三叶青的化学成分研究

三叶青的基源为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤 Tetrastigma hemsleyanum Diels et.Gilg。异名为蛇附子 (《植物名实图考》) ,石抱子 (《江西草药》) ,金线吊葫芦、三叶对 (《浙江民间常用草药》) ,小扁藤、三叶扁藤、拦山虎 (《广西实用中草药新选》) ,雷胆子(《湖南中草药新医疗法资料选编》)。三叶青生长于山谷林中或沟边坡地 ,分布于我国西南及安徽、浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西等省。三叶青以块根或全草入药 ,具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能 ,用于治疗高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬等症 ,具有很好的疗效 <1>。药理实验表明三叶青提取物有抗病毒作用 <2 >和明显的消炎镇痛 <3 >及保肝作用 <4> ,在民间有着广泛的应用。三叶青的化学成分研究目前尚少。刘东等<5> 从三叶青地上部分的石油醚萃取物中分离得到了 4个化合物 :蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β-谷甾醇和麦角甾醇。杨大坚等<6> 从三叶青块根的氯仿提取物中分离得到 3个化合物 :6′- O-苯甲酰基胡萝卜苷、胡萝卜苷和 β-谷甾醇。本实验从三叶青块根的醋酸乙酯萃取物中分离得到 7个化合物 ,经鉴定的有 4个 ,分别为 :β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素和山柰酚 - 3- O-新橙皮糖苷。1　仪器和材料Bruker ARX- 30 0核磁共振仪 ,美国 Finnigan公司质谱仪 ,Yanaco显微熔点测定仪。薄层色谱用硅胶 G与柱色谱用硅胶 ( 2 0 0～ 30 0目 )为青岛海洋化工有限公司生产。试剂均为分析纯。三叶青产于广西 ,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定。2　提取和分离三叶青块根 2 .5 kg,碾碎 ,70 %乙醇热回流提取 3次 ,合并提取液 ,回收溶剂后得浸膏。浸膏溶于适量水中 ,依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取 ,回收溶剂后得各自浸膏。醋酸乙酯层浸膏约 5 .9g,用氯仿 -甲醇 ( 1 0 0∶0～ 1 0 0∶ 45 )梯度洗脱 ,每 1 0 0 m L收集 1份 ,编号为 1 ,2 ,3,4…。第 6～ 9号合并得到白色结晶 ( 1 60mg)。第 37～ 46号合并后经硅胶柱色谱分离 ,石油醚 -醋酸乙酯 ( 1 0 0∶ 0～ 5 0∶ 5 0 )梯度洗脱 ,石油醚 -醋酸乙酯 ( 80∶ 2 0 )洗脱部分得到晶体 ( 2 0 mg)。第 40～ 47号 ,1 0 7～ 1 1 9号分别合并 ,进行硅胶柱色谱分离 ,石油醚 -醋酸乙酯梯度洗脱 ,分别得到晶体 ( 2 5 mg)和晶体 ( 5 mg)。第 1 2 0～ 1 2 8号 ,1 30～1 44号 ,1 45～ 1 5 1号分别合并 ,进行硅胶柱色谱分离 ,氯仿 -甲醇梯度洗脱 ,分别得到晶体 ( 5 mg)、晶体 ( 8mg)和晶体 ( 2 0 mg)。3　结构鉴定化合物 :白色片状结晶或无色棱柱状结晶 ,mp1 38℃～ 1 39℃ ,展开剂为氯仿 -石油醚 ( 1∶ 1 )薄层色谱检查为单一斑点。Liebermann- Burchard反应由红色变成蓝色 ,最后变成绿色。 EI- MS( m/z) :41 4,396,381 ,32 9,30 3,2 89,2 73,2 5 5 ,2 1 3。与文献报道<6> β-谷甾醇基本一致。与β-谷甾醇对照品 Rf值一致 ,共熔点不下降。化合物 :黄色针状结晶 ,mp 2 76℃～ 2 78℃。以甲苯 -醋酸乙酸 -甲酸 ( 1 0∶ 8∶ 5 )为展开剂的薄层色谱检查为单一斑点。氯化铝反应呈阳性 ,盐酸 -镁粉反应呈阳性。UV,IR,1H- NMR数据与文献报道 <7>山柰酚一致。化合物 :黄色针状结晶 ,mp 31 2℃～ 31 4℃。以甲苯 -醋酸乙酯 -甲醇 ( 2∶ 2∶ 1 )为展开剂薄层色谱检查为单一斑点。氯化铝反应呈阳性。盐酸 -镁粉反应呈阳性。UVλmax( Me OH) ( nm) :2 5 8,375。样品与槲皮素对照品 Rf值一致 ,其共熔点不下降。化合物 :黄色针状结晶 ,mp1 95℃～ 1 97℃。以甲苯 -醋酸乙酯 -甲酸 ( 2∶ 2∶ 1 )为展开剂薄层色谱检查为单一斑点。氯化铝反应呈阳性。盐酸镁粉反应呈阳性。UVλmax( Me OH) ( nm) :35 0 ,2 80 ,2 65 ,2 4 8,2 0 5。IRνKBrmax cm-1:3370 (缔合 OH) ,2 976( C-CH3 ) ,2 92 6( C- CH3 ) ,1 65 0 ( α,β,α′,β′不饱和酮 )1 5 95 ,1 485 (苯基 ) ,1 2 60 (酚羟基 ) ,890 ( 1 ,2 ,3,5 -取代苯 ) ,81 2 ( 1 ,4-取代苯 )。1H- NMR( DMSO)δ:苷元 :1 2 .5 6,1 0 .83,1 0 .1 1 (各 1 H,单峰 ,三个 OH) ,7.98,6.88(各 2 H,J=9Hz) ,6.41 ,6.2 0 (各 1 H,单峰 ) ;糖基 :0 .98( 3H,双峰 ,鼠李糖基 - CH3 ,J=6Hz)。 13 C- NMR( DMSO)δ:1 77.4( C- 4) ,1 64.1 ( C-7) ,1 61 .2 ( C- 9) ,1 5 9.9( C- 2 ) ,1 5 6.8( C- 5 ) ,1 5 6.5( C- 4′) ,1 33.3( C- 3) ,1 30 .9( C- 2′,6′) ,1 2 0 .9( C- 1′) ,1 1 5 .1 ( C- 3′,5′) ,1 0 4 .0 ( C- 1 0 ) ,1 0 1 .4,1 0 0 .8(糖的端基 C) ,98.7( C- 6) ,98.8( C- 8) ,76.4,75 .8,74.2 ,71 .9,70 .6,70 .3,70 .0 ,68.2 ,66.9(糖基上除端基和- CH3 以外的 C) ,1 7.7(鼠李糖 - CH3 )。 ESI- MS:一级 :5 94.9,二级 :448.8,2 87.1。综合以上数据确定该化合物为山柰酚 - 3- O-新橙皮糖苷。致谢 :沈阳药科大学药物分析教研室 2 0 0 2级专题生张博、张富生等协助完成本实验三叶青的化学成分研究@李瑛琦$沈阳药科大学!辽宁沈阳110016
@陆文超$沈阳药科大学!辽宁沈阳110016
@于治国$沈阳药科大学!辽宁沈阳110016<1>　ChinaPharmaceutica lUniversity.CollectionWordsofChineseMateria Medica(中药辞海).Beijing:ChinaMedico-PharmacologicalScienceandTechnologyPublishingHouse,1996.
<2>　YangX L ,L uoJ,SunS B,et al.Researches on anti-virusfunction ofTetrastigma hemsleyanum.H ubeiTraditChinMed(湖北中医),1989(4):40-41.
<3>　ZiG M,JiL ,HuJC,etal.Studies of anti-inflammatory ac-tion and analysis of hemsley reckvine(Tetrastigma hems-leyanum).ChinTraditH erbDrugs(中草药),1980,11(4):145-146.
<4>　CaiX L .A study ofTetrastigma hemsleyanum on liver func-tions of rabbitby the application of131I-rose bengal.ChinTraditH erbDrugs(中草药),1980,11(1):38-39.
<5>　L iuD,YangJ S.A study on chemical components ofTe-trastigma hemsleyanumDiels etGilg.native toChina.ChinaJ ChinMaterMed(中国中药杂志),1999,24(10):611-612.
<6>　YangD J,LiuH Y,L iX Z,etal.Chemical constituents ofTetrastigma hemsleyanumDiels etGilg..ChinaJ ChinMaterMed(中国中药杂志),1998,23(7):419-421.
<7>　L iuJS,DingJM,HuangM F.Studies on the active princi-ples ofHuanijing(Sophora jop onica).ChinTraditH erbDrugs(中草药),1980,11(4):145-146.versity.Col lectionWordsofChineseMateriaMedica(中药辞海).Beijing:ChinaMedico-PharmacologicalScienceandTechnologyPublishingHouse,1996.
<2>　YangX L ,L uoJ,SunS B,et al.Researches on

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