0 引 言格列吡嗪片为磺脲类口服降糖药 ,主要作用于胰岛B细胞 ,促进内源性胰岛素分泌 ,抑制肝糖原分解并促进肌肉利用葡萄糖 ,还可以改变胰岛素靶组织对胰岛素的反应性<1> 。本研究采用反相高效液相色谱法 (HPLC UV) ,对格列吡嗪片在健康人体内药动学和相对生物利用度进行研究。1 材料和方法1 .1 仪器 岛津LC 1 0ADHPLC系统 ,SPD 1 0A紫外分光光度检测仪 ,Reheody 772 5I进样阀。WDL 95色谱工作站。Sartorius电子天平 (1 /1 0万 )。1 .2 药品与试剂 格列吡嗪片 (受试制剂 ,5mg/片 ,江苏方强制药厂 ,批号 2 0 0 1 0 1 1 4 ) ;格列吡嗪片 (参比制剂 ,5mg/片 ,珠海联邦制药有限公司中山分厂 ,批号 0 0 0 4 1 9) ;格列吡嗪 (标准品 ,纯度99 .8% ,江苏方强制药厂提供 ) ;格列齐特 (内标 ,纯度 99.8% ,江苏方强制药厂提供 ) ;甲醇 (色谱纯 ,美国Tedia公司出品 ) ;NaAC、HAC、磷酸二氢钾为分析纯 ,市售 ;蒸馏水 ,用 0 .4 5 μm微孔滤膜过滤。1 .3 色谱条件 岛津LC 1 0ADHPLC系统 ,色谱柱 :LichrospherC 1 8柱 (5 μm ,1 5 0mm× 4 .6mm) ,流动相 :甲醇 0 .0 1mol/L醋酸盐缓冲溶液 (pH4 .8)=5 9∶4 1 (v/v) ,流速 :1ml/min ,紫外检测波长 :2 2 5nm ,柱温 :36℃。1 .4 血浆样品处理<2 > 取血浆 0 .5ml置 1 0ml玻璃离心管中 ,加入 4mg/L内标格列齐特 2 0 μl,加入0 .1mmol/L的KH2 PO4 缓冲液 (pH =4 .0 ) 2 0 0 μl,混匀后 ,加入二氯甲烷 5ml,混旋 1 .5min ,30 0 0r/min离心 1 0min ,取出下层有机相 ,压缩空气流吹干 ,用 2 0 0 μl流动相溶解残渣 ,取 5 0 μl进样。在上述色谱条件下 ,格列吡嗪的保留时间约 8.2min左右 ,内标格列齐特的保留时间在 1 0 .4min左右。空白血浆无杂质干扰。2 方法学评价2 .1 标准曲线制作 精密称取格列吡嗪标准品适量 ,制成标准品水溶液 ,取健康志愿者混合空白血浆 ,加入适量格列吡嗪标准品水溶液 ,配制浓度分别为 2 5、5 0、1 0 0、2 0 0、5 0 0、1 0 0 0 μg/L的血浆样品溶液 ,如上述方法处理血浆样品后测定。采用内标法峰面积定量 ,以格列吡嗪浓度为x轴 ,以格列吡嗪峰面积与格列齐特峰面积的比值为 y轴 ,进行回归 ,回归方程 y =2 86 .8x +9.1 2 7,相关性良好 ,相关系数r =0 .9994 (n =5 )。2 .2 回收率试验 取空白血浆加入格列吡嗪标准品水溶液 ,配制浓度分别为 2 5、2 0 0、1 0 0 0 μg/L血浆样品溶液 ,每个浓度配制 5份 ,处理后测定。将测得的峰面积与相应浓度格列吡嗪标准品水溶液直接进样 ,与测得的峰面积相比 ,计算绝对回收率 ,结果见表 1。表 1 绝对回收率 (n =5 )Table 1 Theresultsofrecovery(n =5 )浓度 ( μg/L) 测定值 ( μg/L) 绝对回收率 ( %)RSD( %)2 5 2 2 .2 1± 1.93 88.5 67.722 0 0 177.75± 9.1688.87 4.5 810 0 0 92 0 .96± 2 6.2 992 .10 2 .632 .3 精密度与相对回收率试验 同上法 ,一天内配制上述 3种浓度血浆样品溶液各 5份 ,处理后测定 ;连续 5天 ,每天配制上述 3种浓度血浆样品溶液各1份 ,处理后测定。分别计算日内和日间精密度 ,并计算相对回收率 (准确度 ) ,结果见表 2。2 .4 格列吡嗪在血浆中的稳定性试验 同法 ,配制上述 3种浓度血浆样品溶液各 4份 ,分别置于室温、4℃冰箱、- 30℃冰箱中 ,放置一定时间 ,处理后测定 ,结果 3个浓度测定结果的RSD均 <6 %。表 2 精密度与相对回收率 (n =5 )Table 2 Theintra dayandinter dayprecision (n =5 )浓度( μg/L)日 内测定值( μg/L)相对回收率( %)RSD( %)日 间测定值( μg/L)相对回收率( %)RSD( %)2 5 2 9.3 8± 0 .80 117.5 2 2 .72 2 8.3 4± 1.17 113 .3 84.132 0 0 2 12 .70± 9.3 0 10 6.3 94.3 7 2 0 3 .5 8± 7.65 10 1.793 .7610 0 0 10 82 .89± 11.7910 8.2 91.0 910 5 3 .40± 3 2 .3 610 5 .3 43 .0 73 人体生物利用度试验3.1 受试者选择 入选的 2 0名健康男性志愿者 ,年龄 (2 2 .3± 1 .6 )岁 ,身高 (1 72 .9± 5 .1 )cm ,体重(6 4.8± 3.9)kg ,体检各项指标正常 ,不嗜烟酒 ,近 2周内未服用过其他任何药物 ,试验期间禁烟、酒、茶及含咖啡因的饮料。每位受试者在试验前均签署“知情同意书”。3.2 方法及设计 2 0名受试者随机分为两组 ,每组 1 0人 ,采用自身交叉对照试验方法。受试者禁食1 2h后于晨 8:0 0空腹用室温 5 0 %葡萄糖水 2 0 0ml送服试验制剂或参比制剂格列吡嗪片 2片 (含格列吡嗪 1 0mg) ,1周后两组自身交叉服用。服药后 4h统一进标准餐 ,受试者在服药后避免剧烈活动。分别于服药前及服药后 0 .5、1、1 .5、2、2 .5、3、4、6、8、1 0、1 2和 1 5h抽取前臂静脉血 3ml,肝素抗凝 ,立即离心 ,分离出血浆 ,置于 - 30℃冰箱保存待测。3.3 结果 2 0名受试者服用参比和试验制剂后 ,参比和试验制剂格列吡嗪片的平均血药浓度 时间曲线见图 1。血药浓度 时间数据经 3p97药动学程序进行模型选择和拟合 ,口服格列吡嗪片的药动学模型为一房室模型 ,药动学参数结果见表 3。 以珠海联邦制药有限公司中山分厂生产的格列吡嗪片为参比制剂 ,江苏方强制药厂生产的格列吡嗪片的生物利用度F0～ 15为 (1 1 0 .6± 1 9.8) %、F0～∞为 (1 0 8.8± 1 7.9) %。3.4 统计分析结果 对lnAUC0 - 15,lnAUC0～∞ 和lnCmax作方差分析和双单侧t检验。结果显示 ,AUC0～ 15,AUC0～∞ 和Cmax均等效 ,AUC0～ 15,AUC0～∞和Cmax90 %可信限统计结果均在规定范围内 (80 %～1 2 0 % )。图 1 健康志愿者口服 1 0mg试验制剂和参比制剂的时间血药浓度曲线 (n =2 0 )Figure 1 Themeanplasmaconcentrations timecurvesaftero raladiministrationof 1 0mgtestandreferencetablets(n =2 0 )表 3 健康男性志愿者口服格列吡嗪参比制剂和试验制剂后的药动学参数 (n =2 0 )Table 3 Pharmacokineticparametersafteroraladministrationof 1 0mgtestandreferencetabletsinmalevolunteers(n =2 0 )药动学参数试验制剂参比制剂AUC0～ 15<μg/(L·h) > 3 5 0 2 .78± 63 5 .82 3 2 14 .2 3± 5 90 .46AUC0～∞<μg/(L·h) > 3 868.2 2± 699.93 3 5 93 .94± 63 8.60Cmax( μg/L) 5 5 0 .80± 110 .195 3 1.15± 14 8.42Tmax(h) 3 .85± 1.44 3 .76± 1.13Ke(h- 1) 0 .2 11± 0 .0 610 .194± 0 .0 46t1/2ke(h) 3 .5 7± 1.113 .80± 1.0 64 讨 论本项研究结果表明 ,两种制剂的达峰时间在 2～ 5h之间 ,与文献 <3～ 5 >报道相似。两种制剂的达峰时间、峰浓度和消除半衰期基本一致。从吸收情况来看 ,在达峰前试验制剂的血药浓度稍高于参比制剂 ,因为两种制剂均为片剂 ,引起这种现象的原因可能是由于不同生产厂家的工艺和辅料不同造成吸收程度上有一定差异。按药物生物等效性试验评价的要求 ,对经对数转换后AUC0～ 15、AUC0～∞ 、Cmax和Tmax进行方差分析和双单侧t检验。结果表明 ,试验制剂与参比制剂的各项参数间无明显差异 ,90 %可信限落在允许范围内 ,说明两种制剂生物等效。试验中观察到 ,健康志愿者在服药后 1～ 2h出现轻度低血糖反应 ,此时血药浓度近峰值 ,说明格列吡嗪有明显降低正常血糖的作用 ,提示在临床应用中应注意控制剂量 ,餐前用药可达到治疗高血糖和避免血糖过低的双重作用格列吡嗪片人体相对生物利用度@倪立$南京军区南京总医院临床药理科!江苏南京210002
@韩宗红$开封市儿童医院药剂科!河南开封475000
@曹晓梅$南京军区南京总医院临床药理科!江苏南京210002
@李金恒$南京军区南京总医院临
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