随着时代的进步 ,科学技术的发展 ,特别是医学模式的转变和全球疾病谱的改变 ,人们对卫生保健、提高生活质量的要求更加迫切 ,中医药由于在慢性病防治领域、养生保健方面具有明显的优势与特色而备受注目 ,然而受到自身体系及研究方法的制约 ,中医药学尚无突破性的飞跃。如何让中医药走向现代化、国际化是一项迫切的任务。 1 988年日本学者田代真一提出血清药理学这一概念 ,为中医药研究开辟了一条新途径 ,血清药理学引起了越来越多的重视 ,显示出一定的应用前景。1 血清药理学的优势血清药理学是指给动物灌胃或人服用一定量的中药或复方制剂 ,一定时间后采集血液 ,分离血清 ,用此血清进行体外实验的一种实验方法。与传统的将中药粗提物直接加入反应体系中的方法相比具有明显的优势 :在某种程度上克服中药本身的理化性质不确定因素对实验结果的干扰 ,而且相对接近药物在体内的生物转化的真实过程 ,能在一定程度上揭示中药和复方在体内代谢过程中的转化和转变 ,有助于中药真正有效部位、活性成分的发现。能客观地阐明中药的药效和作用机理<1 > 。2 研究方法2 .1 选择动物供体动物可为猴、豚鼠、兔、大鼠、小鼠 ,尽可能选择与受试细胞来源同种属的动物 ,为了减少个体差异的影响 ,供体动物至少 4只 ,且雌性各半 ,并将每组动物血清混合。因药物与机体相互作用 ,机体在不同状态下对药物的代谢有不同程度的差异 ,故在生理状态、病理状态下采集的血清其含药成分、剂量可能不同 ;而含药血清的受试对象多为病理状态下 ,故供体动物应当造模 ,以保证中药血清药理学试验与在体试验的一致性 ,使离体的中药血清药理学试验与在体的药理学试验结果能够相互联系、相互参照 ,从而对药物疗效的评价达到真实、可信<2 > 。2 .2 给药剂量、次数通常采用整体动物的等效剂量或乘以一定的倍数 ,李仪奎等<3 > 提出给药剂量 =在体实验的给药剂量×反应体系中被稀释的倍数 ,然而药物在体内的代谢是一个复杂的过程 ,血药浓度与给药剂量并不呈量效关系。给药次数有多种方案 ,有单次加倍给药 ,2次给药 ,3次给药 ,3天、7～ 1 0、1 5天给药 ;末次给药后 30min～ 2h采血。我们认为给药 7天 ,末次给药 2h采血为宜 ,能保证血清的有效药物浓度 ,且不浪费人力、财力、时间。王宁生认为为使药理试验的含药血清有较高且稳定的中药活性有效成分 ,且血中活性有效成分含量在一段时间内相对稳定 ,以近似达到稳态血药浓度时采血制备含药血清为妥<1 > 。好的方法是进行预试验 ,将不同时间的含药血清的药效比较后再确定最佳采血时间。2 .3 含药血清的处理、保存一般认为采集的血清应置于 56℃水浴中灭活 30min ,以除去血清中的活性物质如酶、补体、抗体等。刘成海认为灭活后有助于减少血清的非药理性干扰 ,又符合减少生物感染的常规细胞培养要求<4> ;徐海波认为动物血清灭活后 ,血清中含的机体在药物的作用下产生的内生性有效成分将减少或丧失生物活性 ,将影响药理试验结果<5> ;故血清的灭活处理与否 ,除应注意药物的作用机理外 ,还应考虑血清中所含活性成分的热稳定性 ,包括分子变化和物理变化<1 > 。在含药血清保存方法的探讨中 ,催晓兰等<6> 的研究结果显示 ,含药血清经 4℃ ,3天保存后药效无影响 ,贺玉琢等<7> 报道含桂枝大鼠血清在 - 2 0℃保存 3个月 ,其抗病毒作用无任何影响。而周明眉等研究发现含药血清在 - 2 0℃保存 2个月后药效显著降低 ,提示含药血清经低温保存过程中 ,药物发生分解等变化 ,致使有效成分降低<8> 。故一般认为进行血清药理学试验时尽量用新鲜或保存时间较短的含药血清。2 .4 反应体系中含药血清的添加量吴健宇认为培养体中血清的可添加量与血清来源的动物种属、血清灭活与否有关<9> 。选择与受试细胞种属接近的供体动物血清 ,灭活后的血清 (对细胞的细胞毒作用明显减少 ) ,可加大剂量。反应体系中含药血清加入量的药理效应曲线呈正态分布 ,而非S型。故在采用血清药理学方法研究时 ,应考虑血清本身所含物质及血清体积等因素对体外试验结果的影响<1 0 > 。浓度太低 ,所含药物达不到有效含量 ,浓度过高 ,易产生细胞毒作用。故一般认为以 5 %～ 2 0 %的浓度较为适宜。另外 ,实验必须有空白血清作对照 ,以排除血清本身所含活性物质对整体实验的干扰。3 血清药理学的研究现状目前 ,含药血清试验方法已成为中药研究中的热点 ,研究层次已从器官培养到细胞培养、基因表达、受体和酶活性、DNA合成等 ,以细胞药效学的研究最多 ;研究领域广 ,主要涉及 :对细胞分裂增殖的影响 ,抗肿瘤作用 ,对细胞凋亡的作用 ,调节免疫 ,抗病毒 ,抗菌等方面。另外 ,“针灸血清”的概念的提出和它在研究中的运用 ,是针灸学者为克服在体试验局限性而进行长期摸索 ,并得到“中药血清”启发的结果<1 1 > 。4 血清药理学研究方法的思考4 .1 扩大给药途径目前大部分采用灌胃给药途径 ,而其它给药方式如皮下、肌肉、静脉给药很少涉及 ,这不利于中药其它制剂的研究 ,中药剂型研究滞后 ,严重影响其使用率 ,因此 ,可以借助血清药理学这一方法 ,加速剂型研究。4 .2 含药血清和中药粗制品协同研究大多数试验结果表明含药血清有一定疗效 ,中药粗体物无效 ,也有相反的结论 ,还有两者均有作用 ,且煎剂浓缩液作用强于含药血清<1 2 > 。这表明中药血清和中药煎剂浓缩液的作用是有区别的 ,有的中药是原药起作用 ,而有的是胃肠道消化吸收再经生物转化或通过第二信使间接起作用 ,通过协同研究 ,可以发现中药发挥作用的物质基础及有效成分。4 .3 离体试验和在体试验并行离体实验条件易控制 ,可以排除体内干扰 ,能直接观察 ,但由于体内外的环境不同 ,离体的细胞不受神经体液的调控 ,体内外的细胞功能不完全相同。在体实验与离体试验相配合 ,可以优势互补 ,能从深层次上阐明复方制剂的作用机制。4 .4 血清药理学、血清药化学、药物动力学同步至今含药血清试验方法似乎偏重于药效研究上 ,没有对血清中有效成分作更深层次的分析 ,尚缺乏血清中所含药物成分的定性、定量的分析 ,其在体内的代谢过程也还未知 ,血清中多种成分都可能与中药成分或实验室中外加酶系、培养细胞等产生作用 ,其相互影响是用简单的空白对照无法解释的<1 3 > 。从血清中寻找有效成分 ,以血清为材料的生药学的方法论称为“血清药化学” ,与从植物药的煎液中分离有效成分 ,应用于药理研究进行新药化学一样 ,以口服中药后的血液为材料 ,分离有效成分是可能的<1 4 > 。若同时监测多种成分的血药浓度变化及其药效变化 ,建立药效 -药动 -时间三维模型 ,研究其相关性<1 3 > ,血清药理学、血清药化学、药物动力学同步进行 ,系统研究 ,综合考察。寻求和探索科学方法 ,建立规范化技术 ,势必加深、加速中药的发展。总之 ,血清药理学 ,作为一种新的实验方法 ,还刚起步 ,存在许多问题 ,需不断完善 ,但毕竟为中医药的发展开辟了一条崭新的大道 ,提供了科学的方法 ,势必加速中医药现代化发展的进程。中药血清药理学研究初探@史丙俊$泸州医学院附属医院皮肤 科!四川泸州6460001.王宁生,雷 燕,刘 平.关于血清药理学的若干思考
.中国中西医结合杂志,1999;19(5):263
2.张声鹏,施旭光,桂蜀华.关于中药血清药理学中血清供体动物是否造模的思考.中国中西医结合杂志,2001;21(5):388
3.李仪奎.中药血清药理学实验方法的若干问题.中药新药与临床药理,1999;10(2):95
4.刘成海,刘 平,刘 成,等.抗肝纤维化有效复方中药血清药理学方法探讨.中国实验方剂学杂志,1998;4(2):16
5.徐海波,李彩君.中药血清药理学方法探讨.中国中医基础医学杂志,1999;5(8):13
6.催晓兰,贺玉琢,高英杰,等.中药复方血清药理研究方法学探讨-Ⅱ.中国试验方剂学杂志,1998;4(3):45
7.贺玉琢,高英杰,富杭育.含桂枝汤大鼠血清对病毒致细胞病变作用的影响.中国试验方剂学杂志,1998;4(4):26
8.周明眉,杨 奎,姜远平,等.中药血清药理学的方法学研究———含药血清低温保存和血清灭活的影响.中药药理与临床,1999;15(2):44
9.吴健宇,穆 静,李仪奎.血清药理学实验中异种动物血清对细胞的毒性作用和灭活后的减毒作用.中国药理学通报,2000;16(1):118
10.周明眉,杨 奎,姜远平,等.中药血清药理学的方法学研究———反应体系中含血清加入量的研究.中药药理与临床,1998;14(6):43
11.陈汉平,裴 建.关于“针灸血清”方法的研究和应用———四论针灸学的开放性.上海针灸杂志,1998;17(1):1
12.林秋芳,朱梅菊,郭振球,等.新制抗癌方对人肝癌细胞(HePG2)体外生长的抑制作用.湖南中医学院学报,1999;19(2):6
13.潘国宇,刘晓东.中药复方药物动力学研究的方法及展望.中草药,1998;29(9):642
14.贺玉琢.日本汉方药“血清药理学”、“血清药化学”的研究概况.国外医学中医中药分册,1998;20(5):34 .2 含药血清和中药粗制品协同研究大多数试验结果表明含药血清有一定疗效 ,中药粗体物无效 ,也有相反的结论 ,还有
More abstracts about the 中药血清药理学研究初探