紫菀为常用中药 ,具有润肺下气、止咳祛痰之功效 ,主治气逆咳嗽、痰吐不利、肺虚久咳、痰中带血等症。2 0 0 0年版《中国药典》收载其来源为菊科植物紫菀AstertataricusL .f .的干燥根茎及根<1> 。紫菀中主要含有三萜及其苷类、甾类、单萜苷类、肽类、黄酮类、蒽醌类、酚类等化合物<2 6> 。现代药理研究表明紫菀具有祛痰、镇咳的作用 ,且三萜类成分 (紫菀酮为其祛痰的有效成分之一<7> 。由于紫菀酮无紫外吸收 ,因此 ,2 0 0 0年版《中国药典》采用薄层扫描法对其进行含量测定 ,然而薄层扫描法进行含量测定的系统误差较大 ,所以 ,我们尝试用HPLC法 ,采用末端吸收作为检测波长 ,对紫菀中紫菀酮的含量进行测定。1 仪器和材料Agilent 1 1 0 0型高效液相色谱仪 (美国Agilent公司 ,包括 1 1 0 0四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、Agilent化学工作站 )。不同产地或收集地的药材紫菀 ,共 1 2批。由中国药科大学中药学院生药研究室张勉博士鉴定为A .tataricus。药材经粉碎机打粉 ,过 40目筛。
紫菀酮 (自提 ,纯度检测 98%以上 )。乙腈 (色谱纯 ,进口分装 )。2 实验方法和结果2 .1
色谱条件 PolarisC18色谱柱 (4 .6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ;柱温 40℃ ;检测波长 2 0 0nm ;流动相乙腈 ;流速 1 .0mL·min-1。2 .2 标准曲线的绘制及线性范围 称取紫菀酮 1mg ,精密称定 ;用乙腈溶解 ,定容至 1mL量瓶中 ,为A液 ,进样体积分别为 1 ,2 ,3 ,4,5 μL ;从A液中吸取 0 .2mL ,用乙腈定容至 2mL容量瓶中 ,为B液 ,进样体积分别为 1 ,2 ,5 ,1 0 μL ;按上述色谱条件进行HPLC分析 ,以峰面积对进样量进行回归 ,得紫菀酮的线性回归方程及线性范围为 :Y =1 3 72 .9X +5 .5 ,r=0 .9999,线性范围 0 .0 97～ 4.8μg。2 .3 供试品的制备 称取紫菀粉末 1 g ,精密称定 ;精确加氯仿 2 0mL ,精密称定 ;置 40℃恒温水浴 ,温浸 1h ,超声 1 5min ,称重 ,加氯仿补足重量 ;过滤 ,精密吸取续滤液 1 0mL ,减压回收至干 ,用氯仿溶解 ,转移 ,定容至 2mL ;用 0 .45 μm滤膜过滤 ,制成供试品溶液。2 .4 精密度试验 将 6号样品制成的供试品溶液按 2 .1项下色谱条件进行HPLC分析 ,连续进样 5次 ,每次进样体积 5 μL ,紫菀酮峰面积的RSD为 0 .82 % (n=5 )。2 .5 重现性试验 精密称定 6号样品 1g,共 5份 ;按 2 .3项下进行制备 ,按 2 .1项下色谱条件进行HPLC分析 ,进样体积 5 μL ,结果样品中紫菀酮含量的RSD =1 .7% (n =5 ) ,表明其重现性较好。2 .6 加样回收率试验 精密称定 6号样品 0 .5 g ;精密加入紫菀酮 0 .0 6mg,共 4份 ,按 2 .3项下进行制备 ,按 2 .1项下色谱条件进行HPLC分析 ,进样体积 5 μL ,结果紫菀酮加样回收率为 95 .6% (RSD =1 .0 % ,n =4)。2 .7 稳定性试验 将 6号样品在 4℃下保存 ,分别在 0 ,2 ,4,6,8,1 1h ,1 ,2 ,3d测定 ,结果无明显差异(RSD =2 .7% ,n =9) ,表明其稳定性较好。2 .8 样品测定 按 2 .1项下色谱条件进行HPLC分析 ,进样体积 5 μL ,按外标一点法计算百分含量 ,测定结果见图 1 ,2和表 1。图 1 对照品HPLC图谱1.紫菀酮 (图 2同 )图 2 紫菀药材HPLC图谱3 讨论3 .1 由于紫菀酮无紫外吸收 ,药典采用薄层扫描方法对其进行含量测定 ,测定步骤繁琐 ,误差较大 ,另外 ,与紫菀酮结构近似 ,极性相差不大的化合物 ,如木栓酮 ,在薄层色谱中具有相同的Rf值 ,颜色反应一致 ,极易造成分析结果的误差 ,我们采用HPLC法 ,末端吸收检测 ,结果比较理想。表 1 不同来源商品药材紫菀中紫菀酮的含量编号收集地产地含量 /mg·g-11香港 1.952四川成都 1.843上海河北安国 1.6 14河南郑州四川 1.725安徽亳洲安徽 1.4 26北京安徽 1.4 67江西樟树河北 1.4 38广西南宁河南 1.109广东广州 1.4 010河北安国 (自采 )河北 1.5411河北安国 1.1812陕西西安 0 .723 .2 2 0 0 0年《中国药典》(一部 )中 ,紫菀 <样品溶液制备 >项中 ,需将样品超声 1h ,为此 ,我们考察了不同超声时间对含量测定的影响 ,结果表明超声 1 5 ,3 0min ,1h无差异 ,含量均为 1 .2 7mg·g-1,所以 ,我们选择了超声 1 5min。3 .3 我们对中国紫菀的主流商品药材进行了测定 ,其紫菀酮含量均较《中国药典》薄层扫描法规定的0 .2 %要低。这可能是因为薄层扫描法无法排除与紫菀酮类似化合物的干扰 ,造成紫菀酮含量偏高 ,我们采用与《中国药典》相同的薄层层析条件 ,证明了这一点。HPLC法测定紫菀中紫菀酮的含量@吴弢$上海中药标准化研究中心!上海200032,
上海中医药大学,上海200032
@王国艳$上海第二医科大学化学教研室!上海200025
@侴桂新$上海中药标准化研究中心!上海200032,上海中医药大学,上海200032
@谷丽华$上海中药标准化研究中心!上海200032,上海中医药大学,上海200032
@王峥涛$上海中药标准化研究中心!上海200032,上海中医药大学,上海200032
@胡之璧$上海中药标准化研究中心!上海200032,上海中医药大学,上海200032紫菀 ;;紫菀酮;;
含量测定;;HPLC目的:测定不同收集地及产地紫菀中紫菀酮的含量,以期评价紫菀药材的质量。方法:采用HPLC法直接测定。色谱柱PolarisC18柱,流动相为乙腈,流速1 .0mL·min- 1 ,检测波长2 0 0nm。结果:测定了1 0个地区的商品紫菀,紫菀酮含量在0 .0 6 %～0 .1 8%。结论:所测样品中紫菀酮含量均低于2 0 0 0年版《中国药典》(一部)规定紫菀酮的最低限度<1> 中国药典.一部.2000.281.
<2> 卢艳花,王峥涛,徐珞珊,等.紫菀中的多元酚类化合物.中草药,2002,33(1):17.
<3> AkihisaT ,KimuraY ,TaiT ,etal.NewPentapeptidesfromAstertataricusL ..ChemPharmBull,1999,47(8):1161.
<4> ChengDL ,YuS ,HartmannR ,etal.NewPentapeptidesfromAstertataricus.Phytochemistry,1996,41(1):225.
<5> MoritaH ,NagashimaS ,TakeyaK ,etal.CyclicPeptidesfromHigherPlants.XIIStructureofANewPeptide,AstinJ ,fromAstertataricus.ChemPharmBull,1995,43(2):271.
<6> 高金海,王红武,宋国强,等.NMR研究紫菀中两个酚性化合物的结构及立体化学.波谱学杂志,1994,11(4):391.
<7> 卢艳花,戴 岳,王峥涛,等.紫菀祛痰镇咳作用有效部位及有效成分,中草药,1999,30(5),360国家中药管理局重点学科项目 ( 10 0 80 2 1);;
上海市重点学科 (重中之重 )项目测定。色谱柱PolarisC1 8柱,流动相为乙腈,流速1 .0mL·min- 1 ,检测波长2 0 0nm。结果:测定了1 0个地区的商品紫菀,紫菀酮含量在0 .0 6 %～0 .1 8%。结论:所测样品中紫菀酮含量均低于2 0 0 0年版《中国药典》(一部)规定紫菀酮的最低限度<1> 中国药典.一部.2000.281.
<2> 卢艳花,王峥涛,徐珞珊,等.紫菀中的多元酚类化合物.中草药,2002,33(1):17.
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<6> 高金海,王红武,宋国强,等.NMR研究紫菀中两个酚性化合物的结构及立体化学.波谱学杂志,1994,11(4):391.
<7> 卢艳花,戴 岳,王峥涛,等.紫菀祛痰
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