盐酸奥昔布宁 (Ｏｘｂ) ,简称奥宁 ,于 1999年 6月在我国批准进行临床试验。该药对泌尿道平滑肌有很强的松弛作用 ,可使膀胱容量增加 ,从而使尿失禁患者的症状得到控制 ,且不良反应小<1> 。Ｏｘｂ测定主要有高效液相色谱法 (ＨＰＬＣ)和气相色谱法 质谱法联用 (ＧＣ ＭＳ)等。本研究参照有关文献<2 4 > ,建立了反相 (ＲＰ) ＨＰＬＣ测定法 ,简便易行 ,现报告如下。1 材料和方法1.1 仪器和试剂 Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪 :5 10型高压恒流泵 ,2 4 87紫外检测器 ,Ｋ 10型六通进样阀(上海科学仪器厂 ) ,三锐色谱工作站 ;ＵＶ 2 6 5ＦＷ型分光光度计 ,日本岛津公司。Ｏｘｂ对照品 (青岛制药股份公司 ,批号 2 0 0 0 3) ,Ｏｘｂ片 (本室自制 ,批号0 110 2 1,0 110 2 2 ,0 110 2 3) ;甲醇色谱纯 ,水为去离子蒸馏水 ,其余均为分析纯。1.2 紫外吸收光谱 取Ｏｘｂ对照品适量 ,溶于水中 ,进行紫外扫描 ,结果见图 1,在 2 2 0ｎｍ处有一肩峰吸收 ,因此选定 2 2 0ｎｍ为紫外检测波长。图 1 Ｏｘｂ紫外吸收图谱Ｆｉｇ 1 Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｏｘｙｂｕｔｙｎｉｎ1.3 色谱条件 色谱柱 :Ｉｒｒｅｇｕｌａｒ ＨＣ18柱 (4.6ｍｍ× 15 0ｍｍ ,10 μｍ) ,流动相 :甲醇∶水∶1ｍｏｌ/Ｌ醋酸铵 (85∶13∶2 ) ,流速 :1.0ｍｌ/ｍｉｎ ,检测波长 :2 2 0ｎｍ ,灵敏度 :1.5ＡＵＦＳ。Ｏｘｂ保留时间约为 5 .0ｍｉｎ ,样品色谱图见图 2。图 2 Ｏｘｂ色谱图Ｆｉｇ 2 ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆｏｘｙｂｕｔｙｎｉｎＡ :Ｂｌａｎｋｏｘｙｂｕｔｙｎｉｎｔａｂｌｅｔ;Ｂ :Ｏｘｙｂｕｔｙｎｉｎｔａｂｌｅｔ2 结 果2 .1 标准曲线和检测限 精密称量适量Ｏｘｂ ,加水至刻度 ,使浓度分别为 0 .2、0 .5、1.0、5 .0、10 .0、5 0 .0、70 .0 μｇ/ｍｌ,ＨＰＬＣ检测。以Ｏｘｂ浓度Ｃ对其峰面积Ａ回归 ,得标准曲线 :Ｃ =5 .2 86 3× 10 - 5Ａ +0 .1993,ｒ =0 .9997。方法的最低检测浓度为 0 .1μｇ/ｍｌ,最低检测限为 1ｎｇ。2 .2 回收率 配制 0 .5、5 .0、5 0 .0 μｇ/ｍｌ 3组Ｏｘｂ标准液 ,加入处方量的空白辅料 ,混匀 ,进样 ,得到相应浓度 ,求得高、中、低 3组浓度回收率分别为10 8.38%、10 6 .5 5 %、10 7.4 6 % ,平均回收率为10 7.4 6 % ,ＲＳＤ为 0 .85 % (ｎ =3)。2 .3 精密度 取 2 .2中 3组Ｏｘｂ样品 ,分别在日内和日间重复测定 3次 ,结果日内ＲＳＤ分别为3.4 1%、3.6 7%、6 .2 4 % ,平均 4 .4 4% ;日间ＲＳＤ分别为 1.88%、0 .4 0 %、4 .17% ,平均 2 .15 %。2 .4 含量测定 称取Ｏｘｂ对照品约 5 0ｍｇ ,置 10ｍｌ量瓶中 ,加流动相溶解并稀释至刻度 ,精密量取 0 .1ｍｌ,置 10ｍｌ容量瓶中 ,加流动相至刻度 ,作为对照品溶液 ;另取Ｏｘｂ片 2 0片 ,刮去薄膜衣 ,研碎 ,精密称取粉末 (相当于Ｏｘｂ 5 0ｍｇ) ,置 10 0 0ｍｌ容量瓶中 ,加入流动相 6 0 0ｍｌ,超声 10ｍｉｎ ,不停振摇 4 5ｍｉｎ ,用流动相稀释至刻度 ,作为供试品溶液。量取对照品和供试品溶液各 10 μｌ注入色谱仪 ,按外标法以峰面积计算。结果分别为 94 .71%、10 3.4 6 %和 91.0 9%。2 .5 释放度测定 按中国药典 2 0 0 0版二部附录ⅩＤ第一法 ,进行释放度考察。释放介质 :2 0 0ｍｌ蒸馏水 ,温度 :37℃ ,转速 :10 0ｒ/ｍｉｎ ,分别在 2、4、8、12、16、2 4ｈ取样 1ｍｌ测定浓度 ,结果见图 3。图 3 盐酸奥昔布宁片的体外释放曲线Ｆｉｇ 3 Ｒｅｌｅａｓｅｃｕｒｖｅｏｆｏｘｙｂｕｔｙｎｉｎｃｏｎｔｒｏｌｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔ3 讨 论Ｏｘｂ的紫外测定波长 ,文献多取 2 0 3ｎｍ ,虽然吸收较大 ,但对仪器和试剂的要求较高 ,实际操作困难。而我们观察到它在 2 2 0ｎｍ左右有一肩峰吸收 ,紫外吸收值变化不大 ,可避免测定误差 ,因此选择此波长测定。美国药典 2 4版中采用的流动相为乙腈、甲醇、水、三乙胺以及磷酸的混合物 ,要求较高 ,不易操作。曾选择甲醇∶水 (85∶15 )和甲醇∶水∶1ｍｍｏｌ/Ｌ磷酸(85∶13∶2 )为流动相 ,结果出峰很快 ,峰形不对称。由于Ｏｘｂ为一碱性药物 ,在流动相中加入了醋酸铵改善峰形 ,最后选用了甲醇∶水∶1ｍｍｏｌ/Ｌ醋酸铵(85∶13∶2 )为流动相 ,主药与溶剂、有关物质均分离良好。本研究建立的ＨＰＬＣ测定方法 ,Ｏｘｂ在一定线性范围内呈良好线性关系 ,回收率和精密度实验均满足分析要求。用本法进行了自制Ｏｘｂ控释片的含量测定和溶出度研究 ,结果溶剂和辅料对主药无干扰 ,方法简便、准确、可行。反相高效液相色谱法测定盐酸奥昔布宁片的含量@丁雪鹰$第二军医大学药学院药剂学教研室!上海200433
@高申$第二军医大学药学院药剂学教研室!上海200433
@曹琴$武警8690部队医院药剂科
@缪春辉$解放军第92医院药剂科
@钟延强$第二军医大学药学院药剂学教研室!上海200433
@俞媛$第二军医大学药学院药剂学教研室!上海200433
@高静$第二军医大学药学院药剂学教研室!上海200433盐酸奥昔布宁;;反相高效液相色谱法;;含量测定目的 :建立盐酸奥昔布宁片的反相高效液相色谱测定法。 方法 :采用外标法 ,色谱柱 :Irregular HC18柱 ,流动相 :甲醇∶水∶1mol/L醋酸铵 (85∶13∶2 ) ,流速 :1.0ml/min ,检测波长 :2 2 0nm ,灵敏度 :1.5AUFS ,进样量 :10 μl。 结果 :本法线性范围为 0 .2 70 .0 μg/ml,最低检测限为 1ng ,平均回收率为 10 7.4 6 % ,日内差和日间差分别为 4 .4 4 %和 2 .15 %。 结论 :本测定方法简便易行 ,符合分析测定要求<1> 张玉凤,袁莉娟.奥宁
.中国新药杂志,1998,7(1):2021.ZhangYF ,YuanLJ .Oxybutynin.ZhongguoXinyaoZazhi(ChinNewDrugs),1998,7(1):2021.
<2> MassoudR ,FedericiG ,CascianiS ,etal.Extractionanddeterminationofoxybutynininhumanbladdersamplesbyreversed phasehigh performanceliquidchromatography.JChromatogrBBiomedSci,1999,734(1):163167.
<3> DeSchutterJA ,DeMoerlooseP .Determinationofoxybutyninchloridein pharmaceuticalsbyreversed phaseion pairliquidchromatographywithtwocounter ionsintheeluent.JChromatogr,1988,450(3):337342.
<4> PatrickKS ,MarkowitzJS ,JarviEJ ,etal.Gaschromatographic massspectrometricanalysisof plasmaoxybutyninusingadeuteratedinternalstandard..JChromatogr,1989,487(1):9198.
<5> ShibukawaA ,IshizawaN ,KimuraT ,etal.Plasma proteinbindingstudyofoxybutyminbyhigh performancefrontalanalysis.JChromatogrBAn alytTechnolBiomedLifeSci,2002,768(1):177188.咝б合嗌撞舛ǚā?方法:采用外标法 ,色谱柱 :Irregular HC18柱 ,流动相 :甲醇∶水∶1mol/L醋酸铵 (85∶13∶2 ) ,流速 :1.0ml/min ,检测波长 :2 2 0nm ,灵敏度 :1.5AUFS ,进样量 :10 μl。 结果 :本法线性范围为 0 .2 70 .0 μg/ml,最低检测限为 1ng ,平均回收率为 10 7.4 6 % ,日内差和日间差分别为 4 .4 4 %和 2 .15 %。 结论 :本测定方法简便易行 ,符合分析测定要求<1> 张玉凤,袁莉娟.奥宁.中国新药杂志,1998,7(1):2021.ZhangYF ,YuanLJ .Oxybutynin.ZhongguoXinyaoZazhi(ChinNewDrugs),1998,7(1):2021.
<2> MassoudR ,FedericiG ,CascianiS ,etal.Extractionanddeterminationofoxy
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