研究 ,为叶下珠的研究开发提供了基础。1 化学成分研究进展叶下珠属植物含有木脂素、萜类、黄酮、糅质、生物碱等多种化合物〔5〕。我国叶下珠植物中已发现的化和物有 :正十八烷 ,十八碳烯酸乙脂 ,丁二酸 ,β-谷甾醇 ,原儿茶酸 ,鞣花酸 ,没食子酸 ,阿魏酸 ,糅料云实素 ,老鹳草素 ,柯里拉京 ,去氢诃子次酸甲酯 ,去氢诃子次酸三甲脂 ,3,3′,4 -三甲氧基鞣花酸 ,1- O-没食子酰基 ,3,6 -六羟基联苯二甲酰基 2 ,4 -羟甲基诃子酰基 -吡喃葡糖 ,短叶苏木酚 ,短叶苏木酚酸 ,短叶苏木酚酸甲脂 ,短叶苏木酚酸乙脂 ,叶下珠素 F和 isostrictiniin。其中 ,3,3′,4 -三甲氧基糅化酸 ,丁二酸 ,阿魏酸 ,胡萝卜苷 〔6〕,咖啡酸 ,焦酚 ,短叶苏木酚酸 〔7〕为首次从该植物中分得。短叶苏木酚 〔8〕,isostrictiniin〔9〕为首次从该属植物中得到。1- O-没食子酰基 ,3,6 -六羟基联苯二甲酰基 2 ,4 -去羟甲基诃子酰基 -吡喃葡糖 〔7〕为一新鞣质类化合物。短叶苏木酚酸甲脂 ,去氢诃子次酸三甲脂〔1 0〕,去氢诃子次酸甲脂为新化合物〔1 1〕。叶下珠素 F为新的多酚类化合物 〔1 2〕。2 药理作用研究概况叶下珠素 (1)和叶下珠次素 (2 ) (化学结构式见图 1)对 CCl4 和氨基半乳糖诱发的肝细胞损伤有明显保护作用 〔1 3〕。去氢诃子次酸甲脂和短叶苏木酚酸甲脂已初步证实其明显的抗病毒和抗乙肝表面活性 〔1 1〕。自苦味叶下珠被发现具有抗乙肝病毒作用以来 ,澳美等国均曾对我国叶下珠属植物进行了抗乙肝病毒筛选的调查 ,发现品种之间抗乙肝病毒作用大有差异〔1 4、1 5〕。我国临床报道的珠子草均介绍为苦味叶下珠 ,首先由张美义 〔1 6〕等于 1989年在云南元江峡谷内发现 ,经美国植物分类学家 Webster教授鉴定 ,确认与 Thyagarajan报道者相同 ,1992年在云南西双版纳人工栽培获得成功。朱宇同〔1 7〕等收集了国内 6个不同品种叶下珠属植物 ,将药物干粉用国外通用的 6 0℃水浸 2 h提取方法 ,在 2 .2 .15细胞上进行实验研究 ,发现所有叶下珠提取物对 2 .2 .15细胞分泌的 HBs Ag或 HBe Ag均有程度不等的抑制作用 ,其中以苦味叶下珠最为明显。陈征途 〔1 8〕等对 8种不同品种、不同产地叶下珠属植物的水提取物在体外2 .2 .15细胞培养中进行抗 HBV作用 ,云贵叶下珠毒性较大 ,对 HBs Ag的抑制作用好 ,云泰叶下珠的毒性最小 ,对 HBe Ag抑制作用强 ,两者均采自云南元江峡谷海拔 6 0 0 m处。图 1 2 .1 体外抗 HBV作用 Thyagarajan〔1 9〕等用氯仿提取苦味叶下珠 ,将所得粗提取物及粗提取物经层析分离的部分分别配制成 2 %和 1%的溶液 ,再与等量的 HBs Ag阳性人血清在37℃下混合 ,4 8h后粗提取物使血清中 HBs Ag全部灭活。徐大文 〔2 0〕等研究发现叶下珠水提液在体外对 HBs Ag,HBe Ag的抑制率分别为 4 2 .6 2 %和 4 9.0 9% ,该药可抑制乙肝病毒DNA(HBV- DNA)转然的 2 .2 .15细胞 ,在培养液中对 HB-s Ag,HBe Ag的抑制率分别为 6 4 .5 %和 39.71%。纪徐淮 〔2 1〕等用 HBV自然整合的人肝癌细胞株 PL C/ PRF/ 5体外模型 ,证明高浓度 (4mg·μl- 1 )的叶下珠水提液具有较明显的抑制乙型肝炎病毒表面抗原 (HBs Ag)的产生 ,与单磷酸阿糖腺苷联用可产生一定的协同作用。张美义 〔2 2〕等用云南叶下珠 0 .2 kg/L,2 0℃作用 1人 ,可使阳性血清 HBs Ag滴度大大下降。周世文〔2 3〕等用反相被动血凝抑制试验观察叶下珠的水和 5 0 %乙醇提取物在低剂量 (2 .5 mg/ 5 0μl)即可对 HBs Ag产生 2倍抑制 ,呈明显量效关系 ,在药物剂量 10 m g/ 5 0 μl时产生 8倍抑制。贺浪冲 〔2 4〕等报告了陕西产叶下珠对 HBV抗原有较强的灭活作用 ,对 HBs Ag灭活作用最强。米志宝〔2 5〕等对 2 1种中草药进行了 DHBV,DNAP和 HBVDNAP的体外抑制试验 ,结果仅叶下珠显示了较强的抑制效果。陈征途〔2 6〕等对 3种叶下珠属植物的水提物在 2 .2 .15细胞培养中抗 HBV进行观察 ,结果显示 :3种药物对 2 .2 .15细胞 HBc Ag和 HBe Ag的抑制率分别为 :苦味叶下珠 5 7.79%和 5 5 % ,黄珠子草6 4 .5 1%和 6 4 .5 1% ,新发现的珠子草延益亚种为 4 4 .32 %和2 .98% ,提示苦味叶下珠对 2 .2 .15细胞上清液中 HBs Ag和HBe Ag分泌均有较好的抑制作用。刘庄〔2 7〕等研究证实不同品种、剂型和添加成分的叶下珠提取物的抗 HBV作用还提示其抑制病毒不仅在转录水平 ,可能对 m RNA的翻译水平也有影响。仲英 〔1 1〕等用 5 0 %红细胞凝集 (++)的最高稀释度为HBs Ag滴度 ,将叶下珠组与对照组的滴度做配对比较 ,证实叶下珠能直接抑制 HBs Ag。王岭〔2 8〕等对叶下珠复方肼丹体外实验提示在 HBV分泌、复制旺盛期抗 HBV作用越强。2 .2 体内抗 HBV作用 中日友好医院〔2 9〕以鸭体内实验证实叶下珠可降低鸭血清中 DHBVDNA和 DNA聚合酶。张美义 〔1 6〕等用云南产叶下珠治疗新近感染雏鸭 ,2 1d后 ,5只动物HBs Ag全部转阴。陈压西〔30〕等应用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型进行了不同产地叶下珠的抗鸭乙型肝炎病毒疗效观察 ,均为 10 g· kg- 1 ,每日早晨空腹灌胃 ,疗程为 1个月。结果广西叶下珠、云南叶下珠能使鸭血清中鸭乙型肝炎动物脱氧核糖核酸滴度明显下降 ,而重庆叶下珠无此作用。米志宝〔2 5〕等用鸭乙型肝炎动物模型观察叶下珠、虎杖、五味子等中草药乙醇提取物抗嗜肝 DNA病毒的效果 ,结果表明这些药物有不同程度抗 DNA效果 ,单味药以叶下珠为好 ,呈剂量反应关系 ,且联合作用比单味药具更好效果。王新华 〔31〕等用叶下珠复方体内抗乙肝病毒试验亦提示该方的抗 HBV作用 ,其作用较无环岛苷弱 ,但较为持久 ,停药无反跳 ,而无环鸟苷停药后即回到给药前水平。路丽芳〔32〕等用酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测高低两个剂量的叶下珠水提取物对雏鸭体内人工感染的乙型肝炎病毒表面抗原 (DHBs Ag)表达的作用 ,结果表明其能明显抑制 DHBs Ag的表达 ,转阴率为 6 4 %和 4 6 %。邓学龙〔33〕等用先天感染 DHBV的广州麻鸭作为鸭为乙肝模型 ,发现台湾单纯叶下珠有降低 DHBV- DNA的作用。2 .3 对动物肝细胞损伤的防治作用 周世文 〔34〕等报告重庆地区生长的叶下珠有明显减轻 CCl4 引起的小鼠肝脏病理损害。任丽娟〔35〕等试验显示叶下珠能抑制 CCl4 和 D-半乳糖所致的 AL T(血清谷丙转氨酶 ,丙氨酸转氨酶 )升高和肝细胞坏死。周世文 ,陈晓红 〔36〕等动物实验证实叶下珠能明显降低CCl4 引起的小鼠血清 AL T的升高 ,抑制肝脏 MDA(丙二醛 )的生成 ,能阻止 CCl4 体内引起的大鼠肝细胞膜流动性的降低 ,抑制肝细胞〔 Ca2 +〕的升高 ,提示叶下珠的抗 CCl4 肝损伤作用机制与其抑制脂质过氧化反应和阻止 Ca2 + 升高有关 ,从而保护了肝细胞膜正常流动性和完整性。仲英〔1 1〕等通过检测各组动物肝脏转氨酶 AL T,AST(血清谷丙转氨酶 )和肝脏病理指标 ,说明叶下珠能明显拮抗 CCl4 所致大鼠的急性肝损伤 ,起到明显的保肝降酶作用。2 .4 对人肝癌细胞的影响 王昌俊 〔37〕等人用叶下珠提取物处理人肝癌细胞 SMMC72 2 1,观察到 SMMC72 2 1活力明显减弱 ,氚标胸腺嘧啶核甘渗入率明显降低 ,DNA合成抑制率与药物剂量成线性关系。说明叶下珠具有杀伤人肝癌细胞SMMC72 2 1和抑制其增殖作用。2 .5 抗单纯疱疹病毒 型的作用 郭卫真〔38〕等人采用地鼠肾细胞株 (BHK)和原代兔肾细胞对 8种叶下珠属植物水提物进行了体外抗单纯疱疹病毒 型作用的研究。结果显示 :除珠子草延益亚种外 ,云泰叶下珠、云贵叶下珠、广东叶下珠、余甘子、黄珠子草、广西叶下珠、苦味叶下珠等 7种叶下珠水提物在该两种培养细胞上均有不同程度抑制单纯疱疹病毒 型的作用。提示叶下珠属植物对单纯疱疹病毒 型感染有一定的治疗作用。2 .6 治疗乙型肝炎 王荣国 〔39〕从实验研究及临床研究总结了叶下珠抗乙肝病毒的
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