本室既往研究发现富硒灵芝对实验性大鼠脑梗塞引起的损伤及缺血再灌注损伤均有保护作用<1,2 > ;并能抑制血小板聚集和血栓形成<3> ;缺血性心脑血管是老年人的多发病 ,随着人类进入了老龄化 ,衰老与抗衰老是人们目前最关注的问题 ,衰老、老年病的发生与免疫功能密切相关<4 > ;本室在前期工作的基础上又研究了富硒灵芝对小鼠免疫功能的影响 ,现报告如下 :1 实验材料富硒灵芝菌丝体 (含硒 4 32ng/g)和正常灵芝菌丝体 (由课题组自制 )BALB/C小鼠 (由白求恩国际和平医院提供 ) 3H -TdR (中科院上海原子能研究所生产 )PHA (广州医药工业研究所 )。2 方法与结果2 1 溶血素抗体测定2 1 1 取BALB/c小鼠 4 0只 (体重 2 0± 2g雌雄各半 )随机分为四组 ,分别为正常对照组、正常灵芝菌丝体组、富硒灵芝菌丝体组和维生素E组 ;于灌胃给药 3d后给小鼠腹腔注射 2 0 %的绵羊红细胞 0 2mL连续 4d ,连续给药 10d后眼球放血分离血清备用。2 1 2 将 1∶5 0 0稀释的小鼠血清 0 5mL与 1%的绵羊红细胞 0 5mL放置到试管中 37℃水浴 15min再加入 1∶10的豚鼠血清 0 5mL和生理盐水 0 5mL继续水浴 30min ,最后 2 0 0 0r/min离心 10min取上清 ,72 1分光光度计 5 40nm波长测光密度 (OD)值 ,结果见表 1,从结果可见 ,富硒灵芝与正常对照和正常灵芝组比较明显提高小鼠溶血素抗体的产生(P <0 0 1)。2 2 淋巴细胞转化试验2 2 1 取 4 0只BALB/c小鼠 ,分组要求同溶血素抗体测定 ,连续给药 10d后在戊巴比妥麻醉下无菌操作颈动脉放血肝素抗凝。2 2 2 取 0 1mL小鼠的抗凝血到含PHA的 1ml16 40培养液的青霉素小瓶中 ,每个小鼠的抗凝血做 3瓶 ,无菌操作盖好瓶盖 ,放置 37℃培养 5 6h后每瓶加入3H—TdR1uci,继续培养 16h。2 2 3 培养结束后将培养物移到离心管内并用 3%冰醋酸 6mL分两次冲洗培养瓶洗液移入离心管2 0 0 0r/min ,10min去上清 ,用 5mL 13%的冰醋酸 20 0 0r/min ,10min两次 ;沉渣加H2 O2 —滴 85℃水浴15min ,再加入浓甲酸 0 5mL继续 30min使沉淀物完全消化溶解。2 2 4 将液体移到测量杯内 80℃干烤至 0 1mL加闪烁液 5mL ,用液体闪烁计数器测定每分钟脉冲数(cpm) ,每个小鼠的三份样品求出平均值 ,结果见表2。从结果可以看出富硒灵芝与正常对照和正常灵芝比较明显提高小鼠的淋巴细胞转化率 (P <0 0 1)。2 3 巨噬细胞吞噬功能测定取 4 0只BALB/c小鼠 ,分组要求同前面 ,连续给药 10d后给小鼠腹腔注射 5 %无菌淀粉 0 2mL ,9h后再注射 2 %鸡红细胞 1mL ,6 0min后断脊髓致死取腹腔液推片Wright -Giemsa氏染色 ,显微镜下观察并计算吞噬率和吞噬指数 ,结果见表 3。由结果可见富硒灵芝与正常对照和正常灵芝比较明显的提高小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数 (P <0 0 1)。表 1 富硒灵芝对小鼠溶血素抗体产生影响 ( X±s)组别 剂量(g/kg)动物数(只 ) OD值正常对照组生理盐水 10 15 0 4± 16 2正常灵芝菌丝体组 0 2 10 180 7± 18 6 富硒灵芝菌丝体组 0 2 10 2 0 4 5± 2 2 4 △维生素E组 0 2 10 2 10 1± 2 0 8 △△ 与正常对照比较 P <0 0 5 P <0 0 1与正常灵芝组比较△P <0 0 5 △△P <0 0 1表 2 富硒灵芝对小鼠外周血淋巴细胞转化的影响 ( X±s)组别 剂量(g/kg)动物数(只 ) cpm正常对照组生理盐水 10 2 0 2 0± 49 3正常灵芝菌丝体组 0 2 10 3 75 0± 2 8 6 富硒灵芝菌丝体组 0 2 10 469 9± 88 9 △△维生素E组 0 2 10 467 2± 88 5 △△ 与正常对照比较 P <0 0 5 P <0 0 1与正常灵芝组比较△P <0 0 5 △△P <0 0 1表 3 富硒灵芝对小鼠巨噬细胞吞噬功能溶血素抗体的影响 ( X±s)组别 剂量(g/kg)动物数(只 ) 吞噬率 吞噬指数正常对照组生理盐水 10 10 70± 5 50 0 2 4± 0 15正常灵芝菌丝体组 0 2 10 31 2 5± 8 6 8 0 4 5± 0 16 富硒灵芝菌丝体组 0 2 10 38 35± 6 4 0 0 51± 0 14 维生素E组 0 2 10 30 0 8± 3 0 5 0 4 6± 0 13 与正常对照比较 P <0 0 5 P <0 0 1与正常灵芝组比较△P <0 0 5 △△P <0 0 13 讨论巨噬细胞是非特异性免疫的一部分而又是重要的抗原呈递细胞 ;溶血素抗体能反应小鼠的特异性体液免疫 ;而淋巴细胞转化能反应小鼠的特异性细胞免疫。由实验结果得出结论富硒灵芝与正常对照组和正常灵芝组比较既提高了小鼠的非特异性免疫又提高了特异性免疫 ;既增强了小鼠的特异性的体液免疫又增强了细胞免疫 (P <0 0 1)。近几年来微量元素对人体的健康特别对人类的衰老及寿命的影响引起了人们的普遍注意 ,硒是某些酶的组成部分 ,在代谢中传递电子 ,硒又是免疫佐剂能增强人体抗力<5> 。我室培养出的富硒灵芝 ,兼有灵芝与硒之长 ,且小鼠急性毒LD50 未测出 ,灌胃给药的最大给药量为 8 6g/kg ,表明其毒性反应很小 ,免疫增强作用比正常灵芝明显 ,因此富硒灵芝是既又药用又有保健作用的佳品富硒灵芝菌丝体对小鼠免疫功能的影响@石玉娥$河北医科大学中医学院!050091
@李素敏$河北医科大学第二医院
@王鑫国$河北医科大学中医学院!050091
@牛丽颖$河北医科大学中医学院!050091
@王菊素$河北医科大学中医学院!050091
@韩晓辉$河北医科大学中医学院!050091
@马志红$河北医科大学中医学院!050091
@崔艳$河北医科大学中医学院!050091富硒灵芝;;正常灵芝;;淋巴细胞转化;;溶血素 ;;吞噬率;;吞噬指数应用自制的富硒灵芝菌丝体给BALB/C小鼠灌胃,观察富硒灵芝菌丝 体对小鼠免疫功能的影响,更进一步了解富硒灵芝的应用价值。试验结果表明,富硒灵芝菌丝组与 正常对照组和正常灵芝菌丝组比较明显的提高了小鼠的巨噬细胞的吞噬功能、淋巴细胞转化率和溶 血素抗体的产生,即能增强小鼠的非特异免疫又能增强小鼠的特异性免疫<1>王鑫国等.富硒灵芝对大鼠不全脑缺血再灌注损伤的保护作用
.中药药理与临床,1990,15(1):25.
<2>石玉娥等.富硒灵芝对实验性大鼠脑梗塞引起损伤的影响.河北中医药学报,1998,13(4):27.
<3>杨作成等.富硒灵芝对血小板聚集功能的影响.中国中医药信息杂志,1999,6(5):29.
<4>刘俊达.衰老的免疫功能变化及抗衰老药物的研究 专题笔谈.
<5>丁克祥.硒的抗衰老作用及其机理初探.实用老年医学,1994,8(1):29.
@王鑫国$河北医科大学中医学院!050091
@牛丽颖$河北医科大学中医学院!050091
@王菊素$河北医科大学中医学院!050091
@韩晓辉$河北医科大学中医学院!050091
@马志红$河北医科大学中医学院!050091
@崔艳$河北医科大学中医学院!050091富硒灵芝;;正常灵芝;;淋巴细胞转化;;溶血素 ;;吞噬率;;吞噬指数应用自制的富硒灵芝菌丝体给BALB/C小鼠灌胃,观察富硒灵芝菌丝 体对小鼠免疫功能的影响,更进一步了解富硒灵芝的应用价值。试验结果表明,富硒灵芝菌丝组与 正常对照组和正常灵芝菌丝组比较明显的提高了小鼠的巨噬细胞的吞噬功能、淋巴细胞转化率和溶 血素抗体的产生,即能增强小鼠的非特异免疫又能增强小鼠的特异性免疫<1>王鑫国等.富硒灵芝对大鼠不全脑缺血再灌注损伤的保护作用.中药药理与临床,1990,15(1):25.
<2>石玉娥等.富硒灵芝对实验性大鼠脑梗塞引起损伤的影响.河北中医药学报,1998,13(4):27.
<3>杨作成等.富硒灵芝对血小板聚集功能的影响.中国中医药信息杂志,1999,6(5):29.
<4>刘俊达.衰老的免疫功能变化及抗衰老药物的研究 专题笔谈.
<5>丁克祥.硒的抗衰老作用及其机理初探.实用老年医学,1994,8(1):29.
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