蛇胆川贝散系中国药典收载品种<1> ,由川贝母、蛇胆汁二味药材加工而成。具有清肺 ,止咳除痰作用。用于肺热咳嗽 ,痰多<1> 。原质量标准没有含量测定指标。川贝母为蛇胆川贝散中的主药之一。西贝碱为川贝母的主要成分之一<2 ,3 > 。控制西贝碱的含量对于提高蛇胆川贝散的内在质量至关重要。本实验采用薄层扫描法测定蛇胆川贝散中西贝碱的含量。作为检测和控制该制剂的含量指标 ,为该制剂的质量控制提供了可行的方法。1 实验材料与条件1.1 仪器薄层扫描仪 (TLCScannerⅢ瑞士CAMAG) ;点样仪(NanomatⅡ瑞士CAMAG) ;Compa计算机 (配CATS软件 ) ;PBQ -Ⅰ型薄层自动铺板器 (重庆南岸新力实验电器厂 ) ;定量毛细管 (美国Drummond)。1.2 试剂苯、氯仿、醋酸乙酯、无水硫酸钠、氨水均为分析纯。硅胶G(青岛海洋化工厂 ) ;西贝碱对照品 (中国药品生物制品检定所 ,供鉴别用 ,经归一化法测定含量为 96 .8% ) ,蛇胆川贝散 (分别为某厂产品 ,批号分别为 2 0 0 10 80 6 2 0 0 10 8122 0 0 110 17)1.3 薄层板的制备取硅胶G 5 g ,加 3倍量 0 .3%CMC Na溶液 ,充分研匀后铺于 15cm× 2 0cm的玻璃板上 ,晾干 ,10 5℃活化 1h ,置干燥器中备用。1.4 薄层色谱条件以醋酸乙酯 甲醇 浓氨试液 ( 17∶2∶1)为展开剂 ,展开15cm ,晾干 ,10 5℃烘 1h ,以改良碘化铋钾显色。薄层色谱效果理想。1.5 扫描波长的选择在同一块薄层板上分别点供试品溶液与西贝碱对照品溶液适量 ,依上法展开 ,显色。在 4 0 0～ 6 0 0nm内对西贝碱对照品斑点和供试品色谱中相应的斑点分别进行扫描 ,结果两者均在 4 70nm处有最大吸收 ,故选择λ =4 70nm作为测定波长。1.6 薄层扫描条件采用单波长反射线性扫描法 ,扫描宽度 :10 .0mm ,扫描波长为 4 70nm。2 实验方法与结果2 .1 溶液制备2 .1.1 对照品溶液的制备 精密称定西贝碱对照品一定量 ,加氯仿制成 0 .2 6mg .mL-1的溶液 ,即得。2 .1.2 供试品溶液的制备 取蛇胆川贝散适量 ,研细 ,精密称取细粉 3g ,加氨水 4mL ,密塞 1h ,加氯仿 10 0mL ,超声处理 30min ,放至室温 ,用氯仿补足重量 ,滤过 ,用氯仿补足重量 ,滤过 ,弃去初滤液 ,取续滤液 5 0mL ,水浴蒸干 ,残渣用氯仿移置 1mL量瓶中 ,加氯仿至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液。2 .1.3 阴性对照液的制备 按处方比例及工艺除去川贝母 ,配制蛇胆川贝散阴性对照 ,同法制备缺川贝母的阴性对照液。2 .2薄层色谱方法精密吸取供试品溶液、阴性对照液各 10 μL ,西贝碱对照品溶液 3μL ,按上述条件展开、显色、扫描测定 ,结果川贝母阴性对照溶液色谱在西贝碱对照品斑点位置上无斑点。说明阴性对照样品无干扰 ,供试品溶液得到良好分离。2 .3标准曲线的绘制精密称取西贝碱对照品适量 ,加氯仿制成每 1mL含0 .2 6mg的溶液 ,作为对照品溶液 ,精密吸取西贝碱对照品溶液 1,2 ,3,4 ,5 ,6 μL ,分别点于同一硅胶G CMC薄层板上 ,依法展开 ,显色、扫描测定 ,以点样量 ( μg)为横坐标 ,面积积分值为纵坐标作图。回归方程为Y =5 2 7.0 7x + 4 7.2 7,r =0 .9998。结果表明 :点样量在 0 .5 2～ 1.5 6 μg内 ,点样量与斑点峰面积呈良好的线性关系。因直线不通过零点 ,所以用外标二点法。2 .4稳定性验吸取西贝碱对照品溶液 3μL ,点于硅胶G CMC薄层板上依法展开 ,显色后每隔 30min扫描一次 ,结果在 2h内稳定 ,RSD =1.0 6 2 %。2 .5精密度试验同一斑点连续扫描 5次峰面积值的RSD =0 .4 % ;测定同一薄层板上 5个相同量的各对照品斑点峰面积值 ,RSD =1.8% ;测定 5块不同薄层板相同量的对照品斑点峰面积值 ,RSD =2 .3% ,表明精密度良好。2 .6重现性试验照“样品测定”项下的方法 ,对同一批样品 ,进行 5次测定 ,结果RSD =2 .1% (n =5 ) ,表明重现性良好。2 .7加样回收率试验精密量取已测得西贝碱含量的A厂生产 (批号2 0 0 10 80 6 )样品 6份 ,分别精密加入一定量的西贝碱对照品 ,依法测定 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。表 1 加样回收率试验Tab 1 Resultofrecoveryexperiment序号 加样前含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(% )10 .0 2 880 .0 3 90 .0 664 96.42 0 .0 2 65 0 .0 3 90 .0 66897.43 0 .0 2 73 0 .0 2 60 .0 5 2 797.740 .0 2 790 .0 2 60 .0 5 3 498.15 0 .0 2 85 0 .0 13 0 .0 41610 0 .860 .0 2 43 0 .0 13 0 .0 3 6795 .42 .8 样品测定精密吸取西贝碱对照品溶液 2 μL(点 2个点 )与 5 μL(点2个点 ) ,供试品溶液 10 μL(点 5个点 ) ,分别交叉点于同一硅胶G CMCNa薄层板上 ,同法展开、显色、扫描测定结果见表2。平均回收率为 97.6 % ,RSD为 1.88%。表 2 蛇胆川贝散中西贝碱的测定结果 (n =5 )Tab 2 ContentofimperialineinShedanChuanPowder(n =5 )生产厂家样品批号 含量(mg/ g)RSD/ %A 2 0 0 10 80 60 .0 163 2 .1B 2 0 0 10 812 0 .0 3 3 2 2 .3C 2 0 0 110 17 0 .0 2 2 7 1.83 讨论3.1 西贝碱为川贝母的主要成分之一 ,本法能较好地定量测定蛇胆川贝散中西贝碱的含量 ,方法简便、准确 ,可作为蛇胆川贝散的质量控制指标之一。3.2 根据西贝碱的理化性质 ,将蛇胆川贝散 ,用 10 %氨水碱化调pH至 10 ,比较了氯仿静置 2 4h提取与超声提取两种提取方法 ,结果发现氯仿静置 2 4h提取所得样品溶液的色谱上 ,杂质斑点较多 ,西贝碱斑点有干扰 ;而氯仿超声法所得供试液色谱上杂质斑点较少 ,扫描背景较浅 ,测定结果准确。故采取用氯仿超声法提取样品供试液。3.3 实验中曾试用了多种展开系统 ,结果以本实验所采用的展开条件最佳 ,斑点圆整 ,不拖尾 ,不扩散。3.4 结果表明 ,不同批号的蛇胆川贝散 ,西贝碱的含量可相差一倍。因此建议生产厂家应在投料前测定川贝母中西贝碱的含量 ,以保证蛇胆川贝散的质量薄层扫描法测定蛇胆川贝散中西贝碱的含量@李钦$河南大学药学院!河南开封475001
@王新春$河南大学东京医院!河南开封475001
@王先友$河南大学药学院!河南开封475001蛇胆川贝散;;西贝碱;;薄层扫描法目的 研 究蛇胆川贝散中西贝碱的含量测定方法。方法 采用薄层扫描法进行测定。结果 西贝碱点样量在0.5 2～1.6 0 μg之间线性关系良好,相关系数r=0 .9998。回收率为97.6 % ,RSD为1.88%。结论 本法灵敏、简便、准确,可用于本制剂的测定和质量控制<1>中国药典2000年版(一部)
.2000,579.
<2>李萍,刘理南,徐国钧.12种贝母的西贝素含量测定.中草药,1991,22(5):205.
<3>赵德永.4种川贝母的总皂苷、总生物碱及西贝素的含量测定.中国中药杂志,1994,19(2):71蛇胆川贝散 ,用 10 %氨水碱化调pH至 10 ,比较了氯仿静置 2 4h提取与超声提取两种提取方法 ,结果发现氯仿静置 2 4h提取所得样品溶液的色谱上 ,杂质斑点较多 ,西贝碱斑点有干扰 ;而氯仿超声法所得供试液色谱上杂质斑点较少 ,扫描背景较浅 ,测定结果准确。故采取用氯仿超声法提取样品供试液。3.3 实验中曾试用了多种展开系统 ,结果以本实验所采用的展开条件最佳 ,斑点圆整 ,不拖尾 ,不扩散。3.4 结果表明 ,不同批号的蛇胆川贝散 ,西贝碱的含量可相差一倍。因此建议生产厂家应在投料前测定川贝母中西贝碱的含量 ,以保证蛇胆川贝散的质量薄层扫描法测定蛇胆川贝散中西贝碱的含量@李钦$河南大学药学院!河南开封475001
@王新春$河南大学东京医院!河南开封475001
@王先友$河南大学药学院!河南开封475001蛇胆川贝散;;西贝碱;;薄层扫描法目的 研 究蛇胆川贝散中西贝碱的含量测定方法。方法 采用薄层扫描法进行测定。结果 西贝碱点样量在0.5 2～1.6 0 μg之间线性关系良好,相关系数r=0 .9998。回收率为97.6 % ,RSD为1.88%。结论 本法灵敏、简便、准确,可用于本制剂的测定和质量控制<1>中国药典2000年版(一部).2000,579.
<2>李萍,刘理南,徐国钧.12种贝母的西贝素含量测定.中草药,1991,22(5):205.
<3>赵德永.4种川贝母的总皂苷、总生物碱及西贝素的含量测定.中国中药杂志,1994,19(2):71
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