冬虫夏草为冬虫夏草属CordycepssinensisSacc侵染蝠蛾属多种幼虫后形成的菌虫复合体 ,主产于西藏、青海、四川、云南等省。根据道地药材产地不同 ,商品冬虫夏草药材又可分为藏草 (主要产于青海、西藏 )、川草 (主要产于四川 )和滇草 (主要产于云南 )。 2 0世纪 80年代我国成功开发出冬虫夏草的人工代用品虫草菌丝体 ,并被部颁药品标准收载 ,在一定程度上缓解了对天然虫草资源的依赖和破坏。本文采用薄层色谱法和高效液相色谱法 ,对比分析了冬虫夏草道地药材与人工虫草菌丝体化学成分的差异 ,旨在为冬虫夏草药材的品质评价及合理应用提供新的依据。1 仪器与药品1 1 仪器与试剂 美国Waters公司 4 84液相色谱仪 ,RBQ - 1型铺板器 ,硅胶GF2 54 (青岛海洋化工厂 ) ;腺苷对照品购自中国药物生物制品检定所。所用试剂均为分析纯。1 2 实验材料 金水宝人工虫草菌丝编为 1号 ,云南丽江为 2号 ,四川康定为 3号 ,青海海南为 4号 ,青海玉树为 5号 ,西藏那曲为 6号。以上样品经肖小河研究员鉴定。2 方法与结果2 1 薄层层析2 1 1 对照品溶液的制备 :取腺苷对照品适量 ,用90 %甲醇配成 1mg/ml的对照品溶液。2 1 2 供试品溶液的制备 :取样品粗粉 1g ,置具塞锥形瓶中 ,加 90 %甲醇 4 0ml,密塞 ,摇匀 ,加热回流 30min ,滤过 ,滤液浓缩至干 ,残渣以 90 %甲醇 1ml使溶解 ,作为供试品溶液。2 1 3 薄层色谱条件及结果 :薄层板 :含 4 %磷酸氢二钠的羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶GF2 54 ,10 5℃活化 1h ;展开剂 :氯仿 乙酸乙酯 异丙醇 水 浓氨试液 (8∶2∶6∶0 3∶0 2 ) ;点样量 :5 μl;展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯 (2 5 4nm )下检视。结果表明不同来源的冬虫夏草薄层色谱有一定差异 ,但均含腺苷 (见图 )。图 不同来源冬虫夏草的薄层层析结果2 2 腺苷含量测定〔1〕2 2 1 色谱条件 :ECONOSPHEREC185 μ(4 6×2 5 0mm )为固定相 ,磷酸盐缓冲液 (pH 6 5 ) <取0 0 1mol/L磷酸二氢钠 6 8 5ml与 0 0 1mol/L磷酸氢二钠 31 5ml混合 (pH 6 5 )〗 甲醇 (17∶3)为流动相 ,流速 1 0ml/min ,检测波长为 2 6 0nm。理论板数按对照品峰计算 ,应不低于 2 0 0 0。2 2 2 线性关系考察 :腺苷对照品置同一容量瓶中 ,加 90 %甲醇溶解 ,稀释 ,使腺苷浓度分别为2 5 2、5 0 4、10 0 8、2 0 16、5 0 4 0 μg/ml,10 μl进样测定。回归方程为Y =9135 5 6 2 13X - 1792 94 ,r =0 9993,线性范围 0 0 83～ 0 4 98μg。2 2 3 精密度试验 :取对照品溶液 ,重复进样 5次 ,每次 10 μl,对照品峰面积积分值的RSD为0 13%。2 2 4 稳定性试验 :取供试品溶液在 0、2、4、6、2 4h分别进样 10 μl,记录峰面积 ,结果 5次进样腺苷峰面积积分值RSD为 1 0 5 %。2 2 5 重复性试验 :取 6号样品 ,按含量测定项下方法测定 5次 ,结果腺苷平均含量为 0 3318mg/g ,RSD为 1 5 7% (n =5 )。2 2 6 加样回收率试验 :取已知含量的 6号样品0 5 g ,添加腺苷对照品适量 ,按含量测定项下方法测定 ,5次测定的结果为 97 5 6± 1 78%。2 2 7
含量测定 :分别取 1～ 6号药材粉末 (过三号筛 )约 0 5 g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加90 %甲醇 10ml,密塞 ,摇匀 ,加热回流 30min ,放冷 ,再称定重量 ,用 90 %甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤 表 冬虫夏草中腺苷含量测定结果 (n =2 )来源 12 3 45 6腺苷含量 (mg/ g) 0 2 65 2 0 10 75 0 112 3 0 2 8740 2 9780 3 3 18过 ,取续滤液 ,即得。 10 μl进样 ,按上述色谱条件测定 ,外标一点法计算含量 ,结果见表。3 讨论天然野生虫草与人工虫草菌丝体的薄层色谱有一定差异 ,但二者之间的主要化学成分腺苷含量基本一致。值得关注的是 ,市面上天然野生虫草的价格是人工虫草菌丝体的近百倍 ,从化学成分角度讲 ,天然野生虫草的价格远远背离其实际的质量价值 ;从保护生物资源和生态环境的角度出发 ,人工虫草菌丝的开发利用应进一步加强。试验结果提示 ,不同来源道地药材虫草之间薄层色谱差异较小 ,但主要化学成分腺苷含量有一定差异。藏草腺苷含量高于川草和滇草 ,这从化学成分角度支持了藏草优于川草和滇草的说法。冬虫夏草道地药材与人工虫草菌丝体的分析比较@赵祥军$解放军302
医院药学部!北京100039
@邱瑞桂$解放军第413医院药剂科!舟山316000
@袁海龙$解放军302医院药学部!北京100039
@肖小河$解放军302医院药学部!北京100039冬虫夏草;;质量评价采用薄层色谱和高效 液相色谱法对冬虫夏草与人工虫草菌丝体进行了分析比较,为合理用药提供了依据。1 夏文娟,等中国中药杂志,2001,26(8)∶540
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