许多药理学研究表明 ,抑郁症的病因可能与脑内单胺类神经递质 (NE、5 HT、DA、MAO等 )不足或失去平衡有关<1> 。藤黄科金丝桃属植物贯叶连翘提取物有肯定的抗抑郁作用<1.2 > ,一般认为其作用机制可能与传统抗抑郁药物一样是通过抑制单胺类神经递质再摄取<3> 而实现其抗抑郁效应<1.2 > 。遍地金 (Hypericumwightianum)是金丝桃属植物 ,在中国广泛分布 ,而以西南地区贮量最大<4 > ,研究表明其含有与贯叶连翘相似的化学物质 ,但少见有关药理学方面的报道。本实验通过研究遍地金提取物对下丘脑神经末梢去甲肾上腺素再摄取的抑制作用评价其抗抑郁活性。1 材料1 .1 动物与试剂 健康Wistar大鼠 ,♂ ,体重 1 5 0～ 2 0 0g(中科院昆明动物研究所 )。St.John’sWort( 0 .1 5 %Hypericin ,美国Good’NNaturalManufac turingCorp生产 ) ;遍地金提取物 ( 0 .0 2 7%Hyper icin自制 ,原植物采自云南鹤庆 ) <3H> noradrenaline(英国AmershamPharmaciaBiotech生产 ) ;闪烁液(医科院昆明生物研究所提供 ,批号 0 90 770 0 ) ;克 亨氏液每 1 0 0mL中含氯化钠 0 .692g ,氯化钾 0 .0 3 5g ,氯化钙0 .0 2 8g ,磷酸二氢钾0 .0 1 6g ,水合硫酸镁0 .0 2 9g ,碳酸氢钠0 .2 1 g及Glucose0 .2 g。1 .2 仪器 BeckmanLS -60 0液闪仪 ;BeckmanAllega -64R高速冷冻离心机 ;NapcoModel-5 43 0细胞孵育箱。2 方法与结果2 .1 组织悬液的制备 大鼠 60只 ,断头后迅速取出脑组织 ,置于生理盐水冰面上分离下丘脑 ,加入 9倍体积冰冷的蔗糖溶液 ,在 0℃下匀浆 1～ 2min后0～ 4℃下离心 1 0min( 1 0 0 0 g ,3 43 4r·min- 1) ,取出上清液保存在 0℃下用于再摄取试验。2 .2 药液配制 对倍稀释法配制遍地金提取物 6个浓度 :2 4.3 3 ,1 2 .1 7,6.0 8,3 .0 4,1 .5 2 ,0 .76mg·mL- 1及St.John’sWort 6个浓度 :1 4.3 0 ,7.1 5 ,3 .5 8,1 .80 ,0 .90 ,0 .45mg·mL- 1,以上样品均用二甲亚砜溶解。2 .3 测定 取 1 4只试管 ,分别依次编号为A1～A6 ,B1～B6 ,C及D ,按以下方法依次加入 62 .5nmol·L- 13H NA(克 亨氏缓冲液配制 )、溶剂、组织悬液后 ,立即混匀 ,分别在 3 7℃和 0℃下孵育。A1～A6 管 :3H NA 80 0 μL、组织悬液 2 0 0 μL、遍地金提取物 2 0 μL。B1～B6 管 :3H NA 80 0 μL、组织悬液 2 0 0 μL、St.John’sWort 2 0 μL。C管 :3H NA 80 0 μL、组织悬液 2 0 0 μL、溶剂 2 0 μL。D管 :3H NA 80 0 μL、组织悬液 2 0 0 μL、溶剂 2 0 μL。A、B、C管于 3 7℃、D管于 0℃ ,95 %氧气 +5 %二氧化碳环境下孵育 5min ,立即取出离心 1 0min( 4 0 0 0 g ,7476r·min- 1) ,吸出上清液 ,沉淀用 1mLTritonX -1 0 0 +5 0 %EtOH( 1∶4)溶液溶解 ,激烈震荡后倾入闪烁杯中 ,另用 3mL闪烁液分次洗涤管壁后并入闪烁杯内进行计数 ,记录每分钟计数(cpm) (测定 3次 )。2 .4 实验数据处理 以 3 7℃与 0℃孵育的cpm值之差代表重摄取量 (UT) ,按公式 :抑制百分率 =<(正常再摄取量均值 -加药物后再摄取量均值 ) /正常再摄取量均值 >× 1 0 0 %。IC50 =lg- 1
Y为概率单位值 (由P值表查 ) ,Yr 是抑制率为r的概率单位 ,i为相邻对数剂量之差 ,X为对数剂量均数 ,k为参与计数的组数。2 .5 结果表 1 重摄取量的数据测定与计算Tab 1 Thedataofnoradrenalinereuptake管号 浓度 /mg·L-1cpm 抑制百分率 / %A1 4 77.0 6 40 1 3 85 .9A2 2 38.63 40 34 85 .6A3 1 1 9.41 4 50 6 79.0A459.61 4 88973 .6A52 9.80 540 6 66 .3A61 4 .90 62 2 4 54 .9B1 2 80 .3932 1 5 97.0B2 1 4 0 .1 9382 0 88.6B3 70 .0 94433 80 .0B43 4 .80 60 0 1 58.0B51 7.1 6 632 0 53 .5B68.33 80 782 8.9C 0 .0 0 1 0 1 37D 0 .0 0 30 0 4注 :St.John’sWort:IC50 =1 9.41 μg·mL-1 ,95 %可信限 :1 1 .46～32 .89μg·mL-1 ;遍地金提取物 :IC50 =7.50 μg·mL-1 ,95 %可信限 :5.67～ 9.92 μg·mL-13 讨论遍地金提取物在 0 .76～ 2 4.3 3 μg·mL- 1浓度范围内其抑制率为 5 4.9%～ 85 .9% ,抑制率呈一定剂量依赖关系 ;St.John’sWort在 0 .43～ 1 4.3 0 μg·mL- 1浓度范围内其抑制率为 2 8.9%～ 97.0 %。遍地金提取物IC50 为 7.5 0 μg·mL- 1,St.John’sWortIC50 为 1 9.41 μg·mL- 1,分别相当于hypericin0 .2 0 3 μg·mL- 1和 2 .91μg·mL- 1。说明金丝桃植物对下丘脑神经末梢去甲肾上腺素再摄取的抑制作用不仅与金丝桃素含量有关 ,还与植物中所含其它成分相关。0℃孵育后的测定值偏大 ,可能与操作过程中温度控制有关 ,对细胞3H NE的再摄取反应较快 ,在操作温度降至 0℃前可能进行部分再摄取。但因两组样品处理和测定均在相同条件下平行操作 ,所得结果仍然能说明遍地金提取物与对照组St.John’sWort抑制NE再摄取作用遍地 金提取物对大鼠脑突触体<~3H>去甲肾上腺素再摄取抑制作用@赵晶$中国人民解放军成都军区昆明总医院!云南昆明650032
@何洪静$中国人民解放军成都军区昆明总医院!云南昆明650032
@高玮$中国人民解放军成都军区昆明总医院!云南昆明650032
@赵见宝$昆明医学院!1998级实习生
@李红全$昆明医学院!1998级实习生遍地金;;去甲肾上腺素;;重摄取目的:研究遍地金提 取物对大鼠脑突触体去甲肾上腺素重摄取的抑制作用。方法:采用大鼠下丘脑细胞研究遍地金提取物对<3H>标记的去甲肾上腺素重摄取的影响。结果:遍地金提取物0.76mg·mL- 1 与St.John’sWort 0 .87mg·mL- 1 抑制率相当(抑制率为5 3 % ) ,前者的IC50 为7.5 0 μg·mL- 1 ,后者的IC50 为19.41μg·mL- 1 。结论:遍地金提取物在0 .76～2 4.3 3mg·mL- 1 浓度范围内可抑制大鼠下丘脑组织对去甲肾上腺素重摄取。<1> 聂伟,张庆祥,周金黄.金丝桃提取物抗抑郁作用研究与展望.中国实验方剂学杂志,2001,7(1):5961.
<2> 梁巧丽,高宏成.金丝桃素的研究进展.中草药,1999,30(9):705708.
<3> 卢艳花.抗抑郁天然药物的研究进展.中草药,2000,31(9):718720.
<4> 潘映红,郭宝林.国产金丝桃属药用植物资源现状及利用前景.中药材,1993,16(3):1418.医院!云南昆明650032
@赵见宝$昆明医学院!1998级实习生
@李红全$昆明医学院!1998级实习生遍地金;;去甲肾上腺素;;重摄取目的:研究遍地金提 取物对大鼠脑突触体去甲肾上腺素重摄取的抑制作用。方法:采用大鼠下丘脑细胞研究遍地金提取物对<3H>标记的去甲肾上腺素重摄取的影响。结果:遍地金提取物0.76mg·mL- 1 与St.John’sWort 0 .87mg·mL- 1 抑制率相当(抑制率为5 3 % ) ,前者的IC50 为7.5 0 μg·mL- 1 ,后者的IC50 为19.41μg·mL- 1 。结论:遍地金提取物在0 .76～2 4.3 3mg·mL- 1 浓度范围内可抑制大鼠下丘脑组织对去甲肾上腺素重摄取。<1> 聂伟,张庆祥,周金黄.金丝桃提取物抗抑郁作用研究与展望.中国实验方剂学杂志,2001,7(1):5961.
<2> 梁巧丽,高宏成.金丝桃素的研究进展.中草药,1999,30(9):705708.
<3> 卢艳花.抗抑郁天然药物的研究进展.中草药,2000,31(9):718720.
<4> 潘映红,郭宝林.国产金丝桃属药用植物资源现状及利用前景.中药材,1993,16(3):1418.
More abstracts about the 遍地金提取物对大鼠脑突触体[~3H]去甲肾上腺素再摄取抑制作用