为进一步发掘东北菱的药用价值 ,本文作者对其进行了系统的研究 <1-3 > ,分析了东北菱中的黄酮化合物。1 仪器与试剂1 .1 仪 器 电热恒温水浴锅 (北京医疗设备厂 ) ,SHB- B型循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司 ) ,电热三用水箱 (北京医疗设备厂 ) ,ZFQ85 A型旋转蒸发器 (上海医械专机厂 ) ,日本岛津的 LC- 8A高效液相制备色谱仪 (日本岛津 SPD-6AV紫外—可见检测器 ) ,SB32 0 0型超声波提取器( SHANGHAI,BRANSON) ,SYZ- B型石英亚沸高纯水蒸馏器 (江苏宜兴新建勤华石英玻璃仪器厂 )。1 .2 试 剂 95 %的乙醇 ,石油醚 ,正丁醇 ,盐酸 -镁粉 ,硅胶剂 ,展开剂 <乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水 ( 5∶ 3∶ 1∶ 1 ) >,显色剂 ( 1 %～ 2 % Fe Cl3 乙醇溶液 ) ,乙腈 ( HPLC专用 ) ,磷酸 (分析纯 ) ,无水乙醇(优级纯 ) ,二次蒸馏水 ,甲醇 (优级纯 )。2 方 法2 .1 提 取 东北菱粉碎至通过 1 cm直径的筛子 ,取 4kg粉碎后的东北菱放入提取器中 ,加95 %乙醇热回流提取 ,每次提取加热 3h后 ,吸出提取液后再加入 95 %乙醇 ,如此反复若干次 ,直至提取液用盐酸 -镁粉检查在泡沫处不出现粉红色为止 ,合并提取液减压浓缩 ,回收乙醇 ,待提取液浓缩至约2 5 0 0 ml时 ,分次转入旋转蒸发器浓缩 ,直至稠膏。2 .2 分 离 将提取液的浓缩稠膏以三重水溶解 ,搅拌使之悬浮 ,进而转入分液漏斗中 ,用石油醚萃取 1 1次 ;水层再以乙酸乙酯萃取 1 0次 ,将所得的脂层溶液转入另一分液漏斗中再静置分层 ,得乙酸乙酯萃取液的上层和下层。2 .3 提取物的硅胶层析 以硅胶 G铺成2 4 cm× 8.9cm的硬板 ,将石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液上层和下层分别点板 ,以展开剂展层 5 0 min,取出、晾干后喷 1 .5 %的 Fe Cl3 乙醇溶液显色。2 .4 HPLC测定 色谱柱为 ODS C18色谱柱。流动相为乙腈 - 0 .4%的磷酸水溶液 ( 1∶ 3) ,流速为2 .4ml·min-1,检测波长选在 360 nm处。3 结 果3.1 极性不同的溶剂萃取结果 石油醚萃取液为墨绿色 ,其中有大量沉淀积于底部 ,据文献介绍这部分萃取液中含叶绿素和大量的植物性油脂 ,乙酸乙酯萃取过程中水层、脂层分层缓慢需过夜 ,但即使静置过夜 ,水、脂两层中间还有一不透明的油层 ,该层流动性较差 ,称之为乙酸乙酯萃取液下层 ,该层为橙黄色 ;乙酸乙酯萃取液上层为桔红色 ,流动性好。3.2 薄层层析结果 以毛细管将 3种萃取液点于薄层板上 ,晾干后以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水 ( 5∶ 3∶ 1∶ 1 )的展开剂展层 ,5 0 min后取出 ,晾干后喷 Fe Cl3 的乙醇溶液显色 ,所得斑点数据 ,见表 1。Tab.1 Spot of flavones on silica gel filmExtraction liquid Solvent frontline( l/ cm) Spot place( l/ cm) Rf× 10 0Extraction liquid 15 .912 .176.1Submit layer 15 .911.3 71.115 .910 .867.915 .910 .465 .415 .99.861.6U nder layer 15 .910 .7 67.315 .910 .163 .53.3 HPLC分析结果 1在最佳条件下测得的样品分析色谱图见图 1。 2部分组分纯度检验色谱图见图 2。4 讨 论从薄层层析的结果来看<4-5> ,东北菱提取液的石油醚萃取液中没有层析斑点 ,表明石油醚萃取物中不含黄酮体 ,东北菱提取液的乙酸乙酯萃取液上层含有 5种黄酮体 ,萃取液下层中含有 2种黄酮体 ,至于这 7种黄酮体的化学结构 ,尚需进一步研究。Fig.1 HPL C chromatography picture(solventCH3CN/0 .4 % H3PO4 )Fig.2 Chromatography picture of detectionof composition purit利用高效制备液相色谱法分离东北菱中黄酮类化合物 <6> ,操作简单 ,易于放大 ,可为进一步的研究提供标准样品。物种组分的结构有待用红外光谱、核磁共振波谱法进一步分析。黄酮类化合物生理活性多种多样。迄今为止 ,已发现黄酮类化合物能防治高血压及动脉硬化 ,对心血管系统疾病有显著的疗效。另外还有解毒、抗炎、雌性激素、抗菌及抗病毒、泻下、解痉作 用东北菱中黄酮类化合物的分离实验@牛凤兰$吉林大学公共卫生学院中心实验室!吉林长春130021
@刘国良$吉林大学公共卫生学院中心实验室!吉林长春130021
@董威严$吉林大学公共卫生学院中心实验室!吉林长春130021
@程舸$吉林大学公共卫生学院中心实验室!吉林长春130021
@梁睿$吉林大学公共卫生学院中心实验室!吉林长春130021
@巩宏伟$吉林大学公共卫生学院中心实验室!吉林长春130021
@曲扬$吉林大学图书馆黄酮类/分离和提纯;;色谱法;;东北菱目的:分析东北菱中的黄酮类化 合物。方法:采用薄层层析法、高效液相色谱法对东北菱中的黄酮类化合物进行分析。结果:东北 菱中含有黄酮类化合物。结论:东北菱是一种具有开发利用价值的野生水生植物<1>牛凤兰,李 晨旭,董威严,等.东北菱中氨基酸和无机元素含量分析
.食品科学,2001,22(3):84-86.
<2>牛凤兰,李晨旭,董威严,等.四种水生植物中无机元素和维生素C的研究.食品科学,2001,22(1):78-79.
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<4>中国医学科学院药物研究所编.薄层分离及其在中草药分析中的应用.北京:科学出版社,1976.8.
<5>中国科学院上海药物研究所编.中草药有效成分提取与分离.上海:上海科学技术出版社,1983.7.
<6>黄文哲.HPL C测定短瓣金莲花中两种黄酮苷的含量.中国药学杂志,2000,35(10):658-659吉林省科技厅资助课题 (2 0 0 10 5 6 0 )Э蒲г阂┪镅芯克?薄层分离及其在中草药分析中的应用.北京:科学出版社,1976.8.
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