大黄为重要的常用中药 ,历代的炮制品有酒炒大黄、大黄炭、酒炖大黄、醋炒大黄、醋煮大黄、石灰炒大黄等<1> 。近年来 ,有人运用盐水炒大黄<2 > 治疗肾中相火偏旺 ,小便混浊 ,或妇女白带较多等疾病 ,在消除蛋白尿方面取得了较好效果。本文选用大黄酸、大黄素为考察指标 ,采用PR -HPLC法考察盐制过程中它们在大黄中的含量变化 ,并与生大黄作对照研究 ,现介绍如下。1 仪器与材料1.1 仪器 BF -KNAUER高效液相色谱仪 ,K - 5 0 1高压输液泵 ,K - 2 5 0 1紫外分光检测器 ,BF - 2 0 0 2色谱工作站 ;Scout百分之一电子天平 (梅特勒 -托利多常州衡器有限公司 ) ;FA2 10 4万分之一电子天平 (上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂 ) ;格兰仕WP70 0J17型微波炉 (微波频率为2 4 5 0Hz)。1.2 材料 大黄RheumtanguticumMaxim .ex .Balf;大黄酸(中国生物药品检验所 ) ,大黄素 (中国生物药品检验所 ) ,所用试剂均为分析纯。2 方法与结果2 .1 样品制备 (1)淡盐水制大黄 :取 2 0 0 g净大黄片 ,置于炒锅 ,小火炒热 ,边炒边加入 2 5 %NaCl溶液 2 0ml,炒至水分全部吸干 ,表面微焦<3 > 。 (2 )浓盐水制大黄 :取 2 0 0g净大黄片 ,置于微波炉器皿中 ,倒入 2 5 %NaCl溶液 4 0ml,浸润10min ,注意翻动 ,待盐水吸干后 ,盖上有气孔的盖子 ,放入微波炉中 ,用低档功率烤 10min ,使之干燥 ,取出冷却<3 > 。2 .2 对照品液的制备 精密称取大黄酸和大黄素各 5mg ,分别用甲醇定容至 10ml容量瓶中 ,得大黄酸、大黄素的贮存液。2 .3 色谱条件 江苏汉邦公司NovapakC18柱 (2 5 0mm×4 .6mm) ;流动相为甲醇∶水∶冰醋酸 (30∶70∶1) ;流速为 1.0ml/min ;柱温为 35℃ ;检测波长为 315nm ,进样量为 2 0ul。2 .4 线性关系考察 分别吸取大黄酸、大黄素贮存液 0 .2ml、0 .4ml、0 .6ml、0 .8ml、1.0ml,置于 10ml容量瓶中 ,用甲醇定容。在所设定的色谱条件下 ,分别以峰面积A对大黄酸浓度C(mg/ml)、大黄素浓度C(mg/ml)进行回归 ,得大黄酸标准曲线 :A =92 75 91C +12 374 (r =0 .9999) ,其线性范围为11.0～ 5 5 .0ug/ml,见图 1;大黄素标准曲线 :A =996 72 5C +92 15 .8(r=0 .9997) ,其线性范围为 10 .2～ 5 1.0ug/ml,见图2。2 .5 样品液的制备 精密称取大黄药材粉末 (过 4 0目筛 )、淡盐水制大黄粉末 (过 4 0目筛 )、浓盐水制大黄粉末 (过 4 0目筛 )各 1.0 0 g左右 ,置于 10 0ml圆底烧瓶中 ,精密加入甲醇5 0ml,回流 5h ,过滤 ,弃取初滤液 ,取继滤液 10ml,甲醇稀释定容至 5 0ml,得各样品溶液 ,并重复 3次。图 1 大黄酸标准曲线 图 2 大黄素标准曲线2 .6 样品的测定 按所设定的色谱条件 ,对各样品溶液进行测定。色谱图见图 3、图 4 ,结果见表 1。图 3 大黄酸、大黄素对照品HPLC图谱图 4 样品HPLC图谱表 1 样品中大黄酸和大黄素的含量 (mg/ g)项目生大黄淡盐水制大黄浓盐水制大黄大黄酸 3.5 7 3.5 2 3.5 3大黄素 4 .5 14 .4 7 4 .5 02 .7 回收率 精密称取生大黄粉末 (过 4 0目筛 )、淡盐水制大黄粉末 (过 4 0目筛 )、浓盐水制大黄粉末 (过 4 0目筛 )各1.0 0 g左右 ,分别精密加入大黄酸、大黄素适量 ,其余操作同2 .5 ,结果表明大黄酸平均回收率为 96 .2 8%～ 99.4 3% ,RSD=1.15 % ;大黄素平均回收率为 96 .6 6～ 99.6 2 % ,RSD =1.0 3%。结果见表 2。表 2 回收率测定结果样品 样品中的含量 (mg)大黄酸大黄素加入量 (mg)大黄酸大黄素实测量 (mg)大黄酸大黄素回收率 (% )大黄酸大黄素生大黄 3.75 4 .74 1.2 1.34.90 5 .94 98.9998.34生大黄 4 .2 85 .4 12 .32 .4 6 .4 77.7898.3399.6 2淡盐水制大黄 3.935 .0 11.31.2 5 .2 0 6 .0 899.4 397.91淡盐水制大黄 4 .4 6 5 .6 82 .2 2 .16 .5 77.5 2 98.6 5 96 .6 6浓盐水制大黄 4 .2 4 5 .6 31.4 1.5 5 .5 2 6 .95 97.8797.4 8浓盐水制大黄 3.884 .95 2 .32 .2 5 .95 7.0 5 96 .2 6 98.6 02 .8 精密度与稳定性试验 取回收率项下表 2中 1号生大黄样品溶液 ,在设定的HPLC条件下连续进样 6次 ,其峰面积的RSD为 0 .79% ;在室温下放置 1、2、3、4h后分别测定峰面积的RSD为 0 .6 5 %。3 讨 论大黄酸、大黄素显示出一定的酸性 ,在洗脱剂中加入冰醋酸 ,在所设定的HPLC条件下 ,样品提取液中的大黄酸、大黄素能与其他成分获得较好的分离。通过加入对照品于药材粉末中按样品制备过程制样分析 ,发现大黄酸和大黄素的平均回收率分别为 96 .2 8%～ 99.4 3% (RSD =1.15 % )和96 .6 6 %～ 99.6 2 % (RSD =1.0 3% ) ,因而在本实验中采用的HPLC法对盐制大黄中的大黄酸、大黄素的分析过程提供了可以重现的结果 ,方法具有适用性、准确性。至于盐制后对其他成分如鞣质等的影响还有待进一步的研究盐制大黄中大黄酸和大黄素的含量测定研究$湖南建设医院!410007@徐耀华
$湖南医药工业研究所!410007@欧艳大黄/生产和制备;;大黄酸/分析;;大黄素/分析<1> 江文君.大黄炮制研究
.中药通报,1986,(12):3～4.
<2> 上海中医学院中药教研室.中药临床手册.上海:上海科学技术出版社,1993.
<3> 高峰.盐制大黄的研究.中成药,1997,19(6):7. 高峰.盐制大黄的研究.中成药,1997,19(6):7.
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