近年研究表明 ,贝母生物碱是通过选择性地抑制气管Ｍ受体而发挥止咳平喘作用<1 ,2 > 。本实验选取了从浙贝母 (Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ)中提取的贝母甲素(ｖｅｒｔｉｃｉｎｅ)和贝母乙素 (ｖｅｒｔｉｃｉｎｏｎｅ) ,从蒲圻贝母(Ｆ .ｐｕｑｉｅｎｓｉｓ)中提取的蒲贝酮碱 (ｐｕｑｉｅｔｉｎｏｎｅ) ,从川贝母 (Ｆ .ｃｉｒｒｈｏｓａ)和新疆贝母 (Ｆ .ｐａｌｌｉｄｉｆｌｏｒａ)中提取的西贝素 (ｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ)以及西贝素苷 (ｉｍｐｅｒｉ ａｌｉｎｅ 3 β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ)作为研究对象 ,采用经典的Ｓｃｈｉｌｄ方法测定上述各贝母生物碱的ｐＡ2 值。1 材料和方法1 1 药品和试剂五种贝母生物碱 ,分别从贝母鳞茎中经溶剂提取、柱层析分离和光谱鉴定而得<3 5 > ,
贝母甲素、贝母乙素从浙贝母中分离得到 ,西贝素、西贝素苷从川贝母和新疆贝母中分离得到 ,蒲贝酮碱从蒲圻贝母中分离得到 ,经ＨＰＬＣ分析纯度在 95 %以上 ;
卡巴胆碱 (ｃａｒｂａｃｈｏｌ)购于Ｓｉｇｍａ公司 ;消炎痛购于浙江金华制药厂 ,批号 :9483 6。Ｋｒｅｂｓ Ｈｅｎｓｅｌｅｉｒ溶液 (Ｋ Ｈ液 ) :ＮａＣｌ 1 1 8ｇ,ＫＣｌ4 6ｇ,ＭｇＳＯ40 5ｇ ,ＫＨ2 ＰＯ41 0ｇ ,ＮａＨＣＯ32 4 9ｇ,ＣａＣｌ2 1 8ｇ ,Ｇｌｕｃｏｓｅ 1 1 1ｇ。1 2 动 物健康豚鼠 ,雌雄兼用 ,2 5 0～ 3 0 0ｇ,由中国药科大学动物房提供。1 3 豚鼠离体气管标本的制备采用健康豚鼠 ,放血处死 ,立即取出气管 ,置于通有Ｏ2 的Ｋ Ｈ液。将气管剪成螺旋条<6> ,置于盛有 5ｍｌＫ Ｈ液、3 7℃水浴的麦氏浴槽内 ,通以Ｏ2 ,调整前负荷至 1 5ｇ ,用ＨＤ 95Ｓｕｐｅｒｌａｂ系统记录实验过程中张力的变化。气管条稳定 3 0ｍｉｎ ,每 1 0分钟换Ｋ Ｈ液 1次。实验前于浴液中加入 1 μｍ消炎痛 ,阻止前列腺素的生成。1 4 量效曲线的测定根据Ｓｃｈｉｌｄ方法 ,首先在无贝母生物碱存在的情况下 (对照组 )作卡巴胆碱的量效曲线 ,为了确保实验的重现性 ,共得到两条卡巴胆碱的量效曲线(相隔 3 0ｍｉｎ) ,结果发现这两条曲线互相吻合。其后 ,按照从低到高的浓度顺序向浴槽中依次加入不同浓度的各种贝母生物碱 (0 1 ,1 ,1 0 μｍ) ,各生物碱在浴槽中孵育 3 0ｍｉｎ ,测定卡巴胆碱的量效曲线。为保证气管的敏感性 ,每个气管条只对一种生物碱进行试验。实验结果以各浓度卡巴胆碱引起的气管张力占气管最大张力 (对照组 )的百分比表示。1 5 数据处理采用经典的Ｓｃｈｉｌｄ方法计算各贝母生物碱的ｐＡ2 值<7> 。根据Ｓｃｈｉｌｄ方程 :ｌｏｇ(Ｄｒ - 1 ) =ｎｌｏｇ<Ｂ>+ｐＡ2 (Ｄｒ:特定浓度拮抗剂存在下 ,达到一定效应所需激动剂浓度与在没有拮抗剂存在下达到该效应所需激动剂浓度的比值 ,Ｂ :拮抗剂浓度 ,ｎ :Ｓｃｈｉｌｄ回归直线的斜率 ,ｐＡ2 :拮抗剂 受体复合物的平衡解离常数 )。2 实验结果五种贝母生物碱 (0 1 ,1 ,1 0 μｍ)均对卡巴胆碱的量效曲线有不同程度的右移作用。各生物碱的ｐＡ2 值如表 1所示 ,对卡巴胆碱量效曲线的作用及Ｓｃｈｉｌｄ直线如图 1～ 5所示。Ｔａｂ 1 ＴｈｅｐＡ2 ｖａｌｕｅｓｏｆｆｉｖｅｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａａｌｋａｌｏｉｄｓ (ｘ±ｓ ,ｎ =3)Ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｐＡ2Ｖｅｒｔｉｃｉｎｅ 6 91± 0 2 9Ｖｅｒｔｉｃｉｎｏｎｅ 6 73± 0 10Ｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 7 18± 0 0 6Ｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 3β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ 7 0 3± 0 13Ｐｕｑｉｅｔｉｃｉｎｏｎｅ 6 5 2± 0 16—◆—Ｃａｒｂａｒｃｏｌ;—■— 0 .1μｍｏｌ/Ｌｖｅｒｔｉｃｉｎｅ ;—△— 1μｍｏｌ/Ｌｖｅｒｔｉｃｉｎｅ ;— ×— 10 μｍｏｌ/ＬｖｅｒｔｉｃｉｎｅＦｉｇ 1 Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅｓｏｆｃａｒｂａｃｈｏｌｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｒｐｒｅｓ ｅｎｃｅｏｆｖｅｒｔｉｃｉｎｅｉｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ａ) .Ｓｃｈｉｌｄｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖｅｒｔｉｃｉｎｅｏｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ｂ)—◆—Ｃａｒｂａｒｃｏｌ;—■— 0 .1μｍｏｌ/Ｌｖｅｒｔｉｃｉｎｏｎｅ ;—△— 1μｍｏｌ/Ｌｖｅｒｔｉｃｉｎｏｎｅ ;—×— 10 μｍｏｌ/ＬｖｅｒｔｉｃｉｎｏｎｅＦｉｇ 2 Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅｓｏｆｃａｒｂａｃｈｏｌｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｒｐｒｅｓ ｅｎｃｅｏｆｖｅｒｔｉｃｉｎｏｎｅｉｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ａ) .Ｓｃｈｉｌｄｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖｅｒｔｉ ｃｉｎｏｎｅｏｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ｂ)—◆—Ｃａｒｂａｒｃｏｌ;—■— 0 .1μｍｏｌ/Ｌｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ ;—△— 1μｍｏｌ/Ｌｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ ;— ×— 10 μｍｏｌ/ＬｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅＦｉｇ 3 Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅｓｏｆｃａｒｂａｃｈｏｌｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｒｐｒｅｓ ｅｎｃｅｏｆｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅｉｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ａ) .Ｓｃｈｉｌｄｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｍ ｐｅａｒｉａｌｉｎｅｏｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ｂ) .—◆—Ｃａｒｂａｒｃｏｌ;—■— 0 .1μｍｏｌ/Ｌｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 3β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ;— △ — 1μｍｏｌ/Ｌｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 3β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ;— × — 10 μｍｏｌ/Ｌｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 3β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅＦｉｇ 4 Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅｓｏｆｃａｒｂａｃｈｏｌｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｒｐｒｅｓ ｅｎｃｅｏｆｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 3β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｉｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ａ) .Ｓｃｈｉｌｄｒｅ ｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ 3β Ｄ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｏｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ｂ) .3 讨 论贝母甲素、贝母乙素、西贝素、西贝素苷和蒲贝酮碱五种贝母甾体生物碱对卡巴胆碱引起的豚鼠离体气管收缩有较强的抑制作用 ,均能使卡巴胆碱的量效曲线向右移动 ,提示贝母的平喘作用很可能是通过作用于气管壁Ｍ受体而起到舒张气管的作用。同时 ,气管痉挛会导致咳嗽 ,因此贝母碱抑制Ｍ受体的同时也起到了一定的镇咳作用。Ｍ受体主要分布于副交感神经节后纤维所支◆—Ｃａｒｂａｒｃｏｌ;—■— 0 .1μｍｏｌ/Ｌｐｕｑｉｅｔｉｎｏｅ ;—△ — 1μｍｏｌ/Ｌｐｕｑｉｅｔｉｎｏｅ ;— × — 10 μｍｏｌ/ＬｐｕｑｉｅｔｉｎｏｅＦｉｇ 5 Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｃｕｒｖｅｓｏｆｃａｒｂａｃｈｏｌｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｒｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｐｕｑｉｅｔｉｎｏｎｅｉｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ａ) .Ｓｃｈｉｌｄｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｕｑｉｅｔｉｎｏｅｏｎｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｔｒａｃｈｅａｓ(Ｂ) .配的效应器细胞。Ｃａｕｌｆｉｅｌｄ等<8> 研究表明 ,人体内共有五种Ｍ受体亚型 ,分别为 :Ｍ1 、Ｍ2 、Ｍ3、Ｍ4、Ｍ5。其中Ｍ1 受体主要分布于脑、腺体、交感神经节中 ;Ｍ2 受体则分布于菱脑、心脏、腺体和平滑肌中 ,起着调节分泌 ,介导平滑肌收缩等作用 ;Ｍ3受体分布于脑、腺体以及平滑肌中 ;Ｍ4和Ｍ5 受体发现较晚 ,Ｍ4受体主要分布于基底前脑和纹状体中 ,Ｍ5 受体主要分布于黑质中 ,两者在脑内和外周组织均有存在 ,但分布不均 ,所起功能目前还不清楚。由于平滑肌上只存在Ｍ2 和Ｍ3受体 ,所以 ,上述五种贝母生物碱使卡巴胆碱所致收缩的豚鼠离体气管舒张 ,可能是作用于这两种Ｍ受体亚型或是其中之一。由于Ｍ1 、Ｍ3、Ｍ5 受体是通过Ｇｑ/ 1 1 蛋白家族发挥作用 ,而Ｍ2 、Ｍ4则是通过Ｇｉ 和Ｇ0 蛋白发挥作用 ,所以这两类Ｍ受体起作用的方式是不同的 ,前一类最终起作用是依靠ＩＰ3和ＰＫＣ ,使细胞内钙离子浓度上升 ,而后一类Ｍ受体则最终是使细胞内ｃＡＭＰ浓度发生变化而起作用。各贝母生物碱对Ｍ受体亚型的 选择性有待从上述方面加以探讨五种贝母甾体生物碱对豚鼠离体气管条M受体的拮抗作用@周颖$中国药科大学药理学教研室!南京210009
@季晖$中国药科大学药理学教研室!南京210009
@李萍$中国药科大学生药学教研室!南京210009
@姜艳$中国药科大学生药学教研室!南京210009
M受体;;卡巴胆碱;;
离体气管条;;贝母甾体生物碱目的 :研究中药贝母的有效成分贝母甲素、贝母乙素、西贝素、西贝素苷和蒲贝酮碱五种甾体生物碱的平喘机制———对气管M受体的拮抗作用。方法 :制备离体豚鼠气管螺旋条 ,用非选择性M受体激动剂卡巴胆碱引起气管条收缩 ,观察上述五种贝母生物碱的拮抗作用。结果 :预试表明几种贝母生物碱 ,均使卡巴胆碱引起气管条收缩的量效曲线右移。经Schild方法计算 ,五种贝母甾体生物碱的pA2 值分别为 6 91,6 73 ,7 18,7 0 3和 6 5 2。<1> EglenRM ,HarrisGC ,CoxH ,etalCharacteri
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