龙川草骨痛颗粒是由狗脊、鹿茸、杜仲、桂枝等15味药材组成的复方制剂。具有补益肝肾、舒筋活络、养血敛阴、止痛消瘀等功能 ,临床上用于治疗腰椎间盘突出、骨质增生、颈椎病、风湿以及类风湿症。处方中杜仲药材中所含的主要成分为绿原酸 ,绿原酸的含量测定方法 ,文献报道有薄层扫描法<1> 、紫外分光光度法<2 > 、
高效液相色谱法<3> 等。本试验采用了检测灵敏度高、准确度及精密度好的高效液相色谱法 ,对龙川草颗粒中的绿原酸进行含量测定 ,用以控制其质量。1 材料和方法1.1 仪器 LC - 4A高效液相色谱仪 ;SPD2A紫外检测器 ;C -R3A积分仪 ;UV2 6 0紫外分光光度计 (日本岛津制作所 )。1.2 试剂与药品 甲醇为色谱纯 ;磷酸等其它试剂均为分析纯。绿原酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号 75 3- 94 0 6 )。龙川草骨痛颗粒 (沈阳军区沈阳制剂中心提供 ,批号 2 0 0 10 6 12 )。1.3 色谱分析条件1.3.1 测定波长选择 取绿原酸对照品 ,加 5 0 %甲醇溶解 ,制成每 1ml含 10 μg的溶液 ,紫外分光光度法扫描 ,光谱图如下 (见图 1)。 从图 1中看出绿原酸在 32 7nm处有最大吸收 ,故选择 32 7nm为测定波长。1.3.2 色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂C18柱 (4 .6mm× 2 5 0mm ,7μm) ;流速 :1ml/min ;柱温 :2 8℃ ;进样量 :2 0 μl。1.3.3 流动相的选择 参照有关文献 ,经试验 ,选择甲醇 - 0 .4 %磷酸溶液 (15∶85 )为流动相 ,保留时间约为 17min。1.4 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品5 .4mg ,置 10 0ml量瓶中 ,加 5 0 %甲醇适量 ,
超声波处理 10min ,使对照品溶解 ,再加 5 0 %甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液 (5 4μg·ml- 1)。图 1 绿原酸对照品UV图谱Fig 1 UVabsorptionspectionofChlorogenicacid1.5 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的粉末约 1g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,加氯仿30ml ,
超声处理 2次 ,每次 30min ,弃去氯仿液 ,挥干 ,加甲醇 30ml,超声处理 2次 ,每次 30min ,合并甲醇液 ,蒸干 ,残渣加 5 0 %甲醇溶解 ,转移至 10ml量瓶内 ,加 5 0 %甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得。2 方法学考察2 .1 空白试验 按处方量制备缺杜仲的阴性对照溶液 ,照文中所述含量测定方法操作 ,结果空白溶液与绿原酸对照品相同保留时间处 ,未显示明显色谱峰 ,认为无干扰 (见图 2 )。2 .2 样品溶液稳定性试验 将待测样品溶液 ,置室温下贮存 ,分别于 0、0 .5、1、2、3、5h ,定期测定含量。结果 6次含量的RSD为 0 .4 8% ,表明样品溶液基本稳定。2 .3 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液 (5 4μg·ml- 1) 2 0 μl ,重复进样 6次 ,结果RSD为 0 .4 1% ,精密度试验符合要求。2 .4 重复性试验 取同一批号的供试品 ,分别进行供试品溶液的制备、测定 ,重复 5次 ,结果RSD为 1.34%。a绿原酸对照品 b阴性对照 c样品 d杜仲药材 1绿原酸图 2 龙川草骨痛颗粒的HPLC色谱图Fig 2 HPLCchromatogramofLongchuancaogutongkeli2 .5 线性关系的考察 精密量取绿原酸对照品溶液 0 .30、0 .5 0、1.0 0、1.5 0、2 .0 0和 4 .0 0ml,分别置于10ml量瓶中 ,加 5 0 %甲醇至刻度 ,摇匀。取 2 0 μl注入液相色谱仪中 ,记录色谱图 ,以峰面积为纵坐标 ,相应浓度为横坐标 ,进行线性回归 ,结果线性方程 :A =2 5 16 40 9C - 2 979,r =1.0 0 0 02 .6 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批龙川草骨痛颗粒 1g ,精确加入绿原酸对照品适量 ,按文中供试品溶液的制备方法操作 ,测定其含量 ,并计算回收率 ,测定结果见表 1。表 1 绿原酸的加样回收率试验Tab 1 RecoveriesofChrorogenicacidinsamples编号称样量(g)本底量( μg)加入量( μg)测得量( μg)回收率( % ) x( % )RSD( % )11.0 2 3 95 8.771.0 613 0 .610 1.22 1.0 3 14 5 9.2 71.0 613 1.910 2 .33 0 .98795 6.771.0 612 4.996.0 98.72 .2 940 .983 65 5 .871.0 612 4.3 96.45 1.0 3 3 65 9.171.0 612 8.797.52 .7 样品测定 取本品装量差异项下的粉末约 1g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,加入氯仿液 30ml,超声处理 2次 ,每次 30min ,弃去氯仿 ,挥干 ,加甲醇 30ml,超声处理 2次 ,每次 30min ,合并甲醇液 ,蒸干 ,残渣加 5 0 %甲醇溶解 ,转移至 10ml量瓶内 ,加 5 0 %甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得。精密称取绿原酸对照品 5mg ,置 10 0ml量瓶中 ,加 5 0 %甲醇适量 ,超声波处理10min ,使对照品溶解 ,再加 5 0 %甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。分别吸取对照品溶液与供试品溶液各 2 0 μl,注入液相色谱仪 ,按拟定方法测定 ,结果见表 2。表 2 龙川草骨痛颗粒样品测定结果 (n =2 )Tab 2 ResultsofDeterminationofsampleinLongchuancaogutongkeli批 号含量 ( μg·g- 1 )每袋含量 (mg·g- 1 )2 0 0 2 0 62 0 49.811.2 452 0 0 2 0 62 3 5 2 .10 1.3 0 22 0 0 3 0 3 14 5 0 .85 1.2 5 13 讨论3.1 本品每袋含杜仲以绿原酸计 (C16 H18O9)计 ,不得少于 1mg。实验测定的 3批样品每袋含量在 1.2 5 1～ 1.30 2mg ,符合要求。3.2 在提取方法、提取溶剂的选择试验中 ,我们分别选用甲醇、乙醇为提取溶剂 ,超声波处理 30min ,结果甲醇提取量大于乙醇。因此 ,选择甲醇为提取溶剂。3.3 在色谱条件的选择试验中 ,我们参考文献对流动相作了改进 ,采用了甲醇 - 0 .4 %磷酸水溶液 ,而未采用缓冲液。结果分离效果较好 ,并有利于色谱柱的长期使用。高效液相色谱法测定龙川草骨痛颗粒中绿原酸的含量@赵昕$中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所!辽宁沈阳110026
@王旭明$中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所!辽宁沈阳110026
@赵文军$中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所!辽宁沈阳110026龙川草骨痛颗粒 ;;高效液相色谱法;;绿原酸目的 采用高效液相色谱法,建立龙川草骨痛颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法 采用ODS分析色谱柱(4.6mm×2 5 0mm ,7μm) ;流动相为甲醇- 0 .4 %磷酸溶液(15∶85 ) ;流速:1ml/min ;检测波长:32 7nm。结果 HPLC法测定绿原酸可达基线分离,在浓度1.6 2～2 1.6 0 μg时线性良好,回归方程:A =2 5 16 4 0 9C - 2 979,r=1.0 0 0 0 ,5次测定平均加样回收率为98.7% ,RSD为2 .2 9%。结论 该法操作简便,结果准确,重现性好,可作为该制剂的质量控制方法。<1> 周庆华,李彦冰.树条荚荆果实中绿原酸的含量测定
.中医药学报.1996,(6):45
<2> 丁青龙,黄晓瑾,沈晓洁,等.不同厂家银黄口服液中黄芩苷、绿原酸含量测定.中国医院药学杂志,1996,16(7):315
<3> 陈金霞,谷 玲,孙立新,等.高效液相色谱法测定小儿咳喘灵口服液中绿原酸的含量.现代应用药学,1996,13(4):42∮眉状肌⒁掖嘉崛∪芗?,超声波处理 30min ,结果甲醇提取量大于乙醇。因此 ,选择甲醇为提取溶剂。3.3 在色谱条件的选择试验中 ,我们参考文献对流动相作了改进 ,采用了甲醇 - 0 .4 %磷酸水溶液 ,而未采用缓冲液。结果分离效果较好 ,并有利于色谱柱的长期使用。高效液相色谱法测定龙川草骨痛颗粒中绿原酸的含量@赵昕$中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所!辽宁沈阳110026
@王旭明$中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所!辽宁沈阳110026
@赵文军$中国人民解放军沈阳军区联勤部药品仪器检验所!辽宁沈阳110026龙川草骨痛颗粒 ;;高效液相色谱法;;绿原酸目的 采用高效液相色谱法,建立龙川草骨痛颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法 采用ODS分析色谱柱(4.6mm×2 5 0mm ,7μm) ;流动相为甲醇- 0 .4 %磷酸溶液(15∶85 ) ;流速:1ml/min ;检测波长:32 7nm。结果 HPLC法测定绿原酸可达基线分离,在浓度1.6 2～2 1.6 0 μg时线性良好,回归方程:A =2 5 16 4 0 9C - 2 979,r=1.0 0 0 0 ,5次测定平均加样回收率为98.7% ,RSD为2 .2 9%。结论 该法操作简
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