丹参为唇形科植物丹参(sa俪a miltiorrh如Bge.)的干燥根,又名赤参。本品是我国传统的常用中药之一,是中医活 血化癖、治疗冠心病的一味重要中药。关于丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量测定多有报道〔’ 一’〕,但并未在同一高效液相色谱条件下对三者的含量进行测定。本文采用反相高效液相色谱法 ,梯度洗脱,同时检测丹参提取物中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量,获得满意结果。1仪器和试药Agilent 1 100液相色谱仪,DAD检测器。 原儿茶醛对照品(中国药品生物制品检定所,含量测定用),丹参素钠对照品(上海医科大学提供, 归一化含量99.2%),丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所提供,含量98.5%,采 用正文测定方法,峰面积归一化法确定)和丹参提取物由天津天士力现代中药研究所植化室提供。乙睛为美国TEDIA公司,色谱纯;冰醋酸为天津科密欧化学试剂开发中心,优级纯。2色谱条件色谱柱:Alhima Cl,分析柱(250 mm x4·6 mm,5林m):流速:0.5 mL·min一‘;进样量为10协L;柱温:30℃;流动相:A为乙睛,B为水一冰醋酸(25:1);检测波长:281 nm,所有组分40 min内出完。二元 0*10而n梯度洗脱为A一B(2:98)一A一B(10:9田里匕些坐卡A一B(14:56)。3方法与结果3.1线性关系精密称取对照品丹参素钠15.23mg,
原儿茶醛8.25mg,
丹酚酸B 18.55 mg,置于50mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。按不同的比例稀释,得系列混合对照 品溶液,在本文的色谱条件下进行测定。
丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B的浓度x(mg·mL一 ’)分别和相应峰面积Y绘制标准曲线,结果表明丹参素钠浓度在0.10一0.25mg·mL一’范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=6.347x 103X+2.24r=0.9999原儿茶醛浓度在0.01一0.08 mg·mL一‘范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=2 .259 x 104X一2.97r二0.9999丹酚酸B浓度在0.08一0.30 mg·mL一‘范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y二1 .605 x 104X+3.81r=0.99993.2精密度试验和溶液稳定性考察将含丹参素钠0.122 mg·mL一’,原儿茶醛0.066 mg·mL一‘及丹酚酸B 0.148 mg·mL一‘的混合对照品溶液,重复进样。求得丹参素钠的峰面积的RSD=0.21%(n=5),原儿茶醛的峰面积的RSD=0.32%(n二5),丹酚酸B的峰面积的RSD=1.2%(n=5);取此液于第ld、第Zd、第3d、第4d、第sd、第7d和第9d分别进样 测定,每天5次。前4d的混合对照品的峰面积基本不变,丹参素钠的峰面积的RSD=0.36 %(n=5),原儿茶醛的峰面积的RSD=0.49%(n二5),丹酚酸B的峰面积的RSD=1.6%(n=5),表明对照品溶液可放置4d。3.3供试品溶液制备取同一批次丹参提取物25mg,置于25 mL量瓶中,加甲醇适量,超声5 min使其溶解,待冷却到室温后,加甲醇定容。溶液经0.45林m的微孔滤膜过滤,去掉初滤液,取续滤液,作为供试品溶液。3.4加样回收试验精密配制丹参素钠溶液0. 125 mg·mL一‘,原儿茶醛溶液0.以r mg·mL一’,丹酚酸B溶液0.169 mg·mL一‘,分别量取10 mL,加人到5份丹参提取物(每份0.25 mg),按“供试品溶液制备”项下进行处理。该方法回收率(n=5)丹参素为101.8%,R SD为1.7%;原儿茶醛为100.3%,RSD为1.2%;丹酚酸B为98.65%,RSD为2.2%。3.5重复性试验取同一批次丹参提取物25 mgs份,按照含量测定方法制备供试品溶液,测定,用外标法定量,结果丹参提取物中丹参素含量 (n=5)为0.41%,Rsn为0.38%;原儿茶醛含量(n二5)为0.17%,nsD为0.24%;丹酚酸B含量(n=5)为0.32%,RSD为1.1%。3.6样品含量测定按本文方法测定,3批样品测定结果见表1,色谱图见图1。 表1样品测定结果(%) Tab 1 Results of samPle detern幼nation丹参素sa】vianieaeidA) 原儿茶醛(protocateehualdehyde)丹酚酸BsalvianolieacidB)鹅伽No)‘U气乙内、一内,﹄J兮八、︸nU﹄Un︸22 20210 nU八11︸53 4655n no 图1丹参提取物色谱图 Fig IC腼matogranl of Sa知认而It动叮五ha Bge.既traction1.丹参素(。alvianie aeidA)2.原儿茶醛(protocateehualdehyde) 3.丹酚酸B(salvianolie aeidB)4讨论4.1丹参素对照品以钠盐形式进行保存(每1 mg丹参素钠相当于丹参素0.9 mg),由于流动相系统为酸性环境,故测定图谱实际反映的是丹参素的信息。4.2混合对照品溶 液中,丹酚酸B稳定性较差,而原儿茶醛最为稳定。长时间放置后,丹酚酸B的峰面积下降较快。 反相高效液相色谱法测定丹参提取物中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量@张文生$天津天士力集团现代中药研究所!天津300402
@李德坤$天津天士力集团现代中药研究所!天津 300402
@叶正良$天津天士力集团现代中药研究所!天津 300402<正> 丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhizaBge.)的干燥根,又名赤参。本品是我国传统的常用中药之一,是中 医活血化瘀、治疗冠心病的一味重要中药。关于丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量测定多有报道 ,但并未在同一高效液相色谱条件下对三者的含量进行测定。本文采用反相高效液相色谱法,梯度洗脱,同时检测丹参提取物中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的含量,获得满意结果。1DONG Mei-ling(董美伶),LIU Xiao-qiu(刘晓秋),CHEN Fakui(陈发奎),et al.Determination of protocatechualdehyde in Yuxuebi granula(瘀血痹颗粒中原儿茶醛的含量测定).J Chin Med Mater(中药材),2001,24(1) :50
2 SUN Pei(孙丕),HE Li-yi(何丽一).Determination of depsides in medicinal plans of Salvia by HPLC(HPLC测定鼠尾草属植物中酚酸类成分).Chin Pharm J(中国药学杂志),1997,32(suppl):26
3 BAO Li-xin(包丽昕),YAN Wen-sheng(颜文生),YIN Zheng-yuan(尹政元).Quantitative determination of Danshensu in Yangxinkeli by HPLC(HPLC法测定养心颗粒中丹参素的含量).Heilongjiang Med J(黑龙江医药),2000,13(3) :129anula(瘀血痹颗粒中原儿茶醛的含量测定).J Chin Med Mater(中药材),2001,24(1) :50
2 SUN Pei(孙丕),HE Li-yi(何丽一).Determination of depsides in medicinal plans of Salvia by HPLC(HPLC测定鼠尾草属植物中酚酸类成分).Chin Pharm J(中国药学杂志),1997,32(suppl):26
3 BAO Li-xin(包丽昕),YAN Wen-sheng(颜文生),YIN Zheng-yuan(尹政元).Quantitative determination of Danshensu in Yangxinkeli by HPLC(HPLC法测定养心颗粒中丹参素的含量).Heilongjiang Med J(黑龙江医药),2000,13(3) :129
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